РОЗРОБКА І ВИГОТОВЛЕННЯ ДІАГНОСТИКУМІВ ДЛЯ ІМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛІЗУ ПРИ КЛАСИЧНІЙ ЧУМІ СВИНЕЙ, ХВОРОБІ АУЄСКІ, ТЕШЕНА, БЕШИСІ, ЛЕЙКОЗІ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ, ТРИХІНЕЛЬОЗІ СВИНЕЙ ТА ПРАКТИЧНЕ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ (ТЕОРЕТИЧНЕ ОБГРУНТУВАННЯ, ВПРОВАДЖЕННЯ ) : РАЗРАБОТКА И ИЗГОТОВЛЕНИЕ диагностикумов ДЛЯ Иммуноферментного анализа при классической чуме свиней, Болезни Ауески, Тешен, роже, лейкоза крупного рогатого СКОТА, трихинеллез СВИНЕЙ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ИХ ПРИМЕНЕНИЕ (Теоретическое обоснование, ВНЕДРЕНИЕ)

Краткое описание

УКРАЇНСЬКА АКАДЕМІЯ АГРАРНИХ НАУК
ІНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ

На правах рукопису

СИНИЦИН ВІТАЛІЙ АНАТОЛІЙОВИЧ

УДК 619 : 616 . 98 : 578. 833. 31

РОЗРОБКА І ВИГОТОВЛЕННЯ ДІАГНОСТИКУМІВ ДЛЯ
ІМУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛІЗУ ПРИ КЛАСИЧНІЙ ЧУМІ СВИНЕЙ,
ХВОРОБІ АУЄСКІ, ТЕШЕНА, БЕШИСІ, ЛЕЙКОЗІ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ
ХУДОБИ, ТРИХІНЕЛЬОЗІ СВИНЕЙ ТА ПРАКТИЧНЕ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ
(ТЕОРЕТИЧНЕ ОБГРУНТУВАННЯ, ВПРОВАДЖЕННЯ )

Спеціальність: 16.00.03 - ветеринарна мікробіологія і вірусологія

Д И С Е Р Т А Ц І Я

на здобуття наукового ступеня доктора

ветеринарних наук

Науковий консультант-
доктор ветеринарних наук,
академік УААН, А.І. Завірюха
Інститут ветеринарної
медицини УААН

Київ 2003

ЗМІСТ
ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ 5
ВСТУП 6

РОЗДІЛ 1 ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ
1.1. Сучасний стан розвитку імуноферментного аналізу для діагностики 17
інфекційних хвороб свиней
1.2. Серологічні методи діагностики класичної чуми свиней 23
1.3. Серологічні методи діагностики бешихи свиней 31
1.4. Діагностика ентеровірусного енцефаломієліту свиней
( хвороба Тешена ) 33
1.5. Діагностика лейкозу великої рогатої худоби 37
1.6. Імунодіагностика трихінельозу свиней 52
1.7. Заключення щодо огляду літератури 57

РОЗДІЛ 2
ВИБІР НАПРЯМКІВ ДОСЛІДЖЕНЬ, МАТЕРІАЛ ТА МЕТОДИ
ВИКОНАННЯ РОБОТИ

2.1. Місце та умови проведення досліджень 61
2.2. Штами збудників 62
2.3. Культура клітин та сольові розчини 63
2.4. Приготування середовища висушування 67
2.5. Приготування робочої суспензії клітин 70
2.6. Приготування виробничої серії вірусу
( хвороби Тешена, Ауєски ) 71
2.7. Отримання виробничої серії вірусу класичної чуми свиней 71
2.8. Отримання виробничої серії антигену для ІФА з бактерійних клітин бешихи свиней 74
2.9. Титрування вірусів хвороби Тешена, Ауєскі в культурі клітин 77
2.10. Визначення імунохімічної активності вірусів у ІФА 78
2.11. Визначення активності й специфічності сироваток проти КЧС, хвороби
Тешена, Ауєскі, бешихи, лейкозу великої рогатої худоби, трихінельозу свиней
у реакції імуноферментного аналізу 79
2.12. Сублімаційне сушіння 81
2.13. Експериментальні тварини 82
2.14. Підготовка патологічного матеріалу для досліджень у методі імуноферментного аналізу 84
2.15. Позитивні та негативні контролі (стандарти, які використовували в імуноферментному аналізі ) 85
2.16. Методика постановки непрямого методу ІФА для виявлення специфічних антитіл 86
2.17. Методика постановки непрямого варіанту ІФА для виявлення антигенів
вірусу КЧС 87
2.18. Електрофоретичний аналіз 88
2.19. Метод електронної мікроскопії вірусів 89

РОЗДІЛ 3 РЕЗУЛЬТАТИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ
ДОСЛІДЖЕНЬ
3.1. Очищення і концентрування вірусів КЧС, хвороби Тешена, Ауєскі, лейкозу
з використанням адсорбційної та молекулярноситової хроматографії на
макропористих кремнеземах 90
3.2. Одержання гіперімунних діагностичних сироваток 140
3.3. Виділення імуноглобулінів та виготовлення імунопероксидазних
кон’югатів 142
3.4. Розробка методу імуноферментного аналізу для виявлення специфічних
антитіл до КЧС, лейкозу, хвороби Ауєскі, Тешена, бешихи, трихінельозу
свиней 145
3.4.1. Визначення оптимального розведення (дози ) антигену для сенсибілізації
мікропланшет 146
3.4.2. Визначення рН інкубаційного буферного розчину 148
3.4.3. Визначення часу й температури сенсибілізації мікропланшет з антигенами ВКЧС, хвороби Тешена, Ауєскі, бешихи, трихінельозу, лейкозу 151
3.4.4. Визначення часу й температури інкубації сироваток з адсорбованим антигеном 152
3.5. Порівняльне вивчення ефективності використання імунологічних планшет різних фірм у якості "твердої фази" при постановці ІФА при діагностиці
КЧС, хвороби Тешена, Ауєскі, лейкозу, бешихи, трихінельозу свиней 153
3.6. Визначення діагностичного титру специфічних антитіл у реакції імуноферментного аналізу 154
3.7. Розробка "Сендвіч"-варіанту ІФА для індикації і ідентифікації антигенів
вірусу КЧС 163
3.8. Випробування активності та специфічності імуноферментного аналізу
при діагностиці хвороби Ауєскі, Тешена, лейкозу великої рогатої худоби,
класичної чуми свиней, бешихи, трихінельозу свиней 171
3.9. Технологічна схема та загальні вимоги виробництва наборів
діагностикумів для імуноферментного аналізу 183
3.10. Визначення чутливості та кореляції титру антитіл у ІФА і РН 206
3.11. Метод імуноферментного аналізу при класичній чумі свиней 210
3.12. Метод імуноферментного аналізу при бешисі свиней 230
3.13. Прижиттєва діагностика трихінельозу 236

РОЗДІЛ 4
АНАЛІЗ І УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕНЬ 258
ВИСНОВКИ 269
ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ 272
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ 274
ДОДАТКИ 305

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ
ІФА імуноферментний аналіз

ЕLISA Enzyme linked immunosorbent assay

МПС макропористий сорбент

РН реакція нейтралізації

РА реакція аглютинації

МФА метод флюоресцентних антитіл

ПР проба росту

РДП реакція дифузійної преципітації

РТЗК реакція тривалого зв’язування комплементу

ЕМ електронна мікроскопія

ВКЧС вірус класичної чуми свиней

ВЛ вірус лейкозу

ВХА вірус хвороби Ауєскі

ГХ гель-хроматографія

СНЕВ свиняча нирка ембріональна версенізована

ПТП перещеплювальні тестикули поросят

ПВП полівінілпіролідон

КЧС класична чума свиней

РПГА реакція пасивної гемаглютинації

ТФБР твін фосфатно-буферний розчин

В С Т У П

Актуальність теми. Розробка та впровадження високочутливих імуноло- гічних експресних методів діагностики інфекційних хвороб у практичну роботу лабораторій ветеринарної медицини є однією з умов інтенсифікації тваринництва.
В Україні виробництво свинини сконцентровано в основному на великих комплексах та спеціалізованих господарствах. Внаслідок проведення у господарствах великої кількості вакцинацій, неповноцінної годівлі, впливу негативних зовнішніх факторів, імунний статус тварин значно погіршується. На це особливо чутливо реагують порісні свиноматки і новонароджений молодняк.
Насамперед за

Список литературы

ВИСНОВКИ
1. Проведено теоретичне та експериментальне обгрунтування необхідності розробки нових, більш досконалих методів експресної лабораторної діагностики найбільш поширених і небезпечних інфекційних та інвазійних захворювань свиней та великої рогатої худоби ( КЧС, Тешена, Ауєскі, бешиха, трихінельоз, лейкоз) на основі імуноферментного аналізу (ІФА).
Розроблено основні прийоми технологічних процесів з виготовлення компонентів діагностичних тест- систем.
Проведено моніторинг діагностичних досліджень цих хвороб в Україні та запропоновано шляхи забезпечення потреб лабораторій ветмедицини вітчизняними наборами для діагностики.
Розроблено та затверджено нормативні документи на виготовлення вітчизняних наборів діагностикумів для ІФА, організовано їх виробництво і забезпечено потреби в них державних лабораторій ветмедицини, отримано 3 патенти Украіни на винаходи.
2. Розроблено високотехнологічний метод очищення та концентрування вірусів КЧС, хвороби Ауєскі, Тешена, лейкозу великої рогатої худоби за допомогою адсорбційної та гель-хроматографії на макропористих сорбентах, що дозволяє одержати високоочищені антигенні препарати, придатні для постановки імуноферментного аналізу, виготовлено специфічні активні імунні сироватки, імунопероксидазні кон'югати.
Вивчено вплив різних фізико-хімічних факторів на ефективність хроматографічного очищення вірусів на макропористих сорбентах, визначено оптимальні параметри сорбентів, швидкість елюції, розмір гранул сорбентів, об’єм вірусної проби, висоту хроматографічних колонок, іонну силу та pH буферних розчинів.
3. Для серологічної діагностики хвороб Тешена, Ауєскі та лейкозу великої рогатої худоби розроблено високочутливий та специфічний метод імуноферментного аналізу, експериментально обгрунтовано його переваги в порівнянні з реакціями імунодифузії та нейтралізації, визначено діагностичні титри ( Тешена - 1:200, Ауєскі - 1:50, лейкоз - 1:100 ) та встановлено наявність високого ( 0,974) коефіцієнту позитивної кореляції між логарифмами зворотних величин титрів антитіл в ІФА та РН.
4. Розроблений нами метод твердофазного імуноферментного аналізу більш простий за методикою виконання, доступний для проведення досліджень в умовах обласних ( районних ) лабораторій ветмедицини та у 30 разів більш чутливий у порівнянні з реакцією нейтралізації у культурі клітин. Визначено оптимальні параметри проведення досліджень за ІФА, розроблено модульні панелі позитивних та негативних сироваток для ІФА.
5. При дослідженні проб патматеріалу з різних органів свиней, які загинули від класичної чуми методом ІФА встановлено, що найбільша концентрація віруса знаходиться в легенях та селезінці.
Встановлена висока позитивна кореляція між результатами досліджень, що одержані в ІФА та МФА.При дослідженні 372 проб патматеріалу з 56 господарств, позитивних в ІФА, виявлено 192 (51,6%) проби, в мазках-відбитках - 181 (48,6%) та 93 (25,0%) проби у МФА з інокуляцією у культурі клітин ПК-15.
6. Розроблена методика оцінки в реакції ІФА, контролю напруги поствакцинального імунітету за показниками титрів антитіл ( 0,0 відсутня, 1:4 1:8 - слабкої напруги, 1:16 і більше - імунітет достатньої напруги), яка забезпечує активний контроль за рівнем імунітету в стаді щеплених тварин.
7. Розроблено новий спосіб виготовлення антигену збудника бешихи свиней та методику постановки реакції ІФА для визначення наявності антитіл проти збудника бешихи. Встановлено наявність кореляції між показниками проби росту (ПР) та ІФА. Титр антитіл у розведенні 1:10 за ПР відповідає титру в ІФА 1:32; 1:20 1:64; 1:40 1:128; 1:80 1:256 і так далі.
8. Порівняльним дослідженням напруги поствакцинальних імунітетів у свиней, щеплених різними вакцинами ( депонована, КГОА, ВР-2) встановлено, що найвищі титри антитіл в сироватці крові тварин ( 1:1024 ) формуються після щеплення депонованою вакциною.
При контрольному зараженні вірулентним штамом збудника бешихи серед тварин, щеплених депонованою вакциною, вижили всі ( 100% захист).
9. Розроблено і впроваджено у ветеринарну практику метод імуноферментного аналізу для прижиттєвої діагностики захворювання свиней трихінельозом.
Визначено оптимальні параметри постановки реакції: мінімальні діагностичні титри антитіл, режим сенсибілізації трихінельозних антигенів на мікропланшетах, рН інкубаційного буферного розчину, температурний режим, продовженість досліджень та облік результатів ферментативних реакцій.
10. Експериментально обгрунтована перевага екскреторно-секреторних антигенів для прижиттєвої діагностики трихінельозу у свиней методом ІФА у порівнянні з соматичними антигенами з трихінел.
Міжвідомчі комісійні випробування показали високу чутливість та специфічність ( 96-98 %) розробленого нами методу раннього виявлення ще слабко інвазованих свиней ( 1- 2 личинки у 25-50 дослідних зрізах м’язів).
11. Запропонований нами метод ІФА прижиттєвої діагностики трихіне- льозу придатний для виявлення специфічних антитіл проти трихінел у спонтанно заражених людей груп ризику та своєчасно організувати їх лікування.
12. При візуальному та інструментальному методах обліку реакції імуноферментного аналізу за діагностики КЧС, хвороби Ауєскі, Тешена, лейкозу великої рогатої худоби, трихінельозу, бешихи свиней, результати цілком співпадають.
Порівняльна характеристика сорбційних властивостей мікропланшет для ІФА різних фірм: Linbro (США), Nunc (Данія), Sarstech (Німеччина), Dunetech (Швеція), Titertex (Англія), ВНІІМТ та Медполімер (Росія)показала, що найкращі результати в імуноферментному аналізі одержані на полістиролових мікропланшетах фірми Sarstesh ( Німеччина ).
13. Вперше в Україні розроблена, теоретично і експериментально обгрунтована технологія виготовлення та застосування наборів діагностикумів для імуноферментного аналізу, які використовуються в Центральній та обласних лабораторіях ветеринарної медицини Украни та СНД, що дозволяє значно підвищити методичний рівень і достовірність лабораторних діагностичних досліджень.
14. У результаті проведення міжвідомчих та виробничих випробувань при дослідженні патологічного матеріалу від хворих тварин встановлено, що компоненти наборів діагностикумів для імуноферментного аналізу є стандартизованими, активними та специфічними.
Розроблена нормативно-технічна документація на виробництво та застосування тест-систем для ІФА, затверджена Головним управлінням ветеринарної медицини МСГіП України .

ВПРОВАДЖЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕНЬ ТА

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

На підставі проведених досліджень для практичного застосування розроблені і впроваджені:
- набір діагностикумів класичної чуми свиней для ІФА (ТУ У
46.15.045-94);
- набір діагностикумів хворобиТешена для ІФА (ТУ У 46.15.044-94);
- набір діагностикумів трихінельозу для ІФА (ТУ У 46.15.235-97);
- набір діагностикумів бешихи свиней для ІФА (ТУ У 46.15.046-94);
-²тест-система на основі імуноферментного аналізу для прижиттєвої діагностики трихінельозу свиней²( патент України на винахід № 55269А).
- ²експрес-спосіб імуноферментного аналізу для виявлення специфіч- них антитіл у сироватці крові до ензоотичного енцефаломіеліту свиней (хвороби Тешена)"( патент України на винахід № 55272А).
-²спосіб виявлення специфічних антитіл до вірусу лейкозу великої рогатої худоби методом імуноферментного аналізу²( патент України на винахід № 55284 А).
На діагностичні набори для ІФА розроблено та затверджено ГУВМ МСГП України нормативно-технічну документацію: інструкція з виготов- лення і контролю набору діагностикумів для ІФА; настанова по застосуванню набору діагностикумів для ІФА; технічні умови на набір діагностикумів для ІФА.
Затверджені в установленому порядку та впроваджені в практику "Методичні рекомендації по застосуванню методу імуноферментного аналізу для прижиттєвої діагностики трихінельозу тварин". Матеріали досліджень включені у методичні рекомедації "Діагностика та імунопро- філактика класичної чуми свиней."
Матеріали досліджень використовуються у лекційних курсах та при проведенні лабораторно-практичних занять з 1996 року на кафедрах епізоотології, паразитології факультетів ветеринарної медицини студентами 4-го, 5-го курсів та слухачами інституту післядипломного навчання лікарів і спеціалістів ветеринарної медицини БЦДАУ та факультету підвищення кваліфікації НАУ, м.Київ.

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ
1. Артеменко Ю.Г. Дикова О.А. Вивчення адапційних можливостей личинок трихінел // Ветеринарія. -1979. -N5. -С.64-66.
2. Артеменко Ю.Г. Трихинеллез и эхинококоз животных в Украинской СССР. Эпизоотология и меры борьбы : Дис.д-ра вет.наук.-Моск­ва.-1987. -493с.
3. Артеменко Ю.Г., Синицин В.А., Дербаль М.І. Проблема трихінельозу в Украïні. // Ветеринарна медицина Украïни. -1997. -N8. -С.24-25.
4. Балышева В.И., Жестерев В.И., Балышев В.М. Bакцины против клас- сической чумы свиней из штаммов ЛК-К//Ветеринария.- 2001.-N 4.- С.19-22.
5. Бакулов И.А., Барышников П.И., Котляров В.М. Иммуноферментный анализ при диагностике микоп­лазмозов животных // Ветеринария. -1987.N 11.-С.53.
6. Бакулов И.А., Вишняков И.Ф., Николайчук Л.Ф.Использование реак- ции энзим меченых антител при выявлении ан­тигена возбудителя сибирской язвы // Тез. научн. конф.ВНИИВВиМ, посвященной 60-летию образования СССР.Покров. 1982. С. 308-311.
7. Балмасов А.В.,Реутова Е.Г., Бурцев В.И.Сравнительная оценка сероло-
гических реакций при определении специфических антител к вирусам классической чумы свиней и болезни Ауески // Вопр. вет.вирусологии, микро- билогии и эпизоотологии: Тез. докл. науч.конф. ВНИИВВиМ. 1981. -Покров, 1981. -С.99-100.
8. Бессонов А.С. Диагностика трихинеллеза // Вильнюс. -1975-380с.
9. Бессонов А.С. Виды и вариететы нематод рода Trichinella: систематика, эпизоотологическое и эпидемиологическое значение // Ветеринария.- 2001.- N 6.-С. 27-31.
10. Безбородова С.В., Дригин В.В., Перевозчикова Н.А., Использование метода полимеразной цепной реакции для выявления вируса классической чумы свиней //Ма­тер.научн.-практ. конф. ВНИИВВиМ "Классическая чума свиней - неот­ложные проблемы науки и практики". -Покров. -1995. -С.73.
11. Белозеров С.Н. Сравнительное испытание антигенов в реакции непрямой иммунофлуоресценции для прижизненной диагностики трихинел­леза свиней // Бюл.ВИГИС. -М., 1972. -Вып.9. -С.11-13.
12. Белозеров С.Н. Эффективность реакции непрямой иммунофлуоресце- нции при экспериментальном трихинеллезе свиней //Бюл.ВИГИС. -М., 1973.-Вып.10.-С.11-15.
13. Белозеров С.Н. Применение реакции иммунофлуоресценции для прижизненной диагностики трихинеллеза свиней в производственных ус­ловиях // Бюл.ВИГИС.М.,1974. -Вып.12. -С.11-13.
14. Белозеров С.Н. Прижизненная диагностика трихинеллеза свиней // Ветеринария. 1975. -N6. -С.70-72.
15. Белозеров С.Н. Испытание реакции непрямой иммунофлуоресцен- ции в прижизненной диагностике трихинеллеза людей // Бюл.ВИГИС. -М., 1975. -Вып.16. -С.13-15.
16. Белозеров С.Н. Изучение реакции непрямой иммунофлуоресценции для прижизненной диагностики трихинеллеза свиней // 2-я Всесоюз. конф. по пробл. трихинеллеза человека и животных. -Вильнюс, 1976. -С.175-179.
17. Белозеров С.Н. Методика постановки и учета реакции непрямой иммунофлуоресценции для прижизненной диагностики трихинеллеза свиней // Бюл.ВИГИС. -М., 1977. -Вып.19. -С.7-8.
18. Белозеров С.Н., Гудонавичус Т.И. Реакция энзим-меченых антител для диагностики трихенеллеза // Ветеринария. -1982. -N11. -С.41-44.
19. Белозеров С.Н., Подседловский Т.С., Рочкене А.А. Сравнительная диагностическая эффективность реакции непрямой имму­нофлуоресценции и связывания комплемента на холоду в диагностике трихинеллеза людей // Мед.паразитол. болезни. -1985. -N2. -С.40-44.
20. Белозеров С.Н. Сравнительная диагностическая эффективность иммуноферментного теста при использовании в нем разных антигенов трихинелл // Материалы докл.к 4-ой Всесоюз. конф. по пробл. трихи­неллеза человека и животных. -Ереван, 15-17 мая. -М.,1985.-С.131-134.
21. Белозеров С.Н. Пути повышения эффективности метода иммунофе-
рментного анализа и перспективы его применения при некоторых гельмин- тозах сельськохозяйственных животных // Бюл.ВИГИС. -М., 1985. -Вып.58. -С.55-57.
22. Березин И.В. Состояние и перспективы развития иммунофермен- тного нализа // Бюлл. ВИЭВБ 1985. -Вып.58. -С.3-6.
23. Бережко В.К., Белозеров С.Н., Шеховцов Н.В. и др. Диагностическая эффективность иммуноферментной реакции при трихинеллезе свиней // Материалы докл. 5-ой Всесоюз. конф. по пробл.трихинеллеза человека и животных (14-16 сентября). Новочеркасск. -М.,1988.-С.21-22.
24. Бьядовская О.П., Андреев В.Г. Разработка непрямого твердофазного варианта ИФА для определения антител к вирусу КЧС с использованием рекомбинант- ного белка GP55 (Е2) // Достижения молодых ученых в вет. практику.- Владимир, 2000.-С. 136-139.
25. Бурба Л.Г., Кунаков А.Л. Диагностика лейкозов сельскохозяй-
ственных животных // М. : Колос, 1985. С.2-3.
26. Бусол В.А. Эпизоотология лейкозов крупного рогатого скота // В кн.: Распознание и меры борьбы с лейкозами человека и животных. Тез. докл. Всесоюзн. конф. Белая Церковь, 1982.- С. 23-29.
27. Бритов В.А. Возбудители трихинеллеза // -М., 1987.
28. Бондар С.В., Скибіцький В.Г. Використання методу імуноферментного аналізу для індикації серопозитивних щодо вірусної діареї тварин у господарствах різних областей України // Биополимеры и клетки.- 1999. т.15. Ν 6.- С. 568-570.
29. Бойко А.А. Создание иммуноферментных препаратов //Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологи­ческих препаратов: Тез.до кл.третьей Всесоюзн.конф. 21-23 октября 1987 г. -Москва, 1987. -С.199-201.
30. Валихов А.Ф., Шишков В.П., Бурба Л.Г. Лейкоз крупного рогатого скота // М.- 1980.- 51с.
31. Ванеева Л.И., Цветкова Н.В. Иммуноферментный метод, его настоящее и будущее // Иммунология. -1980. -N2. -С.13-19.
32. Верховский О.А., Цибезов В.В., Баландина М.В. Иммуноферментный анализ в диагностике лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринария. - М, 2002.- С.8-10.
33. Вишняков И.Ф., Цыбаков Л.Я. Иммуноферментный анализ // Ветеринария. -1983. - №9. -С.68.
34. Вишняков И.Ф. Диагностика классической чумы свиней // Ветери- нария. -1986. №3.-С.27-30.
35. Вишняков И.Ф., Куриннов В.В., Яшин А.Т. Некоторые особенности классической чумы свиней, затрудняющие ее диагностику: обзор литературы // Ветеринария. - 1985.- №9. -С.29-31.
36. Вишняков И.Ф., Куриннов В.В., Претыкин А.С. Обнаружение нейт- рализующих антител к вирусу классической чумы свиней // Ветеринария. -1985. -N7. -С.31-32.
37. Вишняков И.Ф., Куриннов В.В., Яшин А.Т. Иммунофлуоресцентное выявление разных штаммов вируса чумы свиней // Ветеринария. -1984. -N3. -С.34-36.
38. Вишняков И.Ф., Куриннов В.В., Перетыкин А.С. Обнаружение нейтрализующих антител к вирусу классичес­кой чумы свиней // Ветери- нария. -1985. -№7. -С.31-32.
39. Вишняков И.В., Цыбанов Л.Я. Новые методы диагностики классиче- ской чумы свиней // Матер. науч.-практ.конф. ВНИИВВиМ "Класси­ческая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики. -Покров. -1995. -С.69-71.
40. Вишняков И.Ф.Средства диагностики вирусных болезней животных: состояние и перспективы // Классическая чума свиней - неот­ложные проблемы науки и практики: Матер. Науч.-практ.конф. ВНИИВ­ВиМ. -Покров, 1995. -С.59-63.
41. Воронин Е.С., Романова М.В. Рожа свиней: профилактика и меры борьбы.//Москва. -1987. -42с.
42. Гаврилова Е.М. Гомогенный иммуноферментный анализ новое направление иммунологии // Журн.Всесоюзного хим.общества им.Д.И.Мен­делеева. -1982. -№27. -С.65.
43. Гаврилова Е.М., Дзантиев Б.Б., Егоров А.М. Получение и свойства иммунопероксидазных комплексов // Биохимия. -1979. -N9. -С.44.
44. Галко Н.В., Макарова Н.Г., Авилов В.С. Диагностика ротавирусного гастроэнтерита детей методом иммунофер­ментного анализа в реакции диффузной преципитации в геле. // Бюлл. ВИЭВ, 1985. -Вып.58. -С.45-48.
45. Гаркави Б.Л. Вид трихинеллы, выделенной от диких животных // Ветеринария. 1972. -N10. -С.90-91.
46. Георгиу Х. Сравнительная оценка ИФА и РДСК при анаплазмозе рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ, 1986.- Вып.58. - С.52-54.
47. Гуненков В.В., Шарабрин О.И., Коромыслов И.Г. Диагностика иммуноферментным методом коронавирусной инфекции крупного рогатого скота // Весник сельскохозяйственной науки. -1985. -№11. -С.122-124.
48. Гизатулин Х.Г., Юсупов Р.Х. Чума свиней и современные методы ее лабораторной диагностики // Казань, 1973. -120с.
49. Дзантиев Б.Б., Егоров А.М. Современное состояние и перспективы развития иммуноферментного анализа // Журн.Всесоюзного хим.об­щества им.Менделеева. 1982. -№ 27. -С.442-450.
50. Дзантиев Б.Б., Канятников А.Н., Парбузин В.С. Основные закономе- рности конкурентного иммуноферментного анализа // Труды НИИВС им.И.И.Мечникова. -1983. - № 9-С.27-51.
51. Домейка М.А. Изучение реакции ЭЛИЗА для индикации антител и антигенов хламидий энтерита и пневмоний телят // Бюлл. ВИЭВ. -1985. -Вып.58. -С.58-59.
52. Доронин Н.Н., Бусол В.А. Лейкоз крупного рогатого скота // Киев.- Урожай.- 1986.
53. Дарьенко П.М., Порублев В.А. Трихинеллезы животных и человека // Вестн. ветеринарии.- 2000.- N 16(2). -С. 26-30.
54. Егоров А.М. Современное состояние и перспективы развития имму- ноферментного анализа // Труды НИИВС им. И.И.Мечникова. -1983. -С.3-24.
55. Егоров А.М., Дзантиев Б.Б., Гаврилов Е.М. Иммуноферментный катализ // Успехи биоорганического катализа. -М., 1979. -С.239.
56. Експресна діагностика лейкозу великої рогатої худоби на основі
біосенсорного аналізу/ Стародуб М., Артюх В., Пирогова Л., Нагаєва Л., Добросол Г., Павленко Л., Гротевич Т.// Ветеринарна медицина України. 2001.- N11. С.26-27.
57. Жданова О.Б. Изучение возможности использования ELISA для диагностики трихинеллеза песцов // Материалы XX науч.-практ. конф. Ижев. гос. с.-х. акад..-Ижевск, 2000.-С. 148-149.
58. Зезюкин А.И., Серегина Н.М. Иммуноферментный метод диагнос- тики вирусов // Защита растений. -М., 1995. -N2. -С.30.
59. Ильясов Г.Х., Юсупов Р.Х., Барсков В.Г. Диагностика классической чумы свиней методом иммуноферментного анализа // Матер. науч.-практ. конф. " Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики" ВНИИВВиМ. -Покров, 1995. -С.75-76.
60. Илькив Р.П., Лыска В.М. Использование клеток, выращенных на полистироловых пластинах, при выделении вируса классической чумы свиней.//Вопр.вет.вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: Ма­териалы науч. конф. ВНИИВВиМ. -Покров, 1992. -Ч.1. -С.125-126.
61. Ильясова Г.Х., Юсупова Л.В. К усовершенствованию методов оценки иммунного статуса и мониторинга болезней свиней ( Чума свиней и болезнь Ауески). // Тр.Второго съезда вет. врачей Респ. Татарстан.- Казань, 2001.-С. 185-191.
62. Камфорин Л.Е. Иммуноферментный метод // Современные методы диагностики вирусных инфекций. -М.:Медицина, 1981. -С.30-36.
63. Караванов А.С., Бычкова М.В., Банова Г.Г. Индикация вируса кле­щевого энцефалита твердофазным иммуноферментным методом в материа­лах природных очагов // Вопросы вирусологии. -1984. -№ 6. -С.722-724.
64. Коромыслов Г.Ф., Авилов В.С. Иммуноферментный анализ и его применение в ветеринарии // Бюлл. ВИЭВ. -1985. -Вып.58. -С.6-9.
65. Коромыслов И.Г., Шарабрин О.И., Гуненков В.В. Применение иммуноферментного метода (ИФА), для диагностики коронавирусной ин­фекции у крупного рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ, 1985. -Вып.58. -С.48-51.
66. Коромыслов Г.Б.,Авилов В.С.,Мникова Л.А. Применение иммуно- ферментного анализа в диагностике ротавирусной инфекции крупного рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ. -1984. -Вып.60. -С.63-67.
67. Колеватова А.И., Жданова О.Б., Назарова С.Г. Дифференциация трихи- неллеза, токсокароза и аллергических реакций у клеточных пушных зверей // Аграр. наука северо-востока европ. части России на рубеже тысячелетий-состояние и перспективы.- Киров, 2000.-Т.1.-С.- 54-57
68. Коваленко Я.Р., Сидоров М.А., Татаринцев Н.Г. Антитела сыроваток крови и напряженность иммунитета против рожы у свиней //Доклады ВАСХНИЛ.-1970.-№ 8. С.25.
69. Ковалев Г.К. Некоторые вопросы биологии Erysipelotri rhusopathiae // ПЕСЭИ. -1982. -N3. -С.11-18.
70. Ковалев Н.А., Сакович В.Т., Клюкина В.И. Напряженность иммунитета против чумы у иммунизированых свиней разных возрастных групп // Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики: Матер. Науч.практ.конф.ВНИИ ВИМ. -Покров, 1995. -С.89.
71. Колонцов А.А. Имунный ответ при классической чуме свиней // Классическая чума свиней - неотложные проблемы науки и практики Матер. Науч. практ. конф. ВНИИВВ ИМ. -Покров, 1995. -С.98.
72. Клюкина В.И., Бойко А.А., Ярцев М.Я., Шишов В.П. Сравнительная оценка методов получения антигенов бактерий рожи для ИФА // Научные основы технологии промышленного производства биопрепаратов: Тез.докл. 3-й Всесоюзн.конф., 21-23 октября 1987 г. -М., 1987. -С.211-212.
73. Кузнецов А.В., Попов В.И., Рудобельский Э.В. Модификационная РСК для выявления антигенов вируса чумы свиней // Вопр. вет.виру- сологи, микробиологии и эпизоотологии: Тез.докл. на­уч.конф. ВНИИВВиМ, 20-22 нояб. 1973 г. - Покров, 1973. -С.72-73.
74. Энтеровирусный энцефаломиелит свиней распространение и меры борьбы / Коломыцев А.А., Стрижаков А.А., Гаврилов В.А., Пономарев В.В, Новиков О.Г., Мосин В.М., Кашко Л.С., Грибко С.М., Писарев А.И., Кутузов Н.М. // Ветери- нария .- 2002.- Ν 1.-С. 8-11.
75. Коломыцев А.А., Дубровин В.М. Эпизоотологический мониторинг и разработка средств иммунопрофилактики энтеровирусного энцефаломиелита свиней ( болезни Тешена) // Нейроинфекции: бешенство, губкообраз. энцефалопатия круп. рогатого скота, крейтцфелдта-якоба и др.прион. болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена.- Покров, 2001.- С. 160-165.
76. Красочко П.А., Амиров А.Х., Красочко И.А.. Результаты разработки твердофазного ИФАТеста при диагностике вирусной диареи крупного рогатого скта//Ветеринарна медицина.Міжвід.темат.наук. збірник.- Ν 80.- Харків.- 2002.- С. 341.
77. Крикун В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность // Ветеринария. М, 2002. - С. 7-9.
78. Кудрявцева Т.П. Лейкоз животных // М., Россельхозиздат.- 1980.-98с.
79. Леонов С.В., Посевая Т.А., Закомырдин Ю.А.. Использова­ние коньюгата белка А стафиллокока с пероксидазой в иммуноферментной тест-системе для определения антител к вирусу простого герпеса // Вопросы вирусологии. -1986. -N3. -С.321-325.
80. Лысенко А.Я., Ермолин Г.А., Цветкова В.С., Параметры констру- ирования диагностических тест-систем на основе реакции энзим-меченых антител // Науч. труды Центрального ин-та усовершенствования врачей: Иммунодиагностика тропических болезней. -М., 1980. -№ 4. С.36-45.
81. Лярски З.И. Диагностика вирусных болезней животных. -М.: Колос, 1980. -399с.
82. Маматова З.Б., Искандерова М.И. Иммуноферментный анализ для выявления бруцеллезных антигенов // Ветеринария. - 1982. -N4. -С.13-15.
83. Маматова З.Б. Отработка оптимальных условий проведения ИФА для выявления бруцеллезных антител // Бюлл. ВИЭВ. -1985. -Вып.58. -С.39-41.
84. Манилов А.Д. Твердофазные радиоиммунные и иммуноферментные методы для количественного экспресс-анализа в микробиологии // ЖМЭИ. -М.,1985. -N4.- С.100-107.
85. Моренков О.С., Собко Ю.А., Собко И.А. Иммунорферментные тесты для серологической диагностики болезни Ауески // Ветеринария.-2001.- N 8.-С. 21-25.
86. Мникова Л.А., Авилов В.С., Гоголев М.М. Применение иммунофер- ментного анализа в диагностике ротавирусной инфекции крупного рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ.-1985. -Вып.58. -С.26-30.
87. Маслов Е.В., Бойко А.А., Хорьков И.А. Оптимизация непрямого иммуноферментного анализа для выявления антител к Mycobacterium bovis //
Ветеринария. -1987. - N10. -С.64-68.
88. Маслак А.А., Лукина В.А., Бойко А.А. Разработка статистической процедуры определения титра противопарагрип­позных сывороток животных иммуноферментном анализе // Биотехноло­гия. -1988. -N4. -С.390-393.
89. Микалаускене Г.Ю., Вайчунене В.В., Пешкуе Ю.К. Получение моноклональных антител к антигену gp51 и их применение для ранней диагностики лейкоза крупного рогатого скота // Укр. биохим. журнал. 1996.- N3. С.89-94.
90. Мищенко В.А., Базаров М.А., Смирнов А.Б.. Изучение диагности- ческой ценности иммуноферментного метода с флюро­генными субстратами щелочной фосфатазы и В-Д-Галактозидазы // Акту­альные проблемы ветеринарной вирусологии: Тез.докл. науч.конф., посвященной 30-летию Всесоюзн. науч. исследовательского ящурного ин-та. -Владимир, 1988. -С.61.
91. Моренков О.С., Собко Ю.А., Собко А.И. Иммуноферментные тесты для серологической диагностики болезни Ауески .// Ветеринария.- 2001.- Ν 8.-С. 21-25.
92. Непоклонова И.В. Применение метода ЕLISA для обнаружения антигена вируса ИРТ // Проблемы ветеринаой иммунологии. -М., 1985. -С.152.
93. Непоклонова И.В. Индикация вируса ИРТ в иммуноферментной тест-системе с использованием IgG, меченных пенициллиназой //При­менение биотехнологии в животноводстве, растениеводстве и ветеринар­ной медици- не: Тез. докл. Всесоюзн. науч.-техн. конф. (11-13 октября 1988 г). -Ленинград, 1988. -С.114.
94. Николаев В.П., Царькова В.А. Твердофазный иммуноферментный экспресс анализ для обнаружения вирусных антигенов//Вопросы вирусоло- гии.-1984.-N6.-С.720-722.
95. Непоклонов Е.А., Сергеев В.А., Алипер Т.И. Классическая чума свиней в промышленном свиноводстве. // Ветеринария .- 2001.- Ν 9.-С. 10-15.
96. Новожилова Е.В., Краснобаев Е.А., Гришок М.П.. Экспресс-индикация и идентификация вируса классической чумы свиней с помо- щью флюоресцентного зонда в суспензии клеток РК-15. //Матер. научн.-практ. конф. ВНИИВВиМ "Классическая чума свиней ­неотложные проблемы науки и практики". - Покров. - 1995. -С.71-72.
97. Озерецковская Н.Н. и др. Трихинеллёз, патогенез и основы терапии. //Материалы докл. 2-й Всесоюз.конф.по проблеме трихинеллёза человека и животных Вильнюс.- 1976.- С. 198-203.
98. Остерман Л.А. Хроматография белка и нуклеиновых кислот //-М.: Наука, 1985.- 536с.
99. Пантелеев О.А., Ванеев Л.И., Демченко Е.Н. Проблемы подбора концентрации реагентов в ТФИФА при определении концентрации антиге- нов // ЖМЭИ. -1987. - N4. -С.80-85.
100. Парфанович М.И., Ярославцева Н.Г., Санкова М.Н. Тест-системы иммуноферментного анализа для выяв­ления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотках крови инфицированных животных и для контроля используемого тест-системах антигена вируса // Научные основы технологии промыш­ленного производства ветеринарных препаратов: Тез. докл. 3-й Всесо­юзн. конф. 21-23 октября 1987 г. -М., 1987. -С.199-201.
101. Пащук В.П. О природной очаговости трихинеллёзной инвазии в БССР. // В кн.: Тезисы докл. науч. конф. Всесоюз. о-ва гельминтологов.- М.- 1958.- C. 112.
102. Па