Выделение и характеристика кор-частиц хроматина из плесневого гриба NEUROSPORA CRASSA Ананьева, Наталия Михайловна

brief description

Ананьева,НаталияМихайловна.Выделениеихарактеристикакор-частицхроматинаизплесневогогрибаNEUROSPORACRASSA: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1985. - 194 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 4
РЕЗУЖЬТАТЫ И М 0БСУЗЩ1НИЕ 3.1.Выделениекор-частицхроматинаизплесневогогрибаNeurosporacrassa. . . . . ...... 3.1.1.ВыделениепрепаратахроматинаизNeurosporacrassa3.1.2. ЭлектросбореTH4ecj<He исследования белковхроматинаиз K;-crassa..... З.Г.З. Нуклеосомная организацияхроматинаIT.'crassa3.1.4. Получение препаратакор-частицгриба. . . ....

стр. 66
исследования роли некор-частицвхроматиненизших эукариотов. Для выявления возможных особенностей в строениихроматинагрибовмы исследовали структурухроматинадругого их представи­ теля -плесневогогрибаNeurosporacrassaся классическим объектом исследования биологов. Были сформулированы следующие

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Ананьева, Наталия Михайловна
СПИССК СОКРАЩЕНИЙ
В.ВЕ ДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Структура нуклеосом и подходы к её изучению
1.1.1. Топография гистонов и ДНК в составе кор-частиц
1.1.2. N- и С-концевые домены гистонов. Структурные различия и роль в поддержании структуры ДНП.
1.1.2.1. Общие закономерности строения гистонов - наличие двух структурно различных частей молекул
1.1.2.2. Функциональная роль N - и С-кон-цевых доменов молекул гистонов в составе ДНП.
1.2. Хроматин низших эукариотических организмов.
1.2.1. Гистоны низших эукариотических организмов
1.2.2. Нуклеосомная организация хроматина низших эукариотов
1.2.2.1. Вариабельность длины нуклеосом-ного повтора ДНК
1.2.2.2. Некоторые особенности структуры хроматина дрожжей
1.3. Краткие выводы и постановка экспериментальных задач.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Объект исследования . %.
2.2. Выращивание Neurospora crassa
2.3. Препаративные методы.
2.3.1. Выделение кор-частиц хроматина из Neurospora crassa.
2.3.1.1. Получение препарата ядер.
2.3.1.2. Контроль чистоты и целостности препарата ядер
2.3.1.3. Получение препарата хроматина.
2.3.1.4. Выделение кор-частиц хроматина
2.3.2. Выделение кор-частиц из эритроцитов курицы
2.3.2.1. Получение препарата ядер из эритроцитов курицы . -. ;
2.3.2.2. Получение препарата хроматина, лишенного гистонов HI и Н
2.3.2.3. Выделение кор-частиц
2.3.3. Обработка кор-частиц трипсином
2.3.4. Обработка кор-частиц дезоксирибонуклеазой I
2.3.5. Получение меченных ^Р кор-частиц.
2.3.6. Препаративный электрофорез ДНП.
2.317. Выделение суммарного препарата гистонов из ^
Neurospora crassa
2.3.8. Фракционирование суммарных препаратов гис- „ тонов.
2.3.9. Очистка гистонов Н2В
2.4. Электрофоре тиче с кие методы исследования.
2.4.1. Приготовление образцов ДНК для электрофореза
2.4.2. Электрофорез ДНК в агарозном геле
2.4.3. Определение длины нуклеосомного повтора методом электрофореза ДНК в агарозном геле.
2.4.4. Электрофорез ДНК в ПААГ в денатурирующих условиях.
2.4.5. Высокоразрешающий электрофорез ДНК в ПАЯ
2.4'.5.1. Проведение электрофореза.
2.4.5.2. Авторадиографирование геля
2.4.6. Приготовление образцов белка для электрофореза . Стр.
2.4.7.Диск-электрофорез гистонов в присутствии додецилсульфата натрия.
2.4.8.Электрофорез гистонов в блоке ПАЯ1 в при- п ■ сутствии мочевины.
2.4.9.Двумерный электрофорез гистонов'в ПААГ
2.5. Аналитические методы исследования
2.5.1.Определение количественного содержания ДНК в материале.
2.5.2.Количественное определение содержания белка
2.5;З.Седиментациошшй анализ.
2.5.4'.Определение аминокислотного состава белков и пептидов.
2.5.5.Определение N -концевых аминокислот белков и пептидов
2.5.5.1. Дансилирование белков и пептидов
2.5.5.2. Тонкослойная хроматография дан- QO сильных производных аминокислот.
2.5.6.Определение С-концевых аминокислот белка
2.5.7.Гидролиз гистона Н2В трипсином.
2.5.8.Метод пептидных карт в тонком слое целлюлозы 94 2.5.9.Элюция пептидов с целлюлозы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОВСУЩЕНИЕ
3.1. Выделение кор-частиц хроматина из плесневого гриба „
Neurospora crassa . . . 9Ъ
3.1.1. Выделение препарата хроматина из Neurospora qfi crassa .yt>
3.1.2. Электройоретичесдие исследования белков тпт хроматина из HYcrassa - - - iUJ
3.1.3. Нуклеосомная организация хроматина N.'crassa
3.1.4. Получение препарата кор-частиц гриба. . . . Ю7 3.2. Характеристика выделенного препарата кор-частиц из Neurospora crassa
3.2.1. Электрофоретическое исследование белков препарата кор-частиц . III
3.2.2. Определение коэффициента седиментации препарата кор-частиц хроматина из Neurospora crassa . .ИЗ
3.2.3. Чувствительность выделенного препарата кор- ' частиц к действию ДНКазы I.
3.3. Исследование процесса ограниченного протеолиза кор-частиц из Neurospora crassa . '.
3.3.Г. Электрофретическое исследование гистонов протеолизованных кор-частиц.
3.3.2. Исследование влияния ионной силы раствора . на скорость седиментации интактных и протеолизованных кор-частШ.
3.4. Исследование особенностей первичной структуры Б2В • Neurospora crassa
3.4.1. Выделение суммарного препарата гистонов п Neurospora crassa
3.4.2. Фракционирование суммарного препарата гис- тонов
3.4.3. Аминокислотный, N- и С-концевой анализ . ТОА препарата гистона Н2В N.crassa.
3.4.4. Сравнительное изучение структуры гистонов В2В N.crassa и тимуса теленка методом пептидных карт
3.4.41.1. Двумерное разделение продуктов триптического гидролиза гистонов Н2В в тонком слое целлюлозы.
3.4.4.2. Изучение аминокислотного состава и "'. N -концевых аминокислот триптических пептидов Б2В из N.crassa и тимуса теленка
3.5. Изучение продуктов гидролиза нуклеосомной ДНК дезоксирибонуклеазой 1с помощью высок©разрешающего электрофореза
3.6. Краткое обсуждение полученных результатов
ВЫВОДЫ.