ІМУНОГІСТОХІМІЧНА ДІАГНОСТИКА ТА ОЦІНКА КЛІТИННОГО ІМУНІТЕТУ ПРИ САЛЬМОНЕЛЬОЗІ КУРЕЙ

Краткое описание

УКРАЇНСЬКА АКАДЕМІЯ АГРАРНИХ НАУК
ННЦ «ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ»

На правах рукопису
УДК 619:579.842.14:611.018:636.5:616076
ШУТЧЕНКО
ПАВЛО ОЛЕКСАНДРОВИЧ

ІМУНОГІСТОХІМІЧНА ДІАГНОСТИКА ТА ОЦІНКА КЛІТИННОГО ІМУНІТЕТУ ПРИ САЛЬМОНЕЛЬОЗІ КУРЕЙ

16.00.03 ветеринарна мікробіологія та вірусологія

ДИСЕРТАЦІЯ
на здобуття наукового ступеня
кандидата ветеринарних наук

Науковий керівник
КРАСНІКОВ Г. А.
доктор ветеринарних наук, професор,
академік УААН

Харків 2007

ЗМІСТ
Сторінка
ВСТУП........................................................................................................................6
РОЗДІЛ 1. ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ..........................................................................12
1.1. Сальмонельози птиць, їх поширення та епізоотологічне значення.............12
1.2. Характеристика збудників сальмонельозу, їх антигенна структура та біохімічні властивості..............................................................................................14
1.3. Методи діагностики сальмонельозу................................................................18
1.3.1. Серологічні методи........................................................................................18
1.3.2. Імунологічні методи.......................................................................................22
1.4. Характеристика змін внутрішніх органів при сальмонельозі.......................25
1.4.1. Патологоанатомічні зміни.............................................................................25
1.4.2. Патогістологічні зміни у хворої птиці..........................................................27
1.4.3. Імуногістохімічні зміни субпопуляцій Т-лімфоцитів, В-лімфоцитів
та макрофагів при сальмонельозі............................................................................29
1.4.3.1. Розвиток досліджень щодо ідентифікації клітин імунітету їхніх
популяцій і субпопуляцій........................................................................................31
1.4.3.2. Імуногістохімічні методи дослідження в імунології...............................33
1.4.3.3. Застосування методів імуногістохімії в медицині та ветеринарії..........35
1.4.3.4. Застосування методів визначення кластерів клітин імунітету при
вивченні cальмонельозу...........................................................................................36
1.5. Аналіз огляду літератури..................................................................................37
РОЗДІЛ 2. ВЛАСНІ ДОСЛІДЖЕННЯ....................................................................39
2.1. МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ..................................................39
2.1.1. Курчата............................................................................................................39
2.1.2. Кролі................................................................................................................40
2.1.3. Бактеріальні штами сальмонел ....................................................................40
2.1.4. Моноклональні антитіла...............................................................................41
2.1.5. Імуногістохімічний метод визначення клітин імунітету...........................41
2.1.5.1. Кіт-система..................................................................................................42
2.1.5.2. Реагенти, які не входять до складу кіт-системи...................................42
2.1.5.3. Розведення моноклональних антитіл....................................................42
2.1.5.4. Підготовка компонентів кіт-системи та інших компонентів для
імуногістохімічної реакції...................................................................................43
2.1.5.5. Застосування фосфатно-сольового буферу (PBS)................................44
2.1.5.6. Постановка імуногістохімічної реакції за методом міченого
стрептавідин-біотину...........................................................................................44
2.1.5.7. Оцінка імуногістохімічного забарвлення.............................................45
2.1.6. Імуногістохімічний метод діагностики сальмонельозу курей..............45
2.1.6.1. Отримання поліклональних антитіл.....................................................45
2.1.6.1.1. Гіперімунізація кролів.........................................................................45
2.1.6.1.2. Отримання сироватки крові кролів та поліклональних антитіл...................................................................................................................46
2.1.6.2. Розведення компонентів імуногістохімічної реакції для
діагностики сальмонельозу курей......................................................................46
2.1.6.3. Етапи імуногістохімічного фарбування зрізів для виявлення
антигенів сальмонел............................................................................................47
2.1.6.4. Оцінка результатів імуногістохімічного дослідження........................47
РОЗДІЛ 3. РЕЗУЛЬТАТИ ВЛАСНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ....................................49
3.1. Вивчення динаміки клітин імунітету в інтактних SPF курчат
різного віку............................................................................................................49
3.2. Вивчення динаміки кластерів імунітету курчат після щеплення
вакциною SalmovacSEÒ.......................................................................................52
3.3. Динаміка кластерів клітин імунітету курчат, мічених стрептавідин-
біотином після застосування епізоотичного штаму S.enteritidis SE 147........66
3.4. Імуногістохімічні зміни у внутрішніх та імунокомпетентних
органах і тканинах курчат при сальмонельозі...................................................78
3.4.1. Вивчення динаміки накопичення сальмонельозного антигену у
внутрішніх та імунокомпетентних органах і тканинах курчат після
орального зараження Salmonella enteritidis........................................................78
3.4.2. Вивчення динаміки накопичення сальмонельозного антигену у
внутрішніх та імунокомпетентних органах і тканинах курчат після внутрішньом’язового зараження Salmonella enteritidis......................................94
3.5. Вивчення параметрів маси органів курчат після орального зараження
збудником сальмонельозу.......104
РОЗДІЛ 4. ОБГОВОРЕННЯ ОТРИМАНИХ РЕЗУЛЬТАТІВ..........................109
ВИСНОВКИ..........................................................................................................122
ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ................................................................................125
СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ......................................................126
ДОДАТКИ.............................................................................................................150

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

DAB - 3,3’-діамінобензидину тетрагідрохлорид
Ig - імуноглобулін
IgA - маркер клітин-продуцентів імуноглобуліна класу A
IgM - маркер клітин-продуцентів імуноглобуліна класу М
IgG - маркер клітин-продуцентів імуноглобуліна класу G
МПА - м’ясо-пептонний агар
МПБ - м’ясо-пептонний бульйон
SPF - вільні від специфічних патогенів
сfu - клітинно-утворюючі одиниці
CD - кластер диференціації
CD3 - загальні Т-клітини периферійних лімфоїдних органів
CD4 - Т-хелперні лімфоцити
CD8 - Т-цитотоксичні клітини і нормальні Т-кілери
CVI - тканинні макрофаги
TcR1 - клітинний маркер головного комплексу гістосумісності типу 1 (gd-Т-клітини)
TcR2 - маркер клітин головного комплексу гістосумісності типу 2 (ab-Т-клітини)
ФСБ - фосфатно-сольовий буфер

ВСТУП
Актуальність теми. Сальмонельоз розглядається як одне з небезпечних захворювань у птахівництві всіх країн світу. Він викликає загибель птиці і є причиною виникнення токсикоінфекцій у людей. Сальмонельози мають велике епізоотичне та епідеміологічне значення. Спостерігається різке збільшення випадків виявлення хазяїноспецифічних сероваріантів сальмонел, виділених від людей і тварин. Одним з основних джерел збудника є хвора птиця, яйця та інші продукти птахівництва. Причинами посилення небезпеки захворювання та можливості зараження людей можуть бути безсимптомне перехворювання на сальмонельоз і хронічне носійство [1, 3, 176, 199].
Усе це підкреслює необхідність розробки та впровадження ефективних заходів специфічної профілактики сальмонельозу птиці, які передбачають використання високочутливих і специфічних методів діагностики, застосування активних імунізуючих препаратів, вивчення особливостей стану імунітету за цієї хвороби. Методологічно такі роботи все більше ґрунтуються на використанні імуноферментних методів у мікробіологічних, імунологічних та імуногістохімічних дослідженнях із застосуванням поліклональних та моноклональних антитіл [46, 50, 57, 76, 94, 101, 103, 141, 182].
Засоби діагностики сальмонельозів, що застосовуються в Україні, ще трудомісткі і є недостатньо чутливими та специфічними, у той час як за кордоном ведуться активні пошуки сучасних методів і вже починають застосовувати навіть у масштабах державних програм такі високочутливі тести, як ПЛР та ІФА. У ряді країн, зокрема в Німеччині, розпочалися роботи з визначення можливості застосування з цією метою імуногістохімічних досліджень [47]. Отримані дані свідчать про перспективність розвитку таких досліджень, особливо при вивченні динаміки формування імунної відповіді на введення вакцин та після зараження птиці збудниками захворювання. Вони поєднують у собі можливості сучасної гістології та імуногістохімічного аналізу на клітинному або тканинному рівнях і дають можливість диференціювати клітини імунітету у фіксованому матеріалі навіть після тривалого його зберігання [47, 64].
Завдяки застосуванню методів імуногістохімії з’явилася можливість дослідити формування імунітету в птиці на рівні субпопуляцій Т- і В-лімфоцитів та макрофагів. Особливо інформативним виявилося використання в імуногістохімії методу, що передбачає застосування міченого стрептавідин-біотину при зараженні птиці Salmonella typhimurium [47, 151].
За своїм принципом методи імуногістохімії ґрунтуються на імуноферментному виявленні антигенів за допомогою специфічних або антивидових сироваток, мічених пероксидазою, у зрізах тканин, мазках, моношарі клітин та ін.. [114, 115].
В Україні такі дослідження не здійснювалися. За даними літератури, ці методи в нас ще не знайшли достатнього визнання та застосування, хоча мають значну перспективу у ветеринарній медицині, і на відміну від існуючих методів ІФА, їх можна здійснювати, використовуючи фіксований патологічний матеріал.

Зв´язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Тема дисертаційної роботи є частиною досліджень, передбачених тематичним планом ІЕКВМ УААН: «Дослідити механізми формування клітинного і гуморального імунітету з метою удосконалення методів діагностики, профілактики і лікування заразних хвороб тварин», 20012005рр, № державної реєстрації 010101U001615 та «Вивчити фундаментальні та прикладні основи формування імунітету і регуляції метаболізму з метою створення нових методів діагностики, лікування та профілактики хвороб тварин, 20062010рр», № державної реєстрації 0106U000339.

Мета роботи. Метою роботи було визначити за допомогою сучасних імуногістохімічних методів зміни кількості основних кластерів імунокомпетентних клітин селезінки та бурси Фабриціуса в динаміці формування імунітету в курчат після зараження сальмонелами або щеплення їх атенуйованою вакциною проти цього захворювання, розробити методику імуногістохімічного виявлення сальмонельозних антигенів, місць їхньої локалізації в органах курчат, заражених сальмонельозом.
Задачі досліджень.
Для досягнення зазначеної мети були визначені такі завдання:
вивчити зміни вмісту найбільш показових кластерів клітин імунітету CD3, CD4, CD8, TcR1, TcR2, IgM, IgG, IgA та CVI у бурсі Фабриціуса та селезінці SPF курчат у період між 1-ю та 51-ю добами життя;
здійснити порівняльні імуногістохімічні дослідження вмісту клітин показових кластерів при формуванні імунітету в курчат різного віку після зараження епізоотичним штамом Salmonella enteritidis;
визначити динаміку вмісту показових кластерів імунітету в курчат різного віку після щеплення атенуйованою вакциною проти сальмонельозу Salmovac SE;
вивчити динаміку зміни мас тимуса, бурси Фабриціуса, селезінки, печінки та залозистого шлунка після орального та внутрішньом’язового зараження курчат Salmonella enteritidis;
опрацювати методику двохетапного імуногістохімічного визначення сальмонельозного антигена в зрізах органів і тканин;
здійснити імуногістохімічне визначення місць розподілу та кількості сальмонельозного антигена в тканинах та органах імунітету курчат після орального та внутрішньом’язового зараження курчат сальмонелами.

Об’єкт дослідження: сальмонельоз курей та імуногістохімічні методи діагностики цього захворювання.

Предмет дослідження: Динаміка формування імунітету, імуногістохімічна індикація кластерів клітин у здорової (SPF), щепленої та хворої на сальмонельоз птиці, а також динаміка накопичення та місця розташування сальмонельозного антигена у внутрішніх органах і тканинах курчат.

Методи досліджень. Робота виконувалася з використанням серологічних, бактеріологічних, біохімічних, патогістологічних, імуногістохімічних та статистичних методів.

Наукова новизна отриманих результатів. Застосування принципово нового підходу до вивчення особливостей динаміки формування імунітету шляхом імуногістохімічного вивчення відповідальних кластерів клітин дозволяє розпочати новий напрямок його досліджень у ветеринарних наукових закладах України. На підставі здійснених досліджень отримано нові дані про склад кластерів імунітету в курчат різного віку та зміни його при захворюванні і імунізації проти сальмонельозу, встановлені показники кількості та особливості характеру маркованих клітин у нормі, визначені потенціальні можливості імуногістохімії як чутливого і точного методу оцінки стану клітинного (тканинних лімфоцитів, нормальних кілерів, хелперів та макрофагів) і гуморального (клітини, що продукують гама- та секреторні імуноглобуліни) імунітетів. Отримані нові дані про особливості післяінфекційного та післявакцинального імунітетів при сальмонельозі і показана провідна роль фабрицієвої бурси при формуванні імунітету при сальмонельозі.
Ознаки нового має запропонований метод виявлення сальмонельозного антигена в тканинах та органах хворих та інфікованих тварин, що відкриває подальші можливості експресного виявлення продуктів, контамінованих сальмонелами. Певне значення отримані дані мають і для нормальної гістології, бо склад кластерів клітин імунітету здорової птиці потребує ґрунтовного вивчення.

Практичне значення одержаних результатів. У лабораторних умовах розроблено та випробувано спосіб діагностики сальмонельозу курей шляхом імуногістохімічного дослідження продуктів забою птиці на контамінацію сальмонелами та впроваджено рекомендації щодо визначення стану імунітету за вмістом кластерів клітин імунітету при сальмонельозі.
На підставі результатів експериментальних досліджень розроблено «Методичні рекомендації з імуногістохімічної діагностики та оцінки імунітету при сальмонельозі птиці». Науково-практичну новизну підтверджено патентами: «Спосіб імуногістохімічної діагностики сальмонельозу курей» (27.08.2007, № 25815, G01N33/00) та «Імуногістохімічний спосіб експертизи м’яса і продуктів забою птиці на контамінацію сальмонелами» (03.09.2007, № 26855).

Особистий внесок здобувача.
Автор особисто здійснив аналіз літературних даних за темою роботи, обґрунтував методи наукових досліджень; виконав наукові програми, які покладені в основу дисертації, розробив схеми та методи проведення експериментів; виконав експериментальні та аналітичні дослідження, виконав аналіз та узагальнення одержаних результатів; сформулював висновки і практичні рекомендації, провів роботу з підготовки та затвердження патентних документів.
Бактеріологічні дослідження виконувалися також у лабораторії з вивчення бактеріальних хвороб птиці ННЦ «ІЕКВМ» спільно з к. вет. н. Кіпричем В.В. Серологічні дослідження здійснювалися в лабораторії вивчення хвороб молодняка ННЦ «ІЕКВМ» спільно з к. вет. н. Кольчик О.В. Біохімічні дослідження відбувалися за участю співробітника лабораторії біохімії ННЦ«ІЕКВМ», к. біол. н. Михайлової С.А.

Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи були повідомлені та обговорені на звітних сесіях вченої ради ННЦ «ІЕКВМ» УААН (м.Харків) у 20022006 рр. та науково-практичних конференціях: «Актуальні проблеми ветеринарної медицини в умовах сучасного ведення тваринництва» (АР Крим, м.Феодосія, 2003р.), ІІІконференції Всеукраїнського товариства ветеринарних патологів (21 23 квітня 2004 р., Харків), Міжнародній науковій конференції «Тварини. Здоров’я. Якість кормів» (15 жовтня 2004 р., Єлгава, Латвія), «Сучасні аспекти розробки маркетингу і виробництва ветеринарних препаратів» (АР Крим, м.Феодосія, 2004р.), Міжнародній науково‑практичній конференції «Современное состояние и актуальные проблемы обеспечения ветеринарного благополучия животноводства» (АР Крим, м.Ялта, 2005р.), Міжнародній науковій конференції «Актуальные вопросы борьбы с инфекционными заболеваниями в гуманной и ветеринарной медицине» (27 30 листопада 2005 р., Харків), Міжнародній науково-виробничій конференції, присвяченій 100-річчю з дня народження професора Авророва А.А. (22 23 червня 2006 року, м. Вороніж, РФ), науково-практичній конференції з міжнародною участю: «Актуальні проблеми молекулярної діагностики у ветеринарній медицині та біології» (2225 травня 2007 р., АРКрим, м.Феодосія).

Публікації. Основний зміст дисертаційної роботи викладено у 13 наукових працях, із них 12 опубліковані у фахових виданнях, перелік яких затверджено ВАК України. Отримано 2 патенти.

Структура дисертації. Основний зміст дисертації викладено на 125 сторінках друкованого тексту і складається з таких розділів: вступ, огляд літератури, матеріали та методи досліджень, результати власних досліджень, аналіз та узагальнення одержаних результатів, практичні пропозиції, висновки, список використаної літератури, додатки. Роботу ілюстровано 45 рисунками та 6таблицями. Список використаних літературних джерел містить 223найменування, серед них 207 праць зарубіжних авторів.

Список литературы

ВИСНОВКИ

1. Вивчено основні кластери клітин імунітету (СD3, CD4, CD8, TcR1, TcR2, CVI, IgM, IgG та IgA), динаміку розвитку цих компонентів клітинного імунітету у SPF курчат після інфікування патогенним збудником та щеплення атенуйованою вакциною проти сальмонельозу. Отримані дані про особливості складу кластерів за постінфекційного та поствакцинального імунітетів у птиці, визначена роль певних кластерів на різних етапах формування імунітету. Розроблено двоступеневий метод імуногістохімічної індикації сальмонельозного антигена в зрізах із тканин, інфікованих збудником сальмонельозу птиці шляхом використання поліклональних імуноглобулінів. Визначені строки та місця максимального накопичення антигену, що підвищує ефективність діагностики захворювання та удосконалює експертизу продуктів забою птиці, контамінованих сальмонелами.
2. У селезінці контрольних неінфікованих SPF курчат між 1-ю та 8-ю добами їхнього життя різко зростала кількість клітин з маркерами CD3, CD4, CD8, CVI, IgG. З 15-ї доби майже вдвічі зменшувалася кількість клітин з маркером IgA, яка потім помітно підвищувалася на 17-у 51-у доби (0,263±0,063% на 51-у добу).
3. У бурсі Фабриціуса SPF курчат з 13-ї по 51-у доби спостерігалося стабільне зменшення вмісту клітин з маркерами CD3, CD4 та CD8. Кількість клітин з маркером CVІ незначна та була з 15-ї по 51-у доби практично на рівні одноденних курчат (16,085±0,239% на 51-у добу). Істотно, але короткочасно, на 8-у13-у доби збільшувалася кількість клітин з маркерами IgG (1,012±0,158% на 10-у добу). Отже склад клітин із маркерами у фабрицієвій бурсі коливався, що свідчить про наявність у ній певних ознак зростання кількості кластерів залежно від віку, причиною чого могла бути відсутність антигенної стимуляції у SPF курчат.
4. Найбільш низька кількість усіх досліджених кластерів клітин селезінки була в одноденних курчат. На 8-у добу їхня кількість виходила на певні стартові рівні, які у 2-5 разів перевищували значення кластерів у одноденних курчат. У фабрицієвій бурсі така закономірність не спостерігалась, і тільки вміст клітин з маркерами імуноглобулінів у цьому органі помітно зростав, починаючи з 13-ї доби для IgG від 0,496±0,083 (1-а доба) до 0,740±0,046 (51-а доба) та для IgA від 0,019±0,003 (1-а доба) до 0,188±0,036 (на 51-у добу).
5. Імунітет у щепленої птиці відрізнявся від такого в зараженої більшою кількістю клітин з маркерами CD8 та ІgG у бурсі Фабриціуса, а в селезінці клітин з маркерами ТсR2, IgM, IgA, CD8, CVI, CD3.
6. За даними визначення вмісту різних імунокомпетентних клітин у селезінці та бурсі Фабриціуса після імунізації курчат проти сальмонельозу, на відміну від зараженої птиці, швидше розвивався процес формування глобулінпродукуючих клітин. При цьому переважну роль відігравала бурса Фабриціуса. Важливе значення в створенні захисту проти сальмонельозу відігравали також секреторні імуноглобуліни, найбільший відсоток яких продукувався в бурсі (7,263±0,045% на 21-у добу) і менша частина в селезінці (0,606±0,013% на 51-у добу).
7. Кількість глобулінпродукуючих клітин (IgG) у бурсі Фабриціуса стабілізувалася на максимальному рівні в імунізованих та інфікованих курчат на 13-у добу і утримувалася на постійному рівні до 51-ї доби включно та була вищою в щепленої птиці, у той час як кількість секреторних імуноглобулінів (IgA) досягала в ній стабільно високого рівня на 15-ту добу (7,158±0,146%), починала знижуватися після 21-ї доби (4,175±0,138% на 51-у добу) та була більшою в інфікованої птиці, що дозволяє відрізнити післяінфекційний імунітет від післявакцинального при сальмонельозі птиці.
8. Запропонований двохетапний метод імуногістохімічного визначення сальмонельозного антигена дозволяє виявляти його в зрізах тканин хворої на сальмонельоз птиці, визначати місця локалізації, вивчати динаміку та кількість накопичення.
9. У курчат, орально інфікованих збудником сальмонельозу, антиген інтенсивніше накопичувався в печінці (14,80±0,028% на 15-у добу) та селезінці (34,75±0,038% на 15-у добу). За внутрішньом’язового інфікування курчат спостерігалося накопичення антигена, особливо в бурсі Фабриціуса (6,20±0,014% на 15-у добу), селезінці (44,10±0,042% на 30-у добу) та м’язовій тканині (11,00±0,039% на 15-у добу).

ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ

1. Методичні рекомендації з імуногістохімічної діагностики та оцінки імунітету при сальмонельозі птиці затверджені науково-методичною радою Держдепартаменту ветеринарної медицини України, протокол №3 від 20.12.2006 року.

СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ

1. Ахмедов, А. М. Сальмонеллезы молодняка / А. М. Ахмедов. М.: Колос, 1983. 240 с.
2. Бессарабов, Б.Ф. Болезни сельскохозяйственной птицы / Б.Ф.Бессарабов. М.: Колос, 1970. 184 с.
3. Бортнічук, В.А. Особливості прояву сальмонельозу курей в умовах птахофабрики / В.А. Бортнічук, О.В. Перепелиця // Ветеринарна медицина України. 1998. №7. С.16 17.
4. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы / Дж.Полак, С. Ван Норден. М.: Мир, 1987. 80 с.
5. Вивчення стану циркуляції сальмонел у регіонах України / Л.К.Волинець [та ін.] // Ветеринарна медицина України. 2001. №12. С.12 13.
6. Загаевский, И.С. Сальмонеллезы животных / И.С. Загаевский, А.Л.Жорницкий. К.: Урожай, 1977. 144 с.
7. Иммуногистохимические исследования экспрессии рецепторов к стероидным гормонам при гиперпластических процессах в эндометрии / О.Н. Лысенко [и др.] // Архив патологии. 2004. Т. 66, № 2. С.7 10.
8. Карселадзе, А.И. Иммуногистохимическое исследование специфического антигена в раке предстательной железы / А.И. Карселадзе, И.Э. Рытин, И.Э. Будунова // Архив патологии. 2004. Т. 66, № 2. С. 3 7.
9. Коротяев, А.И. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учебник / А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. СПб.: Спец. л-ра, 1998. 592 с.
10. Медицинская микробиология / Гл.ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. 1200 с.
11. Отрыганьева, А.Ф. Критический период в постэмбриональном развитии цыплят / А.Ф. Отрыганьева // Птицеводство. 1964. № 4. С. 8 10.
12. Оценка значимости гистологических, иммуногистохимических и клинических данных в диагностике лимфопролиферативных заболеваний кожи методом межэкспертного согласия / И.Э. Белоусова [и др.] // Архив патологии. 2004. Т. 66, №2. С. 11 16.
13. Применение иммуногистохимического метода с целью диагностики губкообразной энцефалопатии крупного рогатого скота / С.С. Рыбаков [идр.] // Ветеринарна медицина: міжвід. темат. наук. зб. Х., 2003. Вип.82. С. 498 501.
14. Притула, Ю.В. Распространение сальмонелл у кур в Молдавской ССР: автореф. ... канд.вет.наук /Притула. Белая Церковь, 1967. 21 с.
15. Смольянникова, В.А. Ультраструктурные и иммуноморфологические особенности процесса кератинизации в норме и при наследственных ладонно-подошвенных кератодермиях / В.А. Смольянникова // Архив патологии. 2004. Т. 66, № 1. С. 19 22.
16. A comparison of conventional culture and three rapid methods for the detection of Salmonella in poultry feeds and environmental samples / C. Quinn [et al.] // Letters in Applied Microbiology. 1995. Vol. 20. P. 89 91.
17. A large outbreack of human salmonellosis traced to a local pig farms / H.C.F.Maguire [et al.] // Epidemiology and Infection. 1993. Vol. 110. P. 239 246.
18. A stained antigen for the rapid whole blood test for pullorum disease // Journal of the American Veterinary Medical Association / J.M. Schaffer [et al.] 1931. Vol. 79. P. 236 240.
19. A study of the antiglobulin test for the diagnosis of Salmonella dublin infection of cattle / C. Wray [et al.] // British Veterinary Journal. 1981. Vol.137. P. 53 59.
20. A study of the dissemination of Salmonellosis in a commercial broiler chicken operation / G.K. Morris [et al.] // American Journal of Veterinary Research. 1969. Vol. 30. P. 1413 1421.
21. Age of primary infection with Salmonella enterica serovar Typhimurium in the chicken influences persistence of infection and subsequent immunity to re-challenge / R.K. Beal [et al.] // Vet.Immunol.Immunopathol. 2004. Vol.100. P. 151 164.
22. Airborne infection of laying hens with Salmonella enteritidis phage type 4 / A.Baskerville [et al.] // Veterinary Record. 1992. Vol. 130. P. 395 398.
23. An application of the rapid method agglutination test in the diagnosis of bacillary white diarrhoea infection / R.A. Runnels [et al.] // Journal of the American Veterinary Medical Association. 1927. Vol. 70. P. 660 667.
24. An enzyme-linked immunosorbent assay to detect PCR products of the rfbS gene from serogroup D Salmonellae: a rapid screening prototype / J.M. Luc [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. 1997. Vol. 35. P. 714 718.
25. An immunoglobulin-enzyme bridge method for localizing tissue antigens / T.C. Mason [et al.] // J.Histochem.Cytochem. 1969. Vol. 17. P. 563 569.
26. An interlaboratory trial of a latex agglutination test for rapid identification of Salmonella enteritidis / I.M. McLaren [et al.] // Veterinary Record. 1992. Vol. 131. P 235 236.
27. An unusual H antigen (z66) in strains of Salmonella typhi / P.A.M. Guinee [etal.] // Annales de Microbiologie. 1981. Vol. 132. P. 331 334.
28. Analysis of splenic and thymic lymphocyte subpopulations in chicken infected with Salmonella enteritidis / K. Sasai [et al.] // Vet. Immunol.Immunopatol. 1997. Vol. 59. P. 359 367.
29. Anderson, E.S. Phage typing of Salmonella other than Salmonella typhi / E.S. Anderson // The World Problem of Salmonellosis / Ed. W. van Oye. Junk Publishers, The Hague, 1964. P. 89 110.
30. Anderson, E.S. Die Bideutung der Salmonella typhimurium Phagen-typisierung in der Human- und Veterinärmedizin / E.S. Anderson, E.M.J.Wilson // Zentralblatt für Bakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene. Series 1. 1961. B. 224. S. 368 373.
31. Appearance and development of lymphoid cells in the chickens (Gallus gallus) caecal tonsil / M. Gomez Del Moral [et al.] // Anat.Rec. 1998. Vol.250. P. 182 189.
32. Application d¢une serie unique de becteriophages a la lysotypie de Salmonella serovar Dublin et de Salmonella serovar Enteritidis / J.F. Vieu [et al.] // Medicine et Malidies Infectieuses. 1990. Vol. 20. P. 229 233.
33. Avrameas, S.Methode de marquage d¢antigenes et d¢anticorps avec des enzymes et son application en immunodiffusion / S. Avrameas, J. Uriel // C.R.Acad.Sci., Paris, Ser.D. 1966. Vol. 262. P. 2543 2545.
34. Babu, U. Effects of live and killed Salmonella vaccine on lymphocyte mediated immunityin laying hens / U. Babu, M. Scott // Vet.Immunol.Immunopathol. 2003. Vol.91. P. 39 44.
35. Bacterial polysaccharide synthesis and gene nomenclature / P.R. Reeves [etal.] // Trends in Microbiology. 1996. Vol. 4. P. 495 503.
36. Bacteriophage-typing designations of Salmonella typhimurium / E.S.Anderson [et al.] // Journal of Hygiene. 1977. Vol. 78. P. 297 300.
37. Bailey, J.S. Detection of Salmonella cells within 24 to 26 hours in poultry samples with the polymerase chain reaction BAXä / J.S. Bailey // Journal of Food Protection. 1998. Vol. 61. P. 792 795.
38. Barker, R.M. The usefulness of biotyping in studying the epidemiology and phylogeny of salmonellae / R.M. Barker, D.C. Old // J.Med.Microbiol. 1989. Vol. 29. P. 81 88.
39. Barrow, P.A. Further observation on the serological response to experimental Salmonella typhimurium infection in chickens measured by ELISA / P.A.Barrow // Epidemiology and Infection. 1992. Vol. 108. P. 231 241.
40. Barrow, P.A. Experimental infection of egg-laying hens with Salmonella enteritidis phage type 4 / P.A. Barrow, M.A. Lowell // Avian Pathology. 1991. Vol. 20. P. 335 348.
41. Barrow, P.A. Recent Progress in the Diagnosis and Control of Salmonella infection in Poultry: document 63 SG/10A / P.A. Barrow // Office International des Epizootics. Paris, 1995. 12 p.
42. Barrow, P.A. Serological diagnosis of Salmonella serotype enteritidis infection in poultry by ELISA and other tests / P.A. Barrow // Int. J. Food. Microbiol. 1994. Vol.21. P. 55-68.
43. Barrow, P.A. Intestinal colonisation in the chicken by food-poisoning Salmonella serovars; microbial characteristics associated with faecal excretion / P.A. Barrow, J.M. Simpson, M.A. Lovell // Avian Pathology. 1988. Vol. 17. P. 571 588.
44. Bayer, M.E. Areas of adhesion between wall and membrane of Escherichia coli / M.E. Bayer // Journal of General Microbiology. 1968. Vol. 53. P.395 404.
45. Bean, N.H. Food borne disease outbreaks in the United states, 1973 1981: pathogens, vehicles, and trends / N.H. Bean, P.M. Griffin // Journal of Food Protection. 1990. Vol.53. P. 804 817.
46. Berndt, A. Microscopische Verfahren zum Nachweis von Chlamydien in Geweben und Zellkulturen / A. Berndt // Fachbeitrag Chlamydieninfectionen. 2001. B. 4. S. 48 55.
47. Berndt, A. Gamma/delta T-cell response of chickens after oral administration of attenuated and non-attenuated Salmonella typhimurium strains / A. Berndt, U. Methner // Vet.Immunol.Immunopathol. 2001. Vol. 78. P. 143 161.
48. Borland, E.D. Salmonella infection in poultry / E.D. Borland // Veterinary Record. 1975. Vol. 97. P. 406 408.
49. Bouzoubaa, K. Epidemiological studies on the incidence of salmonellosis in chicken breeder/hatchery operation in Morocco / K. Bouzoubaa, K.V.Nagaraja // Proceedings of the International Symposium on Salmonella / Ed. G.H.Snoeyenbos. American Association of Avian Pathologists Kennett Square, Pennsylvania, 1984. 337 p.
50. Briggs, D.J. An enzyme-linked immunosorbent assay for detecting antibodies to Pasteurella multocida in chickens / D.J. Briggs, J.K. Skeeles // Avian Diseases. 1983. Vol. 28. P. 208 215.
51. Brown, D.D. Experimental infection of cockerels with Salmonella typhimurium / D.D. Brown, J.G. Ross, A.F.G. Smith // Research in Veterinary Science. 1975. Vol. 18. P.165 170.
52. Brownell, J.R. Factors influencing the intestinal infection of chickens with Salmonella typhimurium / J.R. Brownell, W.W. Sadler, M.J. Fanelli // Avian Diseases. 1969. Vol.13. P. 804 816.
53. Bryan, F.L. Current trends in foot borne salmonellosis in the United States and Canada / F.L. Bryan // Journal of Food Protection. 1981. Vol. 44. P.394 402.
54. Bullis, K.B.L. The history of avian medicine in the US. III. Salmonellosis / K.B.L. Bullis // Avian Diseases. 1977 b. Vol. 21. P. 430 435.
55. Bumstead, N. Resistance to Salmonella gallinarum, S.pullorum, and S.enteritidis in inbred lines of chickens / N. Bumstead, P.A. Barrow // Avian Diseases. 1993. Vol. 37. P.189 193.
56. Callow, B.R. A new phage typing scheme for Salmonella typhimurium / B.R.Callow // Journal of Hygiene. 1959. Vol. 5. P. 346 359.
57. Carlsson, H.E. Titration of antibodies to Salmonella O antigens by enzyme-linked immunosorbent assay / H.E. Carlsson, A.A. Lindberg, S.Hammerstrom // Infection and Immunity. 1972. Vol. 6. P. 703 708.
58. Characterization of monoclonal antibodies against a fimbrial structure of Salmonella enteritidis and certain other serogroup D salmonellae and their application as serotyping reagents / C.J. Thorns [et al.] // Research in Veterinary Science. 1992. Vol. 53. P. 300 308.
59. Chen, J. Salmonella detection in eggs, using Lux + bacteriophages / J. Chen, M.W. Griffiths // Journal of Food Protection. 1996. Vol. 59. P. 908 914.
60. Chen, S. The evaluation of a fluorogenic polymerase-chain reaction assay for the detection of Salmonella species in food commodities / S. Chen, A. Yee, M.Griffiths // International Journal of Food Microbiology. 1997. Vol. 35. P. 223 230.
61. Childs, G. Application of the avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) method to the light microscopic localization of pituitary hormones / G. Childs, G. Unabia // J.Histochem.Cytochem. 1982. Vol. 30. P. 713 716.
62. Chishti, M.A. Incidence of salmonellosis in chicken in and around Faisalabad / M.A. Chishti, M.L. Khan, M. Siddique // Pakistan Veterinary Journal. 1985. Vol. 5. P. 79 82.
63. Clonal nature of Salmonella typhi and its genetic relatedness to other salmonellae as shown by multilocus enzyme electrophoresis, and proposal of Salmonella bongori comb. nov. / M.W. Reeves [et al.] // J.Clin.Microbiol. 1989. Vol. 27. P. 313 320.
64. Comparative study of the protective effect against Salmonella colonisation in newly hatched SPF chickens using live, attenuated Salmonella vaccine strains, wild-type Salmonella strains or a competitive exclusion product / U. Methner [et al.] // International Journal of Food Microbiology. 1997. Vol. 35. P.223 230.
65. Comparison of four different enzyme-linked immunosorbent assays for serological diagnosis of Salmonella enteritidis infections in experimentally infected chickens / F. G.Van Zijdervelf [et al.] // J. Clin. microbiol. 1992. Vol. 30 P.2560-2566.
66. Control, prevention and eradication of Salmonella enteritidis infection in broiler and broiler breeder flocks / S.G. McIlroy [et al.] // Veterinary Record. 1989. Vol. 125. P. 545 548.
67. Coombs, R.R.A. A new test for the detection of weak and incomplete” RH agglutinins / R.R.A. Coombs, A.E. Mourant, R.R. Race // British Journal of Experimental Pathology. 1945. Vol. 26. P. 255 266.
68. Coons, A.H. Immunological properties of an antibody containing a fluorescent group / A.H. Coons, H.J. Creech, R.N. Jones // Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 1941. Vol. 47. P.200 202.
69. Coons, A.H. Localization of antigen in tissue cells / A.H. Coons, M.H.Kaplan // J.Exp.Med. 1950. Vol. 91. P. 1 13.
70. Coons, A.H. Studies on antibody production. 1. A method for the histochemical demonstration of specific antibody and its application to a study of the hyperimmune rabbit / A.H. Coons, E.H. Leduc, J.M. Connolly // J.exp.Med. 1955. Vol. 102. P. 49 59.
71. Cooper, G.L. Serological and bacteriological investigations of chickens from flocks naturally infected with Salmonella enteritidis / G.L. Cooper, R.A.Nicholas, C.D. Bracewell // Veterinary record. 1989. Vol. 125. P.567 572.
72. Correlation of water activity and other environmental conditions with repeated detection of Salmonella contamination on poultry farms / O.O. Opara [et al.] // Avian Diseases. 1992. Vol. 36. P. 664 671.
73. Cunningham, B. The control and eradication of brucellosis I. Serological responses in cattle following vaccination with S19 and killed Brucella 45/20 adjuvant vaccine / B. Cunningham // Veterinary Record. 1968. Vol. 82. P.7 10.
74. Curiale, M.S. VIDAS enzyme linked immunoassay for detection of Salmonella in foods: collaborative study / M.S. Curiale, V. Gangar, C. Gravens // Journal of AOAC International. 1997. Vol. 80. P. 491 504.
75. D’Aoust, J.-Y. Infective dose of Salmonella typhimurium in Cheddar cheese / J.-Y. D’Aoust // American Journal of Epidemiology. 1985. Vol. 122. P.717 720.
76. Desmidt, M. Pathogenesis of Salmonella enteritidis phage type four after experimental infection of young chickens / M. Desmidt, J. Ducatelle, H.Haesebrouck // Vet.Microbiol. 1997. Vol. 56. P. 99 109.
77. Detection of antibody to Salmonella enteritidis by a gm flagellin-based ELISA / J.F. Timoney [et al.] // Veterinary Record. 1990. Vol. 127. P. 168 169.
78. Detection os Salmonella enteritidis-specific immunoglobulin A antibodies in crop samples from chickens infected with Salmonella enteritidis / K.-H. Seo [et al.] // Poultry Science. 2003. Vol. 82. P. 67 70.
79. Development of T cell immune responsiveness in the chicken / J.W.Lowenthal [et al.] // Immunol.Cell Biol. 1984. Vol. 72. P. 115 122.
80. Development of T-lymphocyte subpopulations in the postnatal chicken oviduct / M.Z.I. Khan [et al.] // Cell and Tissue Research. 1996. Vol.284. P. 317 325.
81. Dynamics of immune cell infiltration in the caecal lamina propria of chickens after neonatal infection with a Salmonella enteritidis atrain / F. Van Immerseel [et al.] // Developmental and Comparative Immunology. 2002. Vol.26. P. 355 364.
82. Dynamics of lymphocyte subpopulations changes in the cecal tonsils of chickens infected with Salmonella enteritidis / K. Sasai [et al.] // Veterinary Microbiology. 2000. Vol. 74. P. 345 351.
83. Dynamics of Salmonella infection in chicks reared on letter / G.H.Snoeyenbos [et al.] // Avian Diseases. 1969. Vol. 13. P. 72 83.
84. Ebel, E.D. Occurrence of Salmonella enteritidis in the US commercial egg industry: report on a national spent hen survey / E.D. Ebel, M.J. David, J.Mason // Avian Diseases. 1992. Vol. 36. P. 646 654.
85. Edwards, P.R. Salmonellosis observations on incidence and control / P.R.Edwards // Annals of the New York Academy of Science. 1958. Vol. 70. P. 598 613.
86. Egg transmission after infection of hens with Salmonella enteritidis phage type 4 / J.F. Timoney [et al.] // Veterinary Record. 1989. Vol. 125. P.600 601.
87. Epidemiological associations between characteristics of registered broiler chicken flocks in Canada and the Salmonella culture status of floor litter and drinking water / S.A. Renwick [et al.] // Canadian Veterinary Journal. 1992 Vol. 33. P. 449 458.
88. Erbeck, D.H. Pullorum disease with unusual signs in two backyard chicken flocks / D.H. Erbeck, B.G. McLaughlin, S.N. Singh // Avian Diseases. 1993. Vol. 37. P. 895 897.
89. Evaluation of selective and non-selective enrichment PCR procedure for Salmonella detection / S.D. Oliveira [et al.] // Lett. Appl. Microbiol. 2003. Vol. 36. P. 217-221.
90. Evaluation of the Vitek immunodiagnostic assay system (VIDAS) for the detection of Salmonella in foods / C.de W. Blackburn [et al.] // Letters in Applied Microbiology. 1994. Vol. 19. P. 32 36.
91. Experimental infection of poultry with Salmonella infantis / D.D. Brown [etal.] // Research in Veterinary science. 1976. Vol. 20. P.237 243.
92. Faulk, W.R. An immunocolloid method for the electron microscope / W.R.Faulk, G.M. Taylor // Immunochemistry. 1971. Vol. 8. P. 1081 1083.
93. Felix, A. Typing of paratyphoid B bacilli by means of VI bacteriophage / A.Felix, B.R. Callow // British Medical Journal. 1943. Vol. 11. P. 127 130.
94. Fierens, H. Screening of Salmonella in naturally contaminated feeds with rapid methods / H. Fierens, A. Huygebaert // International Journal of Food Microbiology. 1996. Vol. 31. P. 301 309.
95. Fowl typhoid in a few poultry farms of Haryana state / R.K. Kaushik [et al.] // Indian Journal of Animal Sciences. 1986. Vol. 56. P. 511 514.
96. Fredericksen, T.L. Ontogeny of conA and PHA responses of chicken blood cells in MHC-compatible lines 6(3) and 7(2) / T.L. Fredericksen, D.G.Gilmour // J.Immunol. 1983. Vol. 130. P 2528 2533.
97. Galton, M.M. Epidemiology of salmonellosis in the United States / M.M.Galton, J.H. Steele, K.W. Newell // The World Problem of Salmonellosis / Eds. E. Van Oye. W.Junk Publishers, The Hague, 1964. P.421 444.
98. Gast, R.K. Production of Salmonella enteritidis-contaminated eggs by experimentally infected hens / R.K. Gast, C.W. Beard // Avian Diseases. 1990. Vol. 34. P. 438 446.
99. Gast, R.K. Serological detection of experimental Salmonella enteritidis infection in laying hens / R.K. Gast, C.W. Beard // Avian Diseases. 1990. Vol. 34. P. 721 728.
100. Gauger, H.C. Isolations of Salmonella typhimurium from drinking water in an infected environment / H.C. Gauger, R.E. Greaves // Poultry Science. 1946. Vol. 25. P. 476 478.
101. Giese, J. Rapid microbiological testing, kits and instruments / J. Giese // Food Technology. 1995. Vol. 49. P. 64 71.
102. Golemboski, K.A. Assessment of neonatal avian inflammatory macrophage function following embryonic cyclophosphamide exposure / K.A.Golemboski, S.E. Bloom, R.R. Dietert // J.Immunopharmac. 1992. Vol. 14. P. 19 26.
103. Gordon, R.F. The value of the rapid whole-blood stained antigen agglutination test in the eradication of pullorum disease / R.F. Gordon, G.C.Brander // Veterinary Record. 1942. Vol. 54. P. 275 280.
104. Gordon, R.F. The epizootology of Salmonella menston infection of fowls and the effect of feeding poultry food artificially infected with Salmonella / R.F. Gordon, J.F. Tucker // British Poultry Science. 1965. Vol. 6. P. 251 264.
105. Gross and microscopic lesions in young chickens experimentally infected with Salmonella enteritidis / S.L. Gorham [et al.] // Avian Diseases. 1994. Vol. 38. P. 816 821.
106. Guedson, J.L. The use of avidin-biotin interaction in immunoenzymatic techniques / J.L. Guedson, T. Ternynck, S. Avrameas // J.Histochem.Cytochem. 1979. Vol. 27. P.1131 1139.
107. Guinee, P.A.M. Phage typing of Salmonella / P.A.M. Guinee, W.J.van Leeuwen // Methods in Microbiology / Edit.by T. Bergan, J.R.Norris. Academie Press, New York, 1978. Vol. 2. P. 157 196.
108. Gut-associated lymphoid tissue in the chicken. Morphology, ontogeny, and some functional characteristics of Payer¢s patches / A.D