Взаимодействие аннексинов с белковыми компонентами мембран саркоплазматического ретикулума Красавченко, Кирилл Сергеевич

brief description

Красавченко,КириллСергеевич.Взаимодействиеаннексиновсбелковымикомпонентамимембрансаркоплазматическогоретикулума: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 2005. - 128 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 7
ыембранны.ми везикулами, ие содержаии1мибелков; оценить влияниеаннексиновЛ6 н Л5 на активность основного ферментасаркоплазматическогоретикулума- Са^^^-зависимой ЛТФазы; провести 1 Н КбелковмембрансаркоплазматическогоЮСретикулума, связывающихся с аппекснном Лб. В связи с конкретностью задач,

стр. 16
Лнпокортии 1, аннексии 1 Кальпактин 1, аннексии IIАннексинIII Аннексии 1'АннексинV'АннексинVI Синсксин,аннексинVIIАннексинVIIIАннексинXXXI Аннексии А5АннексинА6 Аннексии А7АннексинА8 Аннексии А9АннексинА10АннексинА11АннексинА12АннексинЛ12АннексинXI Аннексии X1I1АннексинIX Аннекснн

стр. 100
бслкоЕ$-мн1иеней Лб два метода: лиганд-блоттииг для интегральныхбелкови аффгннгую хроматографию для ггериферическпхбелков. 4.7.1. Поиск бслков-мишснсй среди интегральныхбелковмембранретикулумалиганд-блотт1П1га, препарат интегральныхбелковмембрансаркоплазматическогоПри проведениисаркоплазматическогоретикулумаразделяли электрофоретичсски п переносилибелковыеполосы па 1П1троцеллюлознуюмембрану....

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Красавченко, Кирилл Сергеевич
1. ВВЕДЕНИЕ.
2. OIHOl' ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Липск'сппм.
2.1.1. Общее строение аннексинов.
2.1.2. Распространение в природе.
2.1.3. Номенклатура.
2.1.4. Свойства аннексинов.
2.1.4.1. Взаимодействие аннексинов с ионами кальция.
2.1.4.2. Взаимодействие аннексинов с ионами других металлов.
2.1.4.3. Взаимодействие аннексинов с липидными бмслоямн.
2.1.4.4. Взаимодействие аннексинов с белками.
2.1.5. Возможные биологические функции аннексинов.
2.1.5.1. Аннексины в мембранном траффике и организации структурных доменов мембран.
2.1.5.2. Аннексины и ионные каналы.
2.1.5.3. Функции аннексинов вне клетки.
2.1.6. Аннексии: А5.
2.1.7. Аннексии А6.
2.2. Саркоилазматнческнн peiнкулум.
2.2.1. Са2*-ЛТРаза.
2.2.2. Рианодиновый рецептор.
2.2.3. Другие белки саркоплазматичсского ретикулума.
2.2.4. Аннексины в саркоплазматическом ретикулуме.
3. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ.
3.1. Материалы.
3.1.1. Объект исследования.
3.1.2. Антисыворотки.
3.1.3. Белковые маркеры.
3.2. Общие параметры.
3.2.1. Температурные условия.
3.2.2. Центрифугирование.
3.3. Вспомогательные методы.
3.3.1. Приготовление липосом.
3.3.2. Концентрирование белков в полиэтиленгликоле.
3.3.3. Мечение аннексинов флуоресцеин-изотиоцианатом.
3.4. Нрепарлтшшые методы.
3.4.1. Выделение фрагментов сарконлазматического ретикулума из скелетных мышц кролика.
3.4.2. Выделение периферических белков сарконлазматического ретикулума.
3.4.3. Выделение суммарных аннексинов из скелетных мышц кролика.
3.4.4. Выделение суммарных аннексинов из печени кролика.
3.5. Хроматографнчсасне методы.
3.5.1. Гель-фильтрация аннексинов.
3.5.2. Аффинная хроматография.
3.6. Элсктрофорегическис методы.
3.6.1. Приборы для электрофореза.
3.6.2. Приготовление и заливка гелей.
3.6.3. Приготовление проб.
3.6.4. Режим проведения электрофореза.
3.6.5. Фиксация и окрашивание гелей после электрофореза.
3.6.5.1. Окраска ПЛЛГ при помощи Кумасси R-250.
3.6.5.2. Окраска белков при помощи нитрата серебра.
3.6.6. Высушивание гелей.
3.7. Пммунохнмнчсскпс методы.
3.7.1. Состав фосфатно-солевого буфера.
3.7.2. Определение рабочего титра антител и их специфичности.
3.7.2.1. Раститровка антител.
3.7.2.2. Оценка специфичности антител.
3.7.3. Метод иммуноблотинга.
3.7.3.1. Фракционирование образцов.
3.7.3.2. Перенос фракций из геля на фильтр.
3.7.3.3. Иммунное выявление антигенов на фильтре.
3.7.4. Лиганд-блотинг.
3.8. Аналитические методы.
3.8.1. Оценка гидрофильно-гидрофобных свойств белков.
3.8.2. Определение опосредуемой аннексинами агрегации липосом.
3.8.3. Определение концентрации неорганического фосфата.
3.8.4. Определение активности Са2'-ЛТФазы.
3.8.5. Определение концентрации белка.
3.8.5.1. Определение концентрации белка биуретовым методом.
3.8.5.2. Определение концентрации белка по модифицированному методу Брэдфорд.
3.8.5.3. Определение концентрации белка в пробе с использованием амилового. черного.
4. н; ши.тлты II оксуждмии-:.
4.1. Oiimimiiuiiiiii мсгоднкн выделении аннсксниов.
4.1.1. Оптимизация методики получения бесклеточных экстрактов из скелетных мышц.
4.1.1.1. Ионообменная хроматография аппекеппов.
4.1.2. ВЕлделение аннексинов из печени.
4.1.2.1. Получение и характеристика препарата суммарных анпекеннов.
4.1.2.2. Получение очищенных препаратов аннексинов Л5 и А6.
4.2. Влшпшс попов двухвалентных металлов па опосредуемую аннсксппамн агрегацию лппосом.
4.3. Гетерогенность анпекеннов в бескл сточных экстрактах, нндунпрусман iioiiumii Са2*.
4.4. Обнаружение разных форм индивидуальных анпекеннов в препаратах клеточных мембран.
4.5. Влшпшс аннскспшш А5 п Л6 на активность Са2+-АТФазы саркоплазматпческого ретпкулума.
4.5.1. Выделение очищенных препаратов мембран саркоплазматпческого ретикулума.
4.5.2. Оценка влияния аннексина А6 на активность Са2+-АТФазы саркоплазматпческого ретикулума.
4.6. Образование прочно-евпзаппых форм апиекеппов па мембранах, не содержащих белков.
4.7. Поиск белков саркоплазматпческого ретпкулума, снизывающихся с аннекеппом А6.
4.7.1. Поиск белков-мишеней среди интегральных белков мембран саркоплазматпческого ретикулума.
4.7.2. Поиск белков-мишенеп среди периферических белков мембран саркоплазматпческого ретикулума.
5. ВЫВОДЫ.
6. Цитированная литература.