Удосконалення системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів (Pasteurella, Salmonella, Listeria) : Совершенствование системы культивирования, хранения и параметров контроля производственных штаммов (Pasteurella, Salmonella, Listeria)

Краткое описание

ДЕРЖАВНИЙ НАУКОВО-КОНТРОЛЬНИЙ ІНСТИТУТ
БІОТЕХНОЛОГІЇ І ШТАМІВ МІКРООРГАНІЗМІВ

На правах рукопису

Виговська Лілія Миколаївна

УДК 579.62:57.03.8:15.371
Удосконалення системи культивування,
зберігання та параметрів контролювання
виробничих штамів
(Pasteurella, Salmonella, Listeria)
16.00.03

Дисертація на здобуття наукового ступеня
кандидата ветеринарних наук

Науковий керівник
Ушкалов Валерій Олександрович,
доктор ветеринарних наук,
старший науковий співробітник

м. Київ 2008

ЗМІСТ

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ5
ВСТУП.6
РОЗДІЛ 1 ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ12
1.1. Принципи функціонування колекцій штамів мікроорганізмів..12
1.2. Колекції штамів мікроорганізмів в Україні15
1.3. Розвиток державної системи депонування.17
1.4. Способи довготривалого зберігання штамів мікроорганізмів..21
1.5. Способи підтримання штамів мікроорганізмів у колекціях..25
1.6. Паспортизація штамів мікроорганізмів як інструмент оцінки біологічних
властивостей виробничих штамів..27
1.7. Шляхи удосконалення засобів специфічної профілактики інфекційних
захворювань тварин..29
1.8. Заключення до огляду літератури34

РОЗДІЛ 2 МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕНЬ.36
2.1. Штами виробничі та епізоотичні..36
2.2. Поживні середовища..36
2.3. Ліофілізація бактерій..40
2.4. Бактеріологічні, імунологічні, серологічні методи досліджень..41
2.5. Тварини44
2.6. Статистичні методи ...46

РОЗДІЛ 3 РЕЗУЛЬТАТИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ47
3.1. Вивчення біологічних властивостей штамів виду Pasteurella multocida
з колекції НЦШМ ДНКІБШМ..47
3.1.1. Дослідження культурально-морфологічних властивостей виробничих штамів Pasteurella multocida.50
3.1.2. Дослідження біохімічних властивостей виробничих штамів Pasteurella multocida.54
3.1.3. Визначення патогенності виробничих штамів Pasteurella multocida..61
3.2. Вивчення біологічних властивостей штамів бактерій роду Salmonella з колекції НЦШМ ДНКІБШМ.64
3.2.1. Дослідження культурально-морфологічних властивостей виробничих штамів бактерій роду Salmonella.65
3.2.2. Дослідження біохімічних властивостей виробничих штамів бактерій роду Salmonella 67
3.2.3. Визначення антигенної структури виробничих штамів бактерій роду Salmonella..70
3.2.4. Визначення патогенності виробничих штамів бактерій роду Salmonella71
3.3. Вивчення біологічних властивостей епізоотичних штамів бактерій роду Salmonella...73
3.3.1. Етіологічна структура сальмонельозу тварин в Україні...73
3.3.2. Дослідження культурально-морфологічних властивостей епізоотичних культур сальмонел 77
3.3.3. Дослідження біохімічних властивостей епізоотичних культур сальмонел ..79
3.3.4. Визначення антигенної структури епізоотичних культур сальмонел82
3.3.5. Визначення вірулентності й імуногенної активності епізоотичних та виробничих штамів бактерій роду Salmonella85
3.4. Вивчення біологічних властивостей промислово перспективних штамів бактерій роду Listeria 86
3.4.1. Розробка і апробація поживного середовища для накопичення бактерій роду Listeria88
3.4.2. Визначення культурально-морфологічних властивостей штамів бактерій роду Listeria90
3.4.3. Визначення біохімічних властивостей штамів бактерій роду Listeria...92
3.4.4. Дослідження гемолітичних властивостей штамів бактерій роду Listeria94
3.5. Дослідження чутливості бактерій до антибактеріальних засобів.96
3.5.1 Визначення профілів антибіотикорезистентності виробничих та епізоотичних штамів бактерій...96
3.5.2. Визначення групової чутливості штамів бактерій до антибіотиків різних фармакологічних груп.100
3.5.3. Вивчення впливу ліофілізації та умов культивування на резистентність бактерій до антибактеріальних засобів...112

РОЗДІЛ 4 АНАЛІЗ І УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕНЬ..117

ВИСНОВКИ..131

ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ 134

СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ .135

ДОДАТКИ160

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ
ДНКІБШМ Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів
НЦШМ Національний центр штамів мікроорганізмів
ННЦ ІЕКВМ Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини»
УІЕВ Український інститут експериментальної ветеринарії
ОЩ оптична щільність
КУО колонієутворюючі одиниці
LD50 50 % летальна доза
ID50 50% імунізуючa доза
МПБ м’ясопептонний бульйон
МПА м’ясопептонний агар
РА реакція аглютинації
ВРХ велика рогата худоба
ДРХ дрібни рогата худоба
с/г сільське господарство
ЕПД екстракт пекарських дріжджів
ПГК панкреатичний гідролізат казеїну

ВСТУП
Актуальність теми. Біотехнологічні технології широко використовуються увиробництві продуктів харчування та біологічно активних речовин— антибіотиків, ферментів, гормонів, імунокоректорів, вакцин, діагностикумів тощо [1-4, 19, 29]. Умовою ефективного використання здобутків сучасної біотехнології є наявність виробничих штамів мікроорганізмів [5-10].
В Україні комісійну оцінку, державну реєстрацію, підтримання та забезпечення підприємств біологічної промисловості штамами мікроорганізмів для виробництва та контролю якості ветеринарних імунобіологічних препаратів здійснює Національний центр штамів мікроорганізмів (НЦШМ) Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (ДНКІБШМ). Крім того, у НЦШМ проводиться весь обсяг робіт, пов’язаний із паспортизацією штамів, оптимізацією існуючих і розробкою нових способів довгострокового зберігання мікроорганізмів [18].
Євроінтеграційна спрямованість України вимагає дотримуватись міжнародних вимог щодо роботи депозитаріїв штамів мікроорганізмів, і депонування зокрема. Згідно з вищезазначеним у 2004 році було затверджено нові вимоги до інформації стосовно біологічних властивостей штамів, які надходять до депозитарію. Аналіз наявних відомостей про депоновані виробничі штами показав, що паспортні характеристики потребують доопрацювання. Це і стало підставою для виконання наших досліджень. Крім того, відомо, що ліофілізація та довгострокове зберігання в ліофільному стані призводить до деяких змін у біологічних характеристиках штамів мікроорганізмів, що може негативно впливати на якість кінцевого продукту виробництва, зокрема засобів захисту тварин [11-17]. У зв’язку з цим, актуальним напрямком досліджень є оптимізація існуючих та розробка нових способів довгострокового зберігання та підтримання штамів мікроорганізмів на основі вивчення їх біологічних властивостей. Перед нами стояло завдання встановити відповідність властивостей штамів паспортним характеристикам на основі вивчення індивідуальних біологічних властивостей кожного штаму за культурально-морфологічними, біохімічними, патогенними властивостями, визначити чутливість до антибіотиків, підібрати оптимальні середовища для їх культивування, визначити вплив ліофілізації та довгострокового зберігання на біологічні властивості та активність культур.
Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційну роботу виконано згідно з планом науково-дослідних робіт Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів «Підтримання штамів мікроорганізмів у Національному Центрі штамів мікроорганізмів України» (№0197U004847 у 1997р., №0198U001204 у1998р., №0199U000006 у 1999р., №0100U000261 у 20002004рр.), «Удосконалення системи оцінки штамів мікроорганізмів і якості виготовлених з них біопрепаратів» (№0197U004846 у 1997р., №0198U001202 у 1998р., №0199U000007 у 1999р., №0100U000261 у 2000р.), «Розробити методи підтримання та збереження у високоактивному стані колекційних культур мікроорганізмів (бактерій, вірусів, грибів), що знаходяться в установах ветеринарної медицини України з наступним впровадженням їх при промисловому виготовленні біопрепаратів» (№0101U000542 у 20012004рр.), «Колекція патогенних для тварин штамів мікроорганізмів Національного центру штамів мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів» (№0106U005235 у 2006р.).
Мета і завдання дослідження. Метою роботи було удосконалення системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів мікроорганізмів.
Для досягнення мети необхідно було вирішити такі задачі:
· вивчити біологічні властивості штамів Pasteurella, Salmonella, Listeria з колекції НЦШМ ДНКІБШМ;
· розробити поживні середовища для відновлення біологічних властивостей ліофілізованих штамів Pasteurella, Salmonella, Listeria;
· вивчити вплив довгострокового зберігання в ліофільному стані на біологічні властивості виробничих штамів Pasteurella і Salmonella;
· вивчити вплив ліофілізації на біологічні властивості штамів Pasteurella, Salmonella, Listeria;
· удосконалити методику лабораторної діагностики пастерельозу тварин;
· провести порівняльне вивчення біологічних властивостей епізоотичних культур сальмонел та розробити паспорти для промислово перспективних епізоотичних штамів, що будуть використані у виробництві імунобіологічних препаратів для боротьби з сальмонельозом тварин.
Об’єкт дослідження: система довгострокового зберігання виробничих штамів мікроорганізмів.
Предмет дослідження: культивування, підтримання, зберігання і контролювання стабільності штамів бактерій родів Pasteurella, Salmonella, Listeria з колекції НЦШМ ДНКІБШМ.
Методи дослідження: бактеріологічні (культивування на поживних середовищах, виділення, ідентифікація збудників), імунобіологічні (визначення патогенності, вірулентності, антигенності, імуногенності штамів Pasteurella і Salmonella), серологічний (постановка реакції аглютинації), патолого-анатомічний (патолого-анатомічний розтин, відбір патологічного матеріалу (кров з паренхіматозних органів та серця загиблих тварин)), епізоотологічний (вивчення епізоотичної ситуації), статистичні.
Наукова новизна одержаних результатів. На підставі результатів вивчення біологічних властивостей виробничих штамів Pasteurella, Salmonella, Listeria отримані нові дані стосовно способів підтримання мікроорганізмів у високоактивному стані, а саме:
· Експериментально обґрунтовано доцільність застосування збагачених поживних середовищ з метою відновлення біологічних властивостей бактерій (культурально-морфологічних, біохімічних, антигенних, патогенних, антибіотикорезистентності), що тривалий час зберігались у ліофільному стані, використання яких, порівняно з середовищами МПБ, Хотінгера, забезпечує повне відновлення вихідних біологічних властивостей.
· Розроблено поживне середовище для накопичення біомаси бактерій роду Listeria, застосування якого дозволяє отримувати вдвічі більшу кількість біомаси порівняно з аналогами.
· Встановлено, що зберігання штамів бактерій родів Pasteurella, Salmonella у ліофільному стані за температури +4°С забезпечує збереження їх життєздатності впродовж 10 років, при цьому кількість життєздатних мікробних клітин знижується в середньому на 10%.
· Доведено доцільність використання епізоотичних штамів сальмонел для виготовлення ветеринарних імунобіологічних препаратів, що стало підставою для розробки вакцини проти сальмонельозу тварин «Сальмосан».
Практичне значення одержаних результатів.
· Удосконалено систему підтримання промислових штамів мікроорганізмів у активному стані, яка полягає у визначенні індивідуальних біологічних властивостей штамів, збереженні в ліофільному стані при +4°С, застосуванні збагачених поживних середовищ для відновлення біологічних властивостей після ліофілізації та довгострокового зберігання, пасажуванні виробничих штамів на лабораторних тваринах, оцінці рівня біологічної активності штамів на кожному етапі підтримання.
· Розроблено прописи поживних середовищ для культивування бактерій родів Pasteurella, Salmonella, застосування яких забезпечує відновлення вихідних біологічних властивостей після ліофілізації та довгострокового зберігання у ліофільному стані. Середовища за розробленими прописами використовуються на підприємствах біопромисловості, а саме на Дніпропетровській і Сумській біофабриках, Дніпропетровській дослідній станції ННЦ «ІЕКВМ».
· Застосування розробленого середовища для накопичення біомаси бактерій роду Listeria забезпечує накопичення вдвічі більшої кількості біомаси порівняно з аналогами та відновлення біологічних властивостей у ліофілізованих культур.
· Розроблено паспорти на виробничі штами бактерій родів Pasteurella, Salmonella, Listeria.
· Матеріали дисертаційної роботи, а саме відомості про біологічні властивості пастерел, використані при розробці «Настанови з лабораторної діагностики пастерельозу тварин та птиці», затвердженої науково-методичною радою Державного департаменту ветеринарної медицини (протокол №3 від 20.12. 2006р.).
· Отримані за нашої участі результати вивчення біологічних властивостей епізоотичних штамів сальмонел використано при розробці нормативних документів та виготовлені вакцини концентрованої інактивованої проти сальмонельозу тварин «Сальмосан» (ТУУ46.15.374-99).
Особистий внесок здобувача. Здобувачем особисто проведено аналіз літературних даних за темою роботи; обґрунтовано програму досліджень; виконано наукові програми, які покладені в основу дисертації; виконано експериментальні та аналітичні дослідження; проведено аналіз та узагальнення одержаних результатів; сформульовано висновки та практичні рекомендації.
Вакцину інактивовану концентровану проти сальмонельозу тварин «Сальмосан» розроблено спільно зі співробітниками лабораторії анаеробних інфекцій Інституту ветеринарної медицини УААН під керівництвом доктора ветеринарних наук, професора, члена-кореспондента УААН Риженка В.П., за що висловлюємо щиру подяку.
Поживне середовище для накопичення бактерій роду Listeria розроблено спільно з науковим керівником, доктором ветеринарних наук Ушкаловим В.О., співробітниками ННЦ «ІЕКВМ» кандидатом ветеринарних наук Бабкіним М.В., кандидатом ветеринарних наук Прохорятовою О.В., кандидатом ветеринарних наук Калашнік Н.В., кандидатом біологічних наук Романько М.Є., за що висловлюємо щиру подяку.
«Настанову з лабораторної діагностики пастерельозу тварин та птиці» розроблено у співавторстві з великим колективом авторів з Луганського НАУ, ННЦ «ІЕКВМ», ДНКІБШМ, Дніпропетровської ДС ННЦ «ІЕКВМ», ЦДЛВМ, ІВМУААН, Сумського НАУ.
Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертаційної роботи доповідались та обговорювались на засіданнях Вченої ради ДНКІБШМ у 19972007рр., Всеукраїнській науково-практичній конференції «Хвороби органів травлення новонароджених тварин, діагностика, лікування, профілактика та прогнозування» (м.Київ, НАУ, грудень 1998р.), Міжнародній науково-практичній конференції «ІЕКВМ— 80 років на передовому рубежі ветеринарної науки» (м.Харків, жовтень 2002р.), Міжнародній науково-практичній конференції «Епізоотологія і профілактика інфекційних хвороб ВРХ» (м.Київ, НАУ, березень 2006р.), ІІ‑й Міжнародній науковій конференції «Ветеринарні препарати: розробка, контроль якості та застосування» (м.Львів, жовтень 2007р.).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 15 наукових праць, з них 12 опубліковані у фахових виданнях, перелік яких затверджено ВАК України. Отримано патент на корисну модель №29973.

Список литературы

В И С Н О В К И

1.У дисертації досліджено ефективність існуючої системи культивування, зберігання та параметрів контролювання виробничих штамів бактерій. На підставі вивчення літературних джерел, культурально-морфологічних, біохімічних, серологічних досліджень, вивчення антибіотикорезистентності, а також результатів біологічного експерименту на лабораторних тваринах теоретично й експериментально обґрунтовано: доцільність використання запропонованих засобів і підходів підтримання бактерій у стабільному стані, впровадження нової рецептури поживних середовищ для відновлення життєздатності бактерій, поетапне відновлення життєздатності ліофілізованих культур, використання нових показників біологічної активності штамів.
2.Вивчено вплив ліофілізації на апараті LP-3 за Р— 4,5МПа, температури заморожування матеріалу у морозильній камері— мінус 73°С, температурі рефрижератора в LP-3— мінус 45°С, терміні висушування— 2024години, з використанням стабілізуючого середовища Файбіча на штами Pasteurella, Salmonella, Listeria. Визначено, що в процесі ліофілізації штамів Pasteurella, Salmonella втрачається в середньому близько 20%, Listeria— 2030% життєздатних мікробних клітин; в епізоотичних штамів Salmonella з’являються дисоційовані форми (до 5% R-форм). Рівень ферментативної активності штамів знижується на 5075%, LD50 штамів P.multocida, Salmonella підвищується в середньому на 3lg, окремі штами L.monocytogenes, L.ivanovii втрачають гемолітичну активність. Чутливість штамів до антибактеріальних засобів підвищується в середньому на 2575%.
3.Визначено особливості довгострокового зберігання впродовж 10 років бактерій родів Pasteurella і Salmonella: концентрація життєздатних мікробних клітин зменшується в середньому на 10%, рівень ферментативної активності— на 12,5%, вірулентність штамів P.multocida— на 2,57,0%.
4.Установлено, що застосування поживних середовищ МПБ, Хотінгера не забезпечує повного відновлення біологічних властивостей ліофілізованих штамів бактерій, а саме: кількість життєздатних мікробних клітин збільшується лише на 10% відносно ліофілізованих культур, але не набуває вихідного рівня; ферментативна активність підвищується на 12,525,0% відносно ліофілізованих культур, але не набуває вихідного рівня; штами P.multocida і Listeria не утилізують сахари у визначений термін. LD50 штамів P.multocida, Salmonella вища в середньому на 2lg, ніж до ліофілізації; штами L.monocytogenes, L.ivanovii не відновили гемолітичну активність; чутливість до антибактеріальних засобів штамів бактерій була вищою на 2065%, ніж до ліофілізації.
5.Запропоновані нові системи культивування, що забезпечують можливість відновлення вихідних біологічних властивостей ліофілізованих культур та накопичення біомаси в 1,5раза більше порівняно з культивуванням на МПБ: середовища МПБ, Хотінгера з вмістом сироватки крові (5%) і глюкози (1%) для культивування виробничих штамів P.multocida; середовища МПБ, Хотінгера зі вмістом глюкози (1%), середовища 199 (2%) та печінкової води за Розановим (5%) для культивування виробничих штамів бактерій роду Salmonella.
6.Модифікація методу Дрігальського з використанням середовищ МПБ, Хотінгера зі вмістом глюкози (1%), середовища 199 (2%), печінкової води за Розановим (5%) забезпечує звільнення від дисоціюючих форм ліофілізованих епізоотичних штамів Salmonella.
7.Розроблено пропис поживного середовища для культивування штамів Listeria (патент на корисну модель №29973), використання якого забезпечує підвищення рівня накопичення біомаси в середньому в 1,94раза порівняно з МПБ, в 1,86раза— з бульйоном Мартена і в 1,29раза— з бульйоном Хотінгера. Модифікація вказаного середовища зі вмістом сироватки крові (5%) та глюкози (1%) забезпечує відновлення культурально-морфологічних, біохімічних, гемолітичних властивостей, рівня резистентності ліофілізованих штамів до антибіотиків.
8.У результаті проведених досліджень епізоотичних культур роду Salmonella були відібрані штами №№1, 4, 8, 10, 62, які використані при розробці і виготовленні вакцини концентрованої інактивованої проти сальмонельозу тварин «Сальмосан». Під час досліджень визначено, що біологічні властивості епізоотичних штамів-кандидатів у виробничі необхідно вивчати комплексно, враховуючи рівень біологічної активності та стабільність біологічних властивостей штаму.
9.Вивчено біологічні властивості 7 штамів лістерій видів L.monocytogenes, L.ivanovii, L.innocua, які за своїми культурально-морфологічними, біохімічними, гемолітичними властивостями і чутливістю до антибактеріальних засобів відповідають вимогам щодо тест-культур і можуть бути використані з метою внутрішньовидової типізації виділених штамів лістерій у САМР-тесті та оцінці якості поживних середовищ для культивування лістерій.
10.Дані, отримані в результаті вивчення антибіотикорезистентності штамів, дали підстави включити цей тест до переліку параметрів контролювання рівня життєздатності і активності штамів.

ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ

• Складені та затверджені паспорти нового зразка для виробничих штамів Pasteurella multocida №№216, 116, 217, 796, 656, 877, См, F, D, 1231, 396, 06, 2‑А, 115, 1718, D-1, D-71, D-90, 1931, Salmonella cholerae suis №370, Salmonella typhimurium №371, Salmonella dublin №373.
• Розроблені паспорти та проведено депонування штамів Listeria monocytogenes №№3А, 4В, 5105, 93U017, 92U002; Listeria ivanovii №92U004; Listeria innocua №92U005, Salmonella cholerae suis №62, Salmonella typhimurium №4, Salmonella dublin №8, Salmonella typhi suis №1; Salmonella enteritidis №10.
• Укладено «Настанову з лабораторної діагностики пастерельозу тварин та птиці», затверджену науково-методичною радою Державного департаменту ветеринарної медицини МАП України (протокол №3 від 20.12.2006р.).
• Розроблено «Мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду Listeria» (патент на корисну модель №29973).

• Розроблено «Вакцину концентровану інактивовану проти сальмонельозу тварин «Сальмосан» (ТУУ46.15.374-99), промислове виробництво якої було налагоджено у 1999р.

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

1. Вакцини і штами в системі профілактики захворювань молодняку сільськогосподарських тварин / В.А. Прискока, Т.Г. Михальченко, І.В. Риженко [та ін.] // Науковий вісник НАУ. 1998. Вип. 2. С. 142.
2. Прискока В.А. Технологічні прийоми для боротьби із змішаними інфекціями свиней у промислових комплексах / В.А. Прискока // Вет. медицина України. 1996. № 4. С. 1011.
3. Стан та перспективи виробництва біологічних препаратів для профілактики та лікування захворювань органів травлення новонароджених тварин / В.А. Прискока, Ф.С. Вабіщевіч, О.П. Степанюк [та ін.] // Науковий вісник НАУ. К., 1998. Вип. 2. С. 140.
4. Штами мікроорганізмів, що патогенні для тварин, як основа біотехнологічного виробництва / В.А. Прискока, Ф.С. Вабіщевіч, О.П. Степанюк [та ін.] // Бюл. Ін-ту с.-г. мікробіології. Чернігів, 2000. № 7. C. 27.
5. Обуховская О.В. Здобуття бактериофагів з епізоотичних штамів Salmonellae enteritidis i Salmonellae gallinarum-pullorum / О.В. Обуховская // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х.,1997. Вип. 71. С. 8393.
6. Искусственные иммуногены из энтеробактерий / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов, Б.Ф. Семенов [и др.] // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1984. № 12. С. 110113.
7. Соломатин В.И. Зависимость качества вакцин против пастереллеза птиц от спектра имуногенности производственных штаммов / В.И. Соломатин // Совершенствование методов изготовления и контроля диагностических ветеринарных препаратов : тр. Всесоюз. научноконтрольного ин-та вет. препаратов. М., 1978. Т. 26. С. 7376.
8. Ушкалов В.О. Результати вивчення імуногенних властивостей екзотоксинів сальмонел / В.О. Ушкалов // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2000. Вип. 78, т. І. С. 292296.
9. Фукс П.П. Основні принципи лікування шлунковокишкових захворювань молодняку сільськогосподарських тварин / П.П. Фукс // Вет. медицина України. 1997. № 2. С. 1013.
10. Колостральний імунітет проти сальмонельозу у поросят, народжених вакцинованими і невакцинованими свиноматками / О.М. Цимбал, К.Е. Конар-жевський, О.С. Андрєєва [та ін.] // Ветеринарія : респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1982. Вип. 56. С. 36.
11. Аганина Л.А. К методике работы с производственными штаммами сальмонелл / Л.А. Аганина, В.В. Кирилова // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1974. Т. 20. С. 244246.
12. Чернецкий Ю.П. Влияние скорости замораживания на интенсивность лиофилизации / Ю.П. Чернецкий, Ю.Г. Опарин // Контроль и стандартизация ветеринарных препаратов для профилактики и лечения болезней животных : тр. Всесоюз. госуд. науч.-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1980. С. 8690.
13. Бойченко М.Н. Сальмонеллез: распространение возбудителя в организме / М.Н. Бойченко // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1984. № 10. С. 36.
14. Порівняльна характеристика вакцинних і епізоотичних штамів сальмонел / Л.М. Виговська, В.А. Прискока, О.П. Степанюк [та ін.] // Вет. медицина України. 1997. № 12. С. 1819.
15. Волинець Л. Поширення, економічні збитки та профілактика пастерельозу свиней / Л. Волинець, Т. Мазур, В. Москалюк // Вет. медицина України. 1997. № 8. С. 1617.
16. Русалиев В.С. Бактериальные вакцины в свиноводстве / В.С. Русалиев, В.М. Гневашев, О.В. Грунтова // Ветеринария. 2001. № 6. С. 18.
17. Жеглов В.В. Состояние технологии производства противосальмонеллёз-ных вакцин на современном этапе и специфическая профилактика сальмонеллёза / В.В. Жеглов, Л.П. Троянская // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии. Воронеж, 1999. С. 3840.
18. Національний центр штамів мікроорганізмів ДНКІБШМ: стан і перспективи розвитку / А. Головко, В. Ушкалов, Л. Акименко [та ін.] // Вет. медицина України. 2007. № 2. С. 3536.
19. Депонування та зберігання інноваційних мікроорганізмів: метод. рекомендації / Т.М. Головач, В.С. Підгорський, В.І. Суденко [та ін.] ; Ін-т мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України. К. : Знання України, 2004. 108 с.
20. Постанова Кабінету Міністрів Про розвиток державної системи депонування штамів мікроорганізмів” від 17 серпня 1998 р. № 1309 [Електронний ресурс]. Режим доступу : http://uazakon.com/document/spart68/inx68248.htm. Загол. з екрана.
21. Правила депонування вакцинних, актуальних і контрольних штамів мікроорганізмів, затверджені наказом Головного державного інспектора ветеринарної медицини України, № 27 від 12.03.2001 [Електронний ресурс]. Режим доступу : http://www.uapravo.net/data/base57/ukr57626.htm. Загол. з екрана.
22. Інструкція про порядок депонування в Україні штамів мікроорганізмів з метою здійснення патентної процедури, затверджена спільним наказом Держпатенту України та Національної академії наук від 26.06.95 за № 286/822 [Електронний ресурс]. Режим доступу : http://www.uapravo.net/data/base57/ukr57626.htm. Загол. з екрана.
23. Каталог культур: бактерії, мікоплазми, хламідії, дріжджоподібні гриби, міцеліальні гриби, культури клітин / уклад. О.П. Сельнікова [та ін.]; АМН України, Ін-т епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України, Музей патогенних мікроорганізмів. К.: Знання України, 2003. 35 с.
24. Методичні вказівки щодо депонування штамів мікроорганізмів, що є об’єктами заявок на винаходи / Інститут мікробіології і вірусології НАН України. К., 1998. 56 с.
25. Необхідність та наслідки депонування мікроорганізмів при патентуванні винаходів / В.С. Підгорський, Т.М. Головач, В.М. Лало [та ін.] // Бюлетень Інституту сільськогосподарської мікробіології. 2000/2001. № 8. С. 406.
26. Правила складання і подання заявки на винахід та заявки на корисну модель // Інтелектуальна власність. 2001. № 3. С. 3959.
27. Закон України Про охорону прав на винаходи і корисні моделі”// Відомості Верховної Ради. 1994. № 7. ст. 32.
28. Будапештський договір про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів з метою патентної процедури від 28 квітня 1977 року та Інструкція до нього від 31 січня 1981 р. [Електронний ресурс]. Режим доступу : http://www.uapravo.net/data/base57/ukr57626.htm. Загол. з екрана.
29. Стан та перспективи розвитку державної системи депонування штамів мікроорганізмів в Україні / Л.М. Шинкаренко, Г.В. Латишевська, О.П. Сельнікова [та ін.] // Методи одержання чистих культур мікроорганізмів та їх довгострокового зберігання в колекціях. Роботи співробітників Музею патогенних для людини мікроорганізмів / Ін-т епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського, Музей патогенних для людини мікроорганізмів. К.: Знання України, 2001. Вип. 2. С.615.
30. Інструкція про порядок депонування в Україні штамів мікроорганізмів з метою здійснення патентної процедури. Введ. 26.06.95, №106/115.
31. Директива ЕС 98 //44/TC. 1998. С.1314.
32. Державні санітарні правила ДСП 9.95.03599 Безпека роботи з мікроорганізмами”, 1999.
33. Картахенский протокол по биобезопасности к Конвенции о биологическом разнообразии: тест и приложения. Монреаль : Секретариат Конвенции о биологическом разнообразии, 2000. 40 с.
34. Абдуліна І. Депонування мікроорганизмів в Україні: програма розвитку / І. Абдуліна, Л. Роботягова // Інтелектуальна власність. 2003. № 3. С. 2933.
35. Закон України Про державну політику регулювання в галузі генетичноінженерної діяльності” [Електронний ресурс]. Режим доступу : http://www.uapravo.net/data/base57/ukr57626.htm. Загол. з екрана.
36. Закон України Про охорону прав на винаходи і корисні моделі”[Електронний ресурс]. Режим доступу : http://www.uapravo.net/data/base57/ukr57626.htm. Загол. з екрана.
37. Бойко А.А. Количественные методы контроля биологических препаратов / А.А. Бойко, Л.В. Кирилллов, Г.А. Козловский // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1974. Т. XX. С. 310.
38. Косинський В. Методичні рекомендації для проведення науковотехнічної експертизи колекцій мікроорганізмів і науково-дослідних робіт в галузі мікробіології / В. Косинський, В. Свіженко. К. : Знання України, 2002. 86 с.
39. Чернецкий Ю.П. Исследование процесса замораживания биопрепаратов в ампулах при свободном конвективном теплообмене / Ю.П. Чернецкий // Тр. Государственного научноконтрольного ин-та вет. препаратов. М., 1974. Т.XX. С. 331337.
40. Чернецкий Ю.П. К вопросу о классификации сублимационных установок / Ю.П. Чернецкий // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1974. Т. XX. С. 337339.
41. Белоус А.М. Криобиология / А.М. Белоус, В.И. Грищенко. К. : Наук. думка, 1994. 432 с.
42. Гордиенко Е.А. Основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий / Е.А. Гордиенко, Н.С. Пушкарь. К. : Наук. думка, 1994. 142 с.
43. Емцова Т.В. Влияние условий предварительного культивирования бактерий на их устойчивость и структуру клетки при замораживании и лиофилизации / Т.В. Емцова, Л.Н. Лаврова, Н.Д. Константинова // Микробиология. 1991. Т. 60, № 5. С. 879889.
44. Чернецкий Ю.П. Составление уравнения баланса тепла и определение коэффициента теплоотдачи для периода сублимации биологических препаратов в ампулах и флаконах / Ю.П. Чернецкий // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1971. Т. XVІІ С. 377381.
45. Нежута А.А. Разработка научнообоснованных режимов сублимационной сушки биопрепаратов / А.А. Нежута, Е.С. Сербис // Биотехнология. 2001. № 6. С. 5967.
46. Никитин Е.Е. Замораживание и высушивание биологических препаратов / Е.Е. Никитин, И.В.Звягин. М. : Колос, 1971. 344 с.
47. Калакуцкий Л.В. Российские коллекции микроорганизмов / Л.В.Калакуцкий [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. Т. 32, № 1. С. 144154.
48. Чернецкий Ю.П. Применение чехословацкого аппарата КС6 для сублимационной сушки микробов и вирусов, расфасованных в ампулах / Ю.П.Чернецкий // Труды Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1968. Т. XV. С. 350357.
49. Чернецкий Ю.П. Сублимационная сушка, как прогрессивный способ обратимого консервирования и стандартизации микроорганизмов и биопрепаратов / Ю.П. Чернецкий // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1972. Т. XVIII. С. 343346.
50. Каталог культур Музею патогенних для людини мікроорганізмів: бактерії, дріжджі, гриби, віруси, культури клітин / уклад. О.І. Поліщук [та ін.]; Мін-во освіти і науки України, МОЗ України, АМН України, Ін-т епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України. К. : Знання України, 2006. 146 с.
51. Данилова М.В. Лиофилизация бактерий / М.В. Данилова, И.М. Надирова, В.И. Кудрявцев // Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. М. : Наука, 1967. С. 119135.
52. Чернецкий Ю.П. Исследование полей давления в системе сублиматорконденсатор в процессе сублимационной сушки микроорганизмов / Ю.П.Чернецкий // Тр. Государственного научно-контрольного ин-та вет. препаратов. М., 1971. Т. XVІІ С. 371376.
53. Цуцаева А.А. Механизмы индукции и репарации нелетальных криоповреждений / А.А. Цуцаева, А.О. Котляров, О.В. Кудокоцева [и др.] // Цитология. 2004. Т. 46. № 10. С.879.
54. Холодовой стресс и биологические системы / А.А. Цуцаева, Ю.Е. Мику-линский, И.П. Высеканцев [и др.]. К. : Наук. думка, 1991. 176 с.
55. Криобиология и биотехнология / А.А. Цуцаева, В.Г. Попов, К.М. Сытник [и др.]. К. : Наук. думка, 1987. 215 с.
56. Виговська Л.М. Підхід до профілактики сальмонельозу та колібактеріозу молодняка сільськогосподарських тварин та птиці / Л.М. Виговська, Т.Г.Михальченко, О.П. Степанюк // Вісник Сумського Держ. аграр. ун-ту. Суми, 1999. № 4. С. 3536.
57. Виговська Л. Робота зі штамами мікроорганізмів / Л. Виговська, В. Ушка-лов, Л. Акименко [та ін.] // Вет. медицина України. 2007. № 12. С. 1719.
58. Виговська Л. Сальмонельоз тварин та шляхи вдосконалення засобів специфічної профілактики / Л. Виговська, В. Ушкалов, О. Салганська // Вет. медицина України. 2008. № 1. С. 1012.
59. Головко А.Н. Борьба с болезнями молодняка приоритетное направление ветеринарной науки / А.Н. Головко // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 1998. Вип. 75. С. 7378.
60. Risk factors for fecal shedding of Salmonella from horses in a veterinary teaching hospital / Catherine A. Alinovi [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. 2003. Vol.60. P. 307317.
61.Дідок Ю.В. Деякі епізоотологічні особливості сальмонельозів телят і поросят // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2000. Вип. 78, т. 1. С.7985.
62. Pfeifer C.G. Monitoring gene expression of Salmonella inside mammalian cells: comparison of luciferase and βgalactosidase fusion systems / C.G. Pfeifer, B.B. Finlay // Journal of Microbiological Methods. 1995. Vol. 24, № 2. P. 155164.
63. Sanson Robert L. A modelling approach to the quantification of the benefits of a national surveillance programme / Robert L. Sanson, R.N. Thornton // Preventive Veterinary Medicine. 1997. Vol. 30, № 1. P. 3747.
64. More Simon J. The performance of farmed ostrich chicks in eastern Australia / Simon J. More // Preventive Veterinary Medicine. 1996. Vol. 29, № 2. P. 91106.
65. Повышение эффективности диагностических исследований в эпизоотологии / А.А. Заволока, В.А. Заволока, Ан.А. Заволока [и др.] // Аграрный вестник Причерноморья. Одеса, 1999. Вып. 2(7). С. 34.
66. Івановська Л.Б. Вивчення спектру колострального імунітету бактеріальної етіології у телят / Л.Б. Івановська // Вісник Сумського Держ. аграр. ун-ту. Суми, 1999. Вип. 4. С. 9093.
67. Risk factor for Salmonella enterica subsp. enterica infection in senegalese broilerchicken flocks / E. Cardinale [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. 2004. Vol.63. P. 151161.
68. Experimental induction of pneumonic pasterellosis in calves by intratracheal infection with Pasteurella multocida, biotype A:3 / A. Dowling [et al.] // Vet. Science 2002. Vol. 73. P. 3744.
69. Kellar J. A. Veterinary epidemiology's new opportunity / J. A. Kellar // Preventive Veterinary Medicine. 1993. Vol. 18, № 1. P. 6164.
70. Пак С.Г. Сальмонеллез / С.Г. Пак, М.Х. Турьянов, М.А. Пальцев. М. : Медицина, 1988. 304 с.
71. Бортнічук В. Роль представників родини Enterobacteriaceae в етіології шлунково-кишкових хвороб новонароджених телят / В. Бортнічук, В. Садовський, Н. Сорокіна // Вет. медицина України. 1997. № 4. С. 2627.
72. Куриленко А.Н. Бактериальные и вирусные болезни молодняка сельскохозяйственных животных : учебник / А.Н. Куриленко, В.Л. Крупальник, Н.В. Пименов. М. : Колос. 2006. 296 с.
73. Стулова В. Профілактика сальмонельозів дотримання ветеринарносанітарних вимог при забої тварин, зберіганні, транспортуванні й переробці продукції / В. Стулова // Вет. медицина України. 2005. № 12. С. 28.
74. Современные особенности эпидемиологического процесса сальмонеллезов в СССР / Б.А. Черкаський, С.Ш. Рожнова, О.А. Христюхина [и др.] // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. № 1. С. 3236.
75. Бакулов И.А. Руководство по общей эпизоотологии / И.А. Бакулов. М.: Колос, 1979. 424 с.
76. Epidemiology and economics of clinical listeriosis in a sheep flock / Marilyn L. Nash, Laura L. Hungerford, Thomas G. Nashb [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. 1995. Vol. 29, № 3. P. 147156.
77. Quantitative risk assessment of human listeriosis from consumption of soft cheese made from raw milk / N. Bermah, M. Sanaa, M.H. Cassin, M.B. Hriffiths, O. Cerf. // Preventive Veterinary Medicine. 1998. Vol. 37, № 14. P. 129145.
78. Фотіна Т.І. Теоретичні і практичні основи контролю основного спектру умовно-патогенних мікроорганізмів при інфекційних хворобах птиці : автореф. дис. д-ра. вет. наук : спец. 16.00.03 «Ветеринарна мікробіологія та вірусологія» / Т.І. Фотіна. Х., 2003. 40 с.
79. Cattozzo E.M. Expression and immunogenicity of V3 loop epitopes of HIV-1, isolates SC and WMJ2, inserted in Salmonella flagellin / E.M. Cattozzo, B.A.D.Stocker, A. Radaelli // Journal of Biotechnology. 1997. Vol. 56, № 3. P.191203.
80. Зарицкий А.М. Сальмонеллезы / А.М. Зарицкий. К. : Здоровья. 1988. 160 с.
81. Зелингер Х. Листериоз / Х. Зелингер. М., 1959. 194 с.
82. Иванов А.И. Острые кишечные инфекции / А.И. Иванов. Л.: Медицина, 1982. 182 с.
83. Макаров В.В. Роль продуктов птицеводства в токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии / В.В. Макаров, И.Г. Сериш // Ветеринария. 1992. № 2. С. 21.
84. Минсберг Ц.Я. Сальмонеллез тифимуриум / Ц.Я. Минсберг. Кишинев: Штиинца, 1984. С. 118120.
85. Петровский К.С. Гигиена питания / К.С. Петровский, В.Д. Ванханен. М. : Медицина, 1982. С. 411418.
86. Распостранение сальмонеллеза и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в хозяйствах Харьковской области за период с 1994 по 20041 гг. / К.И. Ребро, Э.П. Петренчук, А.В. Гриненко [и др.] // Вет. медицина : міжвід. темат. наук. зб. Х., 2002. Вип. 80. C. 514517.
87. Descriptive epidemiology of morbidity and mortality in Minnesota dairy heifer calves / N.J. Sivula [et al.] // Preventive Veterinary Medicine. 1996. Vol. 27, № 34. P. 155171.
88. Grehn Michael The oxidase reaction of Pasteurella multocida strains cultured on Mu