РОЗРОБКА ЖИВОЇ КУЛЬТУРАЛЬНОЇ ВАКЦИНИ ПРОТИ ВІРУСНОЇ ДІАРЕЇ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ : РАЗРАБОТКА ЖИВОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ вирусной диареи крупного РОГАТОГО СКОТА

Краткое описание

УКРАЇНСЬКА АКАДЕМІЯ АГРАРНИХ НАУК
НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР
«ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ»

На правах рукопису

МАЛАКЄЄВАЧЕБАНЮК ІРИНА ВЛАДИСЛАВІВНА

УДК 619:616.98:578.833.3:615.371

РОЗРОБКА ЖИВОЇ КУЛЬТУРАЛЬНОЇ ВАКЦИНИ ПРОТИ ВІРУСНОЇ ДІАРЕЇ ВЕЛИКОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ

16.00.03. ветеринарна мікробіологія та вірусологія

ДИСЕРТАЦІЯ

на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук

НАУКОВІ КЕРІВНИКИ:

Фукс Поліна Павлівна академік УААН,
доктор ветеринарних наук, професор
Стеценко Володимир Іванович
кандидат ветеринарних наук

Харків2008

ЗМІСТ

ВСТУП

6

РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ

13

1.1.

Характеристика вірусної діареї та її збудника

13

1.2.

Особливості патогенезу та імунітету при вірусній діареї великої рогатої худоби

21

1.3.

Засоби специфічної профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби

27

1.4.

Корекція імунітету при вірусній діареї великої рогатої худоби .

36

1.5.

Висновок з огляду літератури

41

РОЗДІЛ 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ

45

2.1.

Віруси

45

2.2.

Культури клітин

46

2.3.

Поживні середовища, розчини та хімреактиви

46

2.4.

Тварини

47

2.5.

Адаптація та визначення інфекційної активності вірусу діареї

48

2.6.

Реакція нейтралізації

49

2.7.

Очистка вірусовміщуючої культуральної клітинної суспензії

50

2.8.

Контроль вакцини за показниками якості

50

2.9

Технічне оснащення експериментальних досліджень

54

2.10.

Статистичні методи

55

РОЗДІЛ 3. РЕЗУЛЬТАТИ ВЛАСНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ

56

3.1.

Вибір клітинної системи для культивування вірусу діареї великої рогатої худоби

56

3.2.

Вивчення репродуктивних властивостей виробничого штаму вірусу діареї

60

3.3.

Очистка культуральної суспензії вірусу діареї

67

3.4.

Вивчення антигенних властивостей виробничого штаму ВК-1М вірусу діареї

69

3.5.

Конструювання живої вакцини проти вірусної діареї великої рогатої худоби

70

3.5.1.

Виготовлення ліофілізованого зразка вакцини проти вірусної діареї великої рогатої худоби

71

3.6.

Вивчення вакцини за показниками якості

73

3.6.1.

Контроль контамінації вакцини сторонньою мікрофлорою

73

3.6.2.

Вивчення реактогенності вакцини

75

3.6.3.

Перевірка нешкідливості сухого зразка вакцини проти вірусної діареї

79

3.6.4.

Перевірка антигенної активності вакцини

80

3.6.5.

Вивчення імуногенних властивостей вакцини живої проти вірусної діареї

81

3.6.5.1.

Вивчення імуномодулюючої активності ліпополісахариду з Bacillus alvei

83

3.6.5.2.

Вивчення імуногенності вакцини живої культуральної проти вірусної діареї на телятах

88

3.6.5.3

Вивчення профілактичної ефективності вакцини живої культуральної проти вірусної діареї великої рогатої худоби у виробничих умовах

97

РОЗДІЛ 4. УЗАГАЛЬНЕННЯ ТА АНАЛІЗ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕННЯ

102

ВИСНОВКИ

112

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

115

СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ

116

ДОДАТКИ

144

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

ВД вірусна діарея
ХС (МД) хвороба слизових (mucosal disease)
ВРХ велика рогата худоба
КЧС класична чума свиней
ІРТ інфекційний ринотрахеїт
ПГ 3 парагрип-3
ЦПД цитопатoгенна дія
ЦПЕ цитопатичний ефект
ТЦД 50/см3 п’ятдесятивідсоткова тканинна цитопатогенна доза
РНК рибонуклеїнова кислота
ПТ нирка теляти
КСТ коронарні судини теляти
ПО нирка вівці
ТрТ трахея теляти
ПХО погранична хвороба овець
НЕК нирка ембріона корови
ЛЕК легені ембріона корови
СЕК селезінка ембріона корів
ТБ тестикули бичка
ВНК-21 лінія перещеплюваних клітин нирки хом’яка
ФРН Федеративна Республіка Німеччина
ДП дочірнє підприємство
РН реакція нейтралізації
МПБ м’ясопептонний бульйон
МПА - м’ясопептонний агар
НД нормативна документація
ЛПС ліпополісахарид
ПМТМ попередники макрофагальної трансформації мононуклеарів
РОЕ реакція осідання еритроцитів
ДНКІБШМ Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів
СВК сільськогосподарський виробничий кооператив

ВСТУП

Актуальність теми. Вірусна діарея (ВД) має значне поширення серед великої рогатої худоби майже в усіх країнах світу. Вона характеризується високою контагіозністю, розвитком ерозивно-виразкового запалення слизових оболонок травного тракту, ураженням респіраторних і статевих органів, а також суглобів (БілокіньВ.С., 1971; ЖидковС.А., 1994; СюринВ.Н., 1998; СтеценкоВ.І., 1999; Greiser-WilkeK., 2002; ГодовськийО.В., 2007).
У більшості випадків вірусна діарея перебігає в латентній формі, у тільних корів спричиняє інфікування плодів, аборти, мертвонародження або народження слаборозвинених телят з вираженою імунологічною толерантністю (ГуненковВ.В.таін., 1982; ЦибановС.Ж.таін., 1995; MolnarE.etal., 2002; КучерявенкоВ.В., 2005).
Різноманітність клінічних проявів хвороби та особливості біологічних властивостей збудника ускладнюють діагностику та заходи щодо профілактики вірусної діареї.
Збудник вірусної діареї належить до родини пестивірусів, має антигенну спорідненість із вірусом класичної чуми свиней та пограничної хвороби овець (DarbyshireF.H., 1960; КрюковН.Н.идр., 1978; ЧермашинцевВ.И.идр., 1996; БабкінМ.В., СтеценкоВ. І., 1997), досить стійкий в умовах довкілля. Його інфекційність за температури мінус 20ºС зберігається впродовж 30діб, а за мінус 40ºС протягом декількох років. Він добре розмножується як у культурах первинно трипсинізованих, так і перещеплюваних клітин (ГизитдиновН.Н.идр.,1977; ФайзулинаС.И.идр., 1977; КуликоваИ.Л.идр., 1992; ЗакутскийИ.И.идр., 1995; КимТ.Г.идр., 1995; БілокіньВ.С.таін., 1997; 2000; ШульгинМ.И.идр., 2003; BakerF.C., 1990; BecherP.etal., 2001; BruschkeC.F.etal., 1998; GlandasperoM.etal., 1998; CampenH.etal., 2001, KellingC.L.etal., 2002).
Важливим фактором, який сприяє поширенню збудника, є особливість вірусної діареї перебігати в прихованій формі. Вірус може тривалий час персистувати в організмі клінічно здорових дорослих тварин, виділятися в зовнішнє середовище та заражати молодняк.
Наявність латентної форми й різноманітність прояву клінічних ознак у тварин різного віку потребують особливої стратегії щодо профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби в неблагополучних господарствах, в яких хвороба перебігає в найбільш тяжкій формі серед телят, спричиняючи їх загибель.
На сьогодні немає сумніву, що в патології молодняка великої рогатої худоби вірусна діарея є однією з провідних інфекцій. В Україні, на жаль, вірусній діареї приділяється недостатньо уваги, що створює передумови її значного поширення в різних регіонах нашої країни.
Значні економічні збитки, яких завдає вірусна діарея, зумовлені вищезазначеними особливостями її збудника та різноманітними формами перебігу.
Найбільш ефективним засобом боротьби з вірусною діареєю великої рогатої худоби є вакцинація сприйнятливого поголів’я тварин. Проте до 2005року в Україні не було розроблено і впроваджено для застосування засобів специфічної профілактики вірусної діареї.
Аналіз фактичного матеріалу, накопиченого вітчизняними й закордонними дослідниками, свідчить про складність отримання та застосування вакцини проти вірусної діареї. Відносно невисока ефективність інактивованих вакцин (Neaton H.J.etal., 1986; SweatR.L., 1986; СергеевВ.А., 1993; VogelF.S. F., 2001) визначила напрямок експериментальних досліджень щодо отримання атенуйованих штамів вірусу діареї з метою використання їх як вірус-вакцини. Живі вакцини забезпечують швидке формування локального та системного імунітетів і запобігають інфікуванню тварин епізоотичним вірусом діареї.
Актуальність цього напрямку досліджень ґрунтується також на тому, що в телят у перші доби життя імунна система ще недосконала і в разі застосування інактивованих вакцин не відбувається негайна повноцінна імунна відповідь, а колостральний імунітет короткочасний і залежить від рівня материнського імунітету.
На підставі вищезазначеного було заплановано здійснити дослідження з розробки технології виготовлення живої вакцини проти діареї великої рогатої худоби та відпрацювати схему її застосування в неблагополучних господарствах.

Зв’язок роботи з науковими програмами, темами, планами. Дисертаційна робота є складовою частиною наукових досліджень, виконаних згідно з державними програмами і тематичними планами ННЦ «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», зокрема, завдання 05 «Розробити ефективну систему діагностики, терапії та профілактики хвороб великої рогатої худоби» (№державної реєстрації 01974000758, 2000р.); 05 «Розробити та впровадити комплексну систему діагностики, терапії та профілактики інфекційних і незаразних хвороб жуйних тварин» (№державної реєстрації 0101U001610, 20012005рр.); завдання 37.02-003 «Вивчити біологію герпес- і пестивірусів збудників інфекційного ринотрахеїту та вірусної діареї великої рогатої худоби, розробити сучасні засоби їх діагностики й специфічної профілактики» (№державної реєстрації 0106U000340, 20062010рр.).

Мета і завдання дослідження. Основна мета роботи розробити засоби специфічної профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби в неблагополучних господарствах.
Для досягнення поставленої мети необхідно було вирішити такі завдання:
- підібрати клітинну систему для культивування й накопичення виробничого штаму вірусу діареї;
- вивчити інфекційну активність та антигенні властивості виробничого штаму вірусу діареї;
- визначити щепну дозу вакцини за показниками інфекційності виробничого штаму ВД та скомпонувати її склад;
- випробувати й дати оцінку властивостей вакцини за такими показниками якості: стерильністю, реактогенністю, нешкідливістю, антигенними властивостями та імуногенністю;
- вивчити імуномодулюючу дію бактеріального ліпополісахариду на розвиток імунітету під час застосування живої вакцини проти вірусної діареї.

Об’єкт дослідження: вірусна діарея великої рогатої худоби та специфічні засоби її профілактики.

Предмет дослідження: клітинні культури, виробничий штам вірусу діареї, бактеріальний ліпополісахарид, імунобіологічні властивості вакцини, післявакцинальний імунітет.

Методи дослідження. Робота виконана з використанням вірусологічних, бактеріологічних, серологічних, імунологічних, біохімічних, гематологічних та статистичних методів досліджень.

Наукова новизна одержаних результатів. На підставі здійснених уперше в Україні досліджень розроблено живу культуральну вакцину проти вірусної діареї великої рогатої худоби, для виготовлення якої використано модифікований виробничий штам ВК1М, репродукований у моношаровій культурі перещеплюваних клітин КСТ; створено препаративну форму сухого біопрепарату. Розроблена вакцина забезпечує високий рівень індукції вірусонейтралізуючих антитіл в організмі щеплених телят і запобігає клінічному прояву захворювання.
З метою корекції післявакцинального імунітету визначено доцільність застосування ліпополісахариду, виготовленого з культури Bacillus аlvei, одночасно з щепленням живої вакцини проти вірусної діареї.
Наукова новизна розробок підтверджена деклараційним патентом на корисну модель України №5153 «Спосіб профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби», (заявл. 12.07.2004р., опубл. 15.02.2005р.).

Практичне значення одержаних результатів полягає в тому, що для використання пропонуються жива культуральна вакцина проти вірусної діареї та імуностимулятор ліпополісахарид з культури Bacillus аlvei, а також спосіб їх одночасного застосування з метою специфічної профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби в неблагополучних господарствах.
За результатами здійснених досліджень розроблено й подано на експертизу в Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів та узгодження в Державному комітеті ветеринарної медицини України нормативна документація (інструкція з виготовлення та контролю за показниками якості вакцини живої культуральної проти вірусної діареї великої рогатої худоби, ТУУ на вакцину та листівка-вкладка щодо застосування цього біопрепарату), яку розглянуто та схвалено на засіданні методичної комісії ІЕКВМ УААН (протокол №16від 8грудня 2004року).

Основні положення, що виносяться до захисту:
- результати вивчення репродуктивних властивостей вірусу діареї в перещеплюваних культурах клітин;
- технологічний регламент виготовлення вакцини живої культуральної проти вірусної діареї ВРХ;
- результати вивчення післявакцинального імунітету у телят, щеплених проти вірусної діареї.
Особистий внесок здобувача. Авторка особисто здійснила аналіз літературних джерел за темою дисертації, самостійно виконала експериментальну частину роботи, зокрема, з підбору клітинної системи для культивування виробничого штаму вірусу діареї, розробила спосіб накопичення вірусної сировини для виготовлення вакцини, вивчила властивості вакцини за показниками якості, запропонувала корекцію післявакцинального імунітету за допомогою бактеріального ліпополісахариду.
Біохімічні та гематологічні дослідження здійснено спільно із співробітниками лабораторії біохімії ННЦ «ІЕКВМ», кандидатами біологічних наук Л.В.Коваленко та С.А.Михайловою.

Апробація результатів дисертації. Матеріали, подані в дисертації, доповідались і були схвалені на звітних сесіях Вченої ради і засіданнях методичної комісії ННЦ«ІЕКВМ» (20002007рр.) та міжнародних науково-практичних конференціях: «Ветеринарна медицина 2004. Сучасні аспекти розробки, маркетингу і виробництва ветеринарних препаратів» (2431травня 2004р., м.Феодосія), «Ветеринарна медицина 2005. Сучасний стан та актуальні проблеми забезпечення ветеринарного благополуччя тваринництва» (30травня4липня 2005р., м. Ялта).

Публікації. Основні положення дисертації опубліковано в 5наукових працях, з них 1одноосібна, у фахових виданнях, перелік яких затверджений ВАК України, та описі отриманого деклараційного патенту.

Структура дисертації. Дисертація викладена на 110сторінках комп’ютерного друку і містить такі розділи: вступ, огляд літератури, матеріали та методи досліджень, результати власних досліджень, їх узагальнення та аналіз, висновки, пропозиції виробництву, список використаної літератури за темою дисертації, додатки. Робота ілюстрована 7рисунками і 15таблицями. У списку літератури наявні 240джерел, у тому числі 143 закордонних авторів.

Список литературы

ВИСНОВКИ

1. У дисертації подано експериментальне й практичне вирішення проблеми специфічної профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби, а саме: створено живу культуральну вакцину та розроблено технологію її виготовлення. За результатами досліджень щодо вивчення тест-об’єкту для культивування вірусу діареї, його інфекційності, антигенних та імуногенних властивостей обрано клітинну систему і виробничий штам вірусу для напрацювання вихідної сировини з метою виготовлення вакцини. Створено препаративну форму вакцини живої культуральної проти вірусної діареї, обґрунтовано формування й корекцію післявакцинального імунітету, запропоновано комплексне застосування вакцини та імуномодулятора з бактеріального ліпополісахариду.
2. Розроблено живу культуральну вакцину проти вірусної діареї великої рогатої худоби з модифікованого штаму ВК-1М вірусу діареї, репродукованого в ролерній моношаровій культурі перещеплюваних клітин КСТ, з інфекційністю 5,45lgТЦД50/см3, яку стабілізовано в процесі ліофілізації за допомогою 5,6%‑ї сахарози і 2,8%-го желатину (кінцеві концентрації). Вакцина не контамінована сторонніми мікроорганізмами, нешкідлива для тварин, слабореактогенна, призначена для щеплення великої рогатої худоби в неблагополучних господарствах.
3. Перещеплювані культури клітин ТрТ, ВНК-21/13та КСТ мають високу проліферативну активність у процесі вирощування в суміші з рівних об’ємів поживних середовищ 199та Ігла і 10% нормальної сироватки крові великої рогатої худоби. Посівна концентрація з розрахунку 300тисяч клітин/см3поживного середовища забезпечує відповідно в 2,6; 4,8 і 4,9рази вищий їх приріст за ролерного способу культивування, який скорочує на 2048годин термін накопичення біомаси клітин для напрацювання вихідної для виготовлення вакцини вірусної сировини порівняно зі стаціонарним у матрасах.
4. Виробничий штам ВК-1М вірусу діареї, адаптований до розмноження в культурі перещеплюваних клітин у ролерних бутлях, зберігає активну репродуктивну здатність і має високу інфекційність. Оптимальний час репродукції та титр його інфекційності становить у культурі перещеплюваних клітин ТрТ відповідно 46годин і 7,05lgТЦД50/см3, ВНК-21/13 64години і 7,0lgТЦД50/см3. Більш придатною для репродукції та накопичення біомаси штаму ВК-1М є перещеплювана культура КСТ, яка забезпечує його репродукцію впродовж 40годин з інфекційністю 7,6lgТЦД50/см3.
5. Щеплення вакцини живої культуральної проти вірусної діареї в об’ємах 2 і 5см3, що вміщують відповідно 2×105,45ТЦД50 і 5×105,45ТЦД50вакцинного вірусу, забезпечує в імунізованих телят індукцію вірусонейтралізуючих антитіл, які виявляються на 7добу після введення препарату в титрах 5,0 і 6,0log2відповідно, рівень яких зростає на 28добу після повторного введення з інтервалом у 14діб до 6,0 і 7,7log2, відповідно, та утримуються на цьому рівні до 60доби, після чого на 180добі дещо знижуються до 5,9 і 6,75log2.
6. Обґрунтовано та практично підтверджено в експерименті залежність імуногенності виробничого штаму ВК-1М від його інфекційності в щепному об’ємі та кратності введення. Установлено, що з підвищенням дози вірусу в щепному об’ємі від 0,5×105,45ТЦД50до 1×105,45ТЦД50для морських свинок і від 2×105,45ТЦД50до 5×105,45ТЦД50для телят за дворазового введення зростає індукція вірусонейтралізуючих антитіл у 1,5рази в порівнянні з одноразовим і становить 7,3 і 8,0log2відповідно.
7. Вакцинний вірус (штам ВК-1М), у дозі 5×105,45ТЦД50в щепному об’ємі виявляє імуносупресивні властивості, про що свідчить підвищення в 3,5рази серомукоїдів у організмі щеплених проти вірусної діареї телят. Застосування бактеріального ліпополісахариду ЛПС-1, виготовленого з культури Bacillus alvei (штам 413), із розрахунку 7мкг/кг маси тіла телят одночасно із щепленням вакцини живої культуральної проти вірусної діареї активізує як специфічні, так і неспецифічні фактори резистентності у тварин, чинить імунореабілітуючу дію на імунну систему, згладжує імуносупресивність і підвищує імунну відповідь на виробничий штам вірусу діареї з продукцією вірусонейтралізуючих антитіл на 2log2вище порівняно з щепленням однієї вакцини в дозі 2×105,45ТЦД50/гол.
8. Запропоновано спосіб імунізації телят проти вірусної діареї в неблагополучних щодо цієї хвороби господарствах із застосуванням дворазового введення з інтервалом 14діб внутрішньом’язово 2см3вакцини живої культуральної, що вміщує 2×105,45ТЦД50виробничого штаму ВК-1М вірусу діареї, одночасно з ЛПС-1з розрахунку 7мкг/кг маси тіла тварини, що забезпечує формування гуморального імунітету, починаючи з 7-ї доби після щеплення, і захищає тварин від захворювання впродовж 180діб (термін спостереження).

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

1. Вакцина жива культуральна проти вірусної діареї великої рогатої худоби та нормативна документація (інструкція з виготовлення та контролю за показниками якості вакцини живої культуральної проти вірусної діареї великої рогатої худоби, ТУУ на вакцину живу культуральну проти вірусної діареї великої рогатої худоби та листівка-вкладка із застосування вакцини живої культуральної проти вірусної діареї великої рогатої худоби), що розглянута й схвалена на засіданні методичної комісії ІЕКВМ УААН (протокол №16від 8грудня 2004р.). Досьє на вакцину подано на експертизу до ДНКІБШМ та узгодження до Державного комітету ветеринарної медицини України.
2. Спосіб профілактики вірусної діареї великої рогатої худоби, що передбачає одночасне застосування вакцини живої культуральної проти вірусної діареї та імуностимулюючого ліпополісахариду ЛПС-1, виготовленого з Bacillus alvei.

СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ

1. Апатенко В.М. Паразитоценозы и перманентность имунной защиты [Текст] / В.М. Апатенко // Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини: Наук. виробн. зб., присвячений 150-річчю від дня заснування Харківського зооветеринарного інституту. Х., 2001. Вип. 9 (33), ч. 1. С. 51 54.
2. Афонюшкин В.Н. Исследование клинически здоровых животных к вирусу ВД БС [Текст] / В.Н. Афонюшкин, С.А. Юрик, В.И. Семенихин // Ветеринария. 2004. № 1. С. 12 13.
3. Бабкін М.В. Спорідненість вірусів діареї великої рогатої худоби, класичної чуми свиней та прикордонної хвороби овець [Текст] / М.В. Бабкін, В.І. Стеценко // Розвиток вет. науки в Україні: здобутки та проблеми: Зб. Матеріалів наук.-практ. конф., 2426 вересня 1997 р., м. Харків / ІЕКВМ. Х., 1997. С. 134136.
4. Бахтахунов Ю.Х. Изучение напряжённости и продолжительности иммунитета у телят, привитых вакциной против ВД крупного рогатого скота [Текст] / Ю.Х. Бахтахунов, Н.Н. Гизитдинов // Труды Казанского НИВИ. Казань, 1979. Т. 18. С. 81 83.
5. Бахтахунов Ю.Х. Изучение иммунобиологических свойств вируса диареи крупного рогатого скота [Текст] / Ю.Х. Бахтахунов // Вестник с.х. науки Казахстана. 1976. № 11. С. 93 95.
6. Белявская Т.В. Неспецифический гуморальный иммунитет при ассоциации ИРТ и ВД крупного рогатого скота [Текст] / Т.В. Белявская // Ветеринарная наука производству: Межвед. сб. БелНИВИ. Минск, 1996. Вып. 32. С. 27 30.
7. Белявская Т.В. Бивалентная вакцина против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи крупного рогатого скота [Текст] : Автореф. дис. ... канд. вет. наук / Т.В. Белявская. Минск, 1998. 17с.
8. Білокінь В.С. Експериментальне відтворення хвороби слизових” великої рогатої худоби [Текст] / В.С. Білокінь // Ветеринария: Респ. міжвід. темат. наук. зб. 1971. Вип. 28. С. 33 38.
9. Білокінь В.С. Культивування вірусу діареї великої рогатої худоби в перещеплюваних лініях клітин [Текст] / В.С. Білокінь, С.Т. Соловйов, П.Т.Берус: Зб. матеріалів міжнар. наук.практ. конф., 2426 вересня 1997 р., м. Харків. Х., 1997. С. 136 137.
10. Білокінь В.С. Емульсійна інактивована концентратвакцина проти хвороби Ауескі. (Технологія виготовлення, лабораторне і виробниче випробування) [Текст] Віктор Степанович Білокінь.: автореф. дис... д-ра вет. наук. Х., 1997. 38 с.
11. Бобрович В.Р. Лечебная эффективность гиперимунных сывороток и иммуноглобулинов против вирусных респираторных инфекций КРС в экспериментальных условиях [Текст] / В.Р. Бобрович, Н.А Ковалев // Ветеринарная наука производству: Межвед. сб. / БелНИВИ. Минск, 1984. Вып. 22. С. 56 61.
12. Бондар С.В. Порівняльне вивчення штамів збудника вірусної діареї великої рогатої худоби [Текст] / С.В. Бондар, В.Г. Скибицький // Биополимеры и клетка. 1999. Вып.15, № 4. С. 324 327.
13. Боринский И.Ф. Эффективность иммуномодуляторов при экспериментальных вирусных инфекциях [Текст] / И.Ф. Боринский, С.А.Нестерчук // Вопросы вирусологии. 1989. № 6. С. 645 650.
14. Бочаров О.А. Імуномодуляція і профілактика інфекційного рино-трахеїту у новонароджених телят [Текст] / О. А. Бочаров : автореф. дис. ... канд. вет. наук Х., 2003. 19 с.
15. Валеева Ф.К. Некоторые электронно-микроскопические данные вирусной диареи крупного рогатого скота [Текст] / Ф.К. Валеева, С.К.Салахова, Н.Н. Гизитдинов // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1976. № 2. С. 72 74.
16. Вишняков И.Ф. Молекулярная биология пестивирусов [Текст] / И.Ф. Вишняков, С.Ж. Цыбанов // Вестник РАСХН. 1996. № 3. С. 70 73.
17. Вирусная диарея болезнь слизистых крупного рогатого скота. Вирусные болезни животных [Текст] / В.Н. Сюрин, А.Я. [и др.]. М., 1998. С.135 158.
18. Влияние условий культивирования вируса диареи крупного рогатого скота на инфекционную и антигенную активность [Текст] / Т.Г. Ким [и др.] // Вирусные болезни с.-х. животных : тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф., г. Владимир, 1721 апреля 1995 г. Владимир, 1995. С. 86.
19. Выращивание вируса диареи и парагриппа (ПГ-3) в перевиваемых культурах клеток ПС и МДВК [Текст] / Н.И. Закутский [и др.] // Вирусные болезни с.-х. животных: Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф., Владимир, 17 21 апреля 1995 г. Владимир, 1995. С. 88.
20. Влияние вакцинации и иммуномодуляторов на течение ИРТ у быков производителей [Текст] / А.Г. Глотов [идр.] // Ветеринария. 2003. №2. С. 17 20.
21. Гуненков В.В. Основные направления изучения вирусных пневмоэнтеритов телят [Текст] / В.В. Гуненков, Р.В. Белоусова, В.Н.Сюрин// Ветеринария. 1982. № 4. С. 65 66.
22. Діагностика вірусної діареї молодняка великої рогатої худоби за допомогою реакції гельприципітації [Текст] /Є.В. Андрєєв [та ін.] // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1976. Вип. 44. С.3 7.
23. Даугалиева Э.Х. Определение циркулирующих иммунных комплексов по методу Ю.А. Гриневича и Н.И. Алферова (1981) / Имунный статус и пути его коррекции при гельминтозах с.-х. животных [Текст] / Э.Х.Даугалиева, В.В. Филиппов // Науч. труды ВАСХНИЛ. М., 1991. С.83.
24. Девришев Д.А. Клинико-гематологические показатели у телят, экспериментально зараженных вирусами ИРТ, ПГ-3, ВД и вакцинированных против этих болезней // Пути ликвидации инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных [Текст] / Д.А. Девришев, Т.Г. Подморокова, Е.И. Тушанова: Сб. науч. тр. / МВА. М., 1980. С. 56 58.
25. Дженсен Р. Болезни крупного рогатого скота при промышленном откорме [Текст] / Р. Дженсен, Д. Маккей. М.: Колос, 1977. 357 с.
26. Дранкин Г.Н. Иммунотропные препараты [Текст] / Г.Н. Дранкин, Ю.А. Гриневич, Г.М. Дизик. К., 1994. 228 с.
27. Дудников А.И. Перспективы использования адъювантов в противоящурных вакцинах [Текст] / А.И. Дудников // Разработка и использование новых адъювантов для биотехнологических целей : материалы семинара специалистов стран-членов СЭВ. Владимир, 1990. С. 3 6.
28. Жидков С.А. Вирусная диареяболезнь слизистих оболочек крупного рогатого скота (характеристика возбудителя, диагностика и специфическая профилактика) [Текст] / С.А.Жидков : автореф. дис. ... д-ра вет. наук / ВИЭВ. М., 1994. 44 с.
29. Жуков С.А. Генетические признаки аттенуированного и исходного вирусов диареи (ВД-БС) [Текст] / С.А. Жуков , С.В. Суворов // Труды ВИЭВ. М, 1981. Т. 53. С.29 34.
30. Жуков С.А. Вирусная диарея крупного рогатого скота [Текст] / С.А.Жуков // Ветеринария. 1989. № 3. С.41 42.
31. Журавлёв В.М. Патоморфология при вирусной диарее крупного рогатого скота [Текст] / В.М. Журавлёв, В.С. Белоконь // Ветеринария. 1978. № 3. С. 49 51.
32. Зудилина З.Ф. Выделение и идентификация вируса диареи крупного рогатого скота [Текст] / З.Ф. Зудилина, Н.Н. Крюков // Бюл. Всесоюзного института експериментальной ветеринарии. М., 1971. № 11. С. 11 12.
33. Иммунный ответ у животных на введение вакцины Тривак ВИЭВ [Текст] / Е.М. Ревякина [и др.] // Ветеринария. 1998. № 6. С. 25 27.
34. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине [Текст] / П.А.Красочко [и др.]. Смоленск, 2001. 352 с.
35. Изучение чувствительности перевиваемой линии клеток ПЭК к вирусу диареи [Текст] / Н.Н. Гизитдинов [идр.] // Ветеринария. 1976. №12. С. 29 30.
36. Илясова Л.С. Патогенность возбудителя вирусной диареи для нетелей [Текст] / Л.С. Илясова, Н.Н. Михайлов, С.А. Жидков // Ветеринария. 1986. № 1. С.36.
37. Кабанков Ю.С. Гипериммунная сыворотка при диарее телят // Проблемы науч. обеспечения животноводства Молдавии [Текст] / Ю.С.Кабанков, С.Ф. Армату, М.М. Гоголев : сб. науч. тр. Кишенев, 1990. С.123 124.
38. Кармолиев Р.Х. Иммуносупрессорные процессы при коллостральном иммунитете у телят [Текст] / Р.Х. Кармолиев // Ветеринария. 1993. № 6. С. 27 30.
39. Кармолиев Р.Х. Роль иммуносупрессорных белков в системе иммунитета у крупного рогатого скота [Текст] / Р.Х. Кармолиев // Ветеринария. № 8 С. 23 24.
40. Карпуть И.М. Иммунология и иммунопатология болезней молодняка [Текст] / И.М. Карпуть Минск: Ураджай, 1993. 288 с.
41. Ким Т.Г. Изучение условий поддерживания и хранения вируса диареи // Вирусные болезни с.-х. животных [Текст] / Т.Г. Ким, А.В. Борисов, С.А. Дудников : тез. докл. Всерос. науч.-практ. конференции, г. Владимир, 1721 апреля 1995 г. Владимир, 1995. С. 143.
42. Коромыслов Г.Ф. Иммуностимуляция: средства, методы, перспективы [Текст] / Г.Ф. Коромыслов, П.Е. Игнатов // Сельскохозяйственная биология. 1983. № 7. С.99 107.
43. Красочко П.А. Бактериальный липополисахарид стимулятор поствакцинального иммунитета при вирусных респираторных инфекциях телят [Текст] / П.А. Красочко , В.А. Машеро // Учёные записки Витебской гос. акад. вет. медицины. Витебск, 1998. Т. 34. С. 144 146.
44. Красочко П.А. Иммунодефицит и его коррекция при инфекционном ринотрахеите и вирусной диарее у телят [Текст] / П.А.Красочко, И.А.Красочко, С.М. Усов // Ветеринарная наука производству: Межвед.сб. БелНИВИ. Минск, 1999. Вып. 34. С. 40 50.
45. Красочко П.А. Активизация поствакцинального иммунитета у телят с помощью альвеозана [Текст] / П.А. Красочко, В.А. Машеро // Актуальные проблемы патологии с.-х. животных : материалы междунар. науч.-практ. конф., 56 октября 2000г. / БелНИИЭВ им. Вышелесского С.Н. Минск, 2000. С. 120123.
46. Куликова И.Л. Культура клеток сосудов сердца телёнка и чувствительность этой культуры к вирусу диареи крупного рогатого скота [Текст] / И.Л. Куликова, Л.П.Дьяконов, С.А. Жидков // Цитология. 1992. Т.34, № 9. С. 75.
47. Куриннов В.В. К вопросу о межвидовой передаче пестивирусов [Текст] / В.В. Куриннов, И.Ф. Вишняков, В.Ю. Луговцев // Вопросы микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Ульяновск, 1998. С. 166 167.
48. Кучерявенко А.А. Изыскание преципитирующих антигенов вирусов инфекционного ринотрахеита-пустулёзного вульвовагинита и вирусной диареи болезни слизистих крупного рогатого скота [Текст] / А.А.Кучерявенко : автореф. дис... канд. вет. наук. Х., 1978. 18 с.
49. Кучерявенко В.В. Розробка та вивчення властивостей вакцини емульсійної інактивованої проти інфекційного ринотрахеїту та вірусної діареї великої рогатої худоби [Текст] / В.В.Кучерявенко : автореф. дис. ... канд. вет. наук / ІЕКВМ. Х, 2005. 20 с.
50. Левченко К. Ідентифікація вірусів КЧС і вірусної діареї великої рогатої худоби [Текст] / К. Левченко // Тваринництво України. 1998. № 4 С. 25 26.
51. Лихолетов С.М. Современные аспекты разработки вакцин, адъювантов и иммуномодуляторов [Текст] / С.М. Лихолетов // Успехи современной биологии. 1988. Т. 105, Вып. 1. С. 83 97.
52. Макаров В.В., Чевелев С.Ф. Вирусы как причина вторичных иммунодефицитов животных [Текст] / В.В. Макаров, С.Ф. Чевелев // Вопросы вирусологии. 1984. Т. 29, № 2. С.147 151.
53. Машеро В.А. Состояние иммунитета и его коррекция в условиях промышленной технологии выращивания молодняка крупного рогатого скота [Текст] / В.А. Машеро : Автореф. дис канд. вет. наук. Минск, 2001. 20 с.
54. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике респираторных и желудочно-кишечных заболеваний телят вирусной и бактериальной этиологии [Текст] / П.А. Красочко [и др.]. Минск: Энциклопедикс, 2000. 32 с.
55. Методические рекомендации по выделению иммуноглобулинов G, M и A классов, получению к ним моноспецифических антисывороток и определению их количества у крупного рогатого скота и птиц [Текст] / Н.В.Кленина, В.С. Антонов, С.А. Михайлова / УНИИЭВ. Х, 1983. 23 с.
56. Меры борьбы с вирусной диареей крупного рогатого скота [Текст] / Р.С.Галиев // Ветеринария. 1987. №6. С. 33 34.
57. Науменков Б.И. Значение иммунологического мониторинга в профилактике вирусных пневмоэнтеритов крупного рогатого скота [Текст] / Б.И. Науменков // Учёные записки Витеб. гос. акад. вет. медицины. Витебск, 1996. Т.33. С.72 73.
58. Никольский В. Иммуногенные и реактогенные свойства культурального штамма вируса диареи крупного рогатого скота [Текст] / В.Никольский, С. Файзулина, Р.Галиев // Инфекционные болезни животных и вопросы природной очаговости: Сб. науч. тр. Фрунзе, 1979. С.87 93.
59. Осидзе Д.Ф. Получение культур клеток из тканей животных и их использование в вирусологии [Текст] / Д.Ф. Осидзе. М. 1975. 104 с.
60. Острые респираторные вирусные инфекции крупного рогатого скота в Свердловской области [Текст] / О.Г. Петрова [и др.] // Ветеринария. 2002. № 2. С. 11 15.
61. Оптимізація методу очищення і концентрування вірусу діареї великої рогатої худоби [Текст] / В.С. Білокінь [та ін.]. // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2000. Вип. 77. С. 28 33.
62. Очистка и концентрирование культурального вируса диареи КРС [Текст] / Т.А. Сатина [и др.] // Вирусные болезни с.-х. животных : тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф., г. Владимир, 17 21 апреля 1995 г. Владимир, 1995. С. 142.
63. О неспецифической профилактике вирусной диареи крупного рогатого скота [Текст] / Н.Н. Крюков [и др.] // Ветеринария. 1978. № 1. С.37 39.
64. Профилактическая эффективность трёхвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи и парагриппа-3 крупного рогатого скота [Текст] / П.А. Красочко [и др.] // Актуальные проблемы патологии с.-х. животных : материалы междунар. науч.-практ. конф., 56 октября 2000 г. / БелНИИЭВ им. С.Н. Вышелесского Минск, 2000. С.115 117.
65. Петрянкин Ф.П. Коррекция неспецифической резистентности организма крупного рогатого скота новыми биогенными препаратами [Текст] / Ф.П. Петрянкин : автореф. дис д-ра. вет. наук / Казан. гос. акад. вет. медицины. Казань, 1997. 34 с.
66. Ревякина Е.М. Иммуногенные и реактогенные свойства ассоциированной трёхвалентной вакцины против инфекционного ринотрахеита, парагриппа -3, вирусной диареи болезни слизистих крупного рогатого скота [Текст] : Автореф. дис... канд. вет. наук / Е.М. Ревякина /ВИЭВ. М., 1998. 23с.
67. Реджепова Т.Р. Новый способ повышения неспецифической резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят [Текст] / Т.Р. Реджепова, Е.П. Сисягина // Научно-технический прогресс в животноводстве России ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства. Дубровицы, 2003. Т.1. С. 197 201.
68. Романович М. Стимуляція резистентності організму корів та їх приплоду важливий захід профілактики шлунково кишкових захворювань новонароджених [Текст] / М. Романович // Вет. медицина України. 1997. №5. С. 16.
69. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогатого скота [Текст] / А.Г. Глотов [идр.] // Ветеринария. 2002. № 3. С.17 21.
70. Разработка метода иммуногенности инактивированной вакцины против вирусной диареи крупного рогатого скота [Текст] / З.Я. Чистова [идр.]// Биологические препараты против инфекционных болезней животных. М., 1986. С .93 98.
71. Роль ассоциации рота , корона и пестивирусов в этиологии энтеритов телят, перспектива диагностики и иммунопрофилактики [Текст] / Г.Ф. Коромыслов [и др.] // Вирусные болезни с.-х. животных : тез. докл. / Всерос. науч.-практ. конф. Владимир 17 21 апреля 1995 г. Владимир, 1995. С. 219.
72. Сергеев В.А. Вирусные вакцины [Текст] / В.А. Сергеев. К.: Урожай, 1993. 336 с.
73. Скибицький В.Г. Етіологічні аспекти масових шлунково-кишкових захворювань новонароджених телят і тактика лікувально-профілактичних заходів [Текст] / В.Г. Скибицький // Вет. медицина України. 2002.-№ 2. С.21 22.
74. Сравнительная характеристика иммуностимуляторов природного происхождения [Текст] / П.А. Красочко [и др.] // Актуальные проблемы пато