ИММУНОГЕННОСТЬ И АНТИГЕННОСТЬ ИНАКТИВИРОВАННЫХ ЭМУЛЬСИН–ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ ИЗ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS И BRUCELLA OVIS

Краткое описание

УКРАИНСКАЯ АКАДЕМИЯ АГРАРНЫХ НАУК
ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ И КЛИНИЧЕСКОЙ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

О Р Л О В
С Е Р Г Е Й Н И К О Л А Е В И Ч

УДК 619: 616. 98: 616. 682-002: 615. 371

ИММУНОГЕННОСТЬ И АНТИГЕННОСТЬ ИНАКТИВИРОВАННЫХ
ЭМУЛЬСИНВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА
БАРАНОВ ИЗ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS И BRUCELLA OVIS

16.00.03 ветеринарная микробиология и вирусология

Диссертация
на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель
БАБКИН АНАТОЛИЙ ФЕДОРОВИЧ,
доктор ветеринарных наук,
старший научный сотрудник

Харьков - 2004

СОДЕРЖАНИЕ

Введение 4
Раздел 1 Обзор литературы 10
1.1 Возбудитель Brucella ovis и распространение
инфекционного эпидидимита баранов 10
1.2 Культурально-морфологические и антигенные
свойства Brucella ovis 11
1.3 Экспериментальная бруцеллаовисная инфекция 13
1.4 Гуморальные и клеточные факторы иммунитета
при инфекционном эпидидимите баранов 15
1.5 Методы контроля стерильности, безвредности и
оценки иммуногенности вакцин 21
1.6 Адъюванты при изготовлении инактивированных вакцин 23
1.7 Применение вакцин в системе профилактики и
ликвидации инфекционного эпидидимита баранов 25
Раздел 2 Собственные исследования 35
2.1 Материалы и методы исследования 35
2.2 Изучение стабильности биологических свойств вакцинных
штаммов Brucella abortus, Brucella ovis и изготовление
инактивированных вакцин 41
2.3 Определение вирулентности штаммов Brucella ovis 49
2.4 Сравнительное изучение иммуногенных свойств
живой и инактивированной вакцин из штамма
Brucella abortus 7-26 на морских свинках 53
2.5 Изучение гуморальных и клеточных реакций иммунитета
и прямого заражения для оценки иммуногенности вакцин
из штамма Brucella abortus 7-26 в опытах на баранах 62
2.5.1 Определение оптимальной дозы антигена в эмульсин-вакцине 62
2.5.2 Исследование иммуностимулирующего действия
адъюванта в эмульсин-вакцине 77
2.5.2.1 Гуморальные иммунные реакции 79
2.5.2.2 Специфическая гиперчувствительность и
фагоцитарная активность лейкоцитов 85
2.5.2.3 Проверка напряженности иммунитета
у привитых баранов 95
2.5.2.4 Оценка реакции специфического лизиса лейкоцитов
у невакцинированных баранов после заражения 96
2.6 Изучение антигенных и иммуногенных свойств
инактивированных адъювант-вакцин
из штамма Brucella ovis 67/Б 99
2.7 Результаты комиссионного испытания эмульсин-вакцины
против бруцеллаовисной инфекции из штамма B.ovis 67/Б-1 114
Раздел 3 Анализ и обсуждение результатов 119
Выводы 141
Практические предложения 144
Список использованной литературы 145
Приложения 172

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Инфекционный эпидидимит баранов (бруцелла-овисная инфекция, Brucella ovis-infection), регистрируют во многих странах мира с развитым овцеводством, в т.ч. на Украине. Заболевание наносит экономический ущерб, связанный с нарушением селекционной работы, снижением плодовитости племенных баранов-производителей и их выбраковкой, недополучением приплода у овцематок, расходами на проведение профилактических мероприятий. Оздоровление неблагополучных по инфекционному эпидидимиту (ИЭ) баранов хозяйств путем проведения многократных повторных серологических исследований и изоляции реагирующих животных требует больших затрат и нередко малоэффективно на овцефермах с крупным поголовьем (РуденкоА.Ф., 1986; BlascoJ.M., 1990; ДейнешА., 1992; БабкинА.Ф., 1998; OIE, 5th edition, 2004) [15, 39, 132, 167, 243]. Для специфической профилактики бруцеллаовисной инфекции были предложены живые противобруцеллезные вакцины из штаммов B.abortus 7-26, B.melitensis Rev-1 (ЖованикП.Н. с соавторами, 1980-1983; MarinC.M. et al., 1990; Косилов И.А. и др., 1987, 1996; Хлыстунов А.Г., Аракелян П.К., 1987, 1995 и др.) [21, 47, 58, 67, 73, 74, 127, 149, 189, 255] Однако применение живых вакцин в благополучных по бруцеллезу регионах запрещено в связи с возмож-ной реверсией патогенных свойств вакцинных штаммов [20, 117, 146, 160].
Проведенные исследования по испытанию инактивированных вакцин из гомологичных или гетерологичных видов бруцелл разноречивы и нередко свидетельствуют о недостаточной иммунологической эффективности этих препаратов против ИЭ баранов (BuddleB.M., 1954-1963; ClaxtonD., 1968; HaugleyK.G. et al., 1969; WestD.M., BruereA.N., 1979; BagleyC.V., 1979; СелимхановГ., 1980; BaileyK.M. et al., 1987, 1988; ХлыстуновА.Г., 1980, 1987, 1995; КасымовТ.К., 1985, 2002) [65, 66, 133, 150, 151, 153, 165, 166, 171, 172, 173, 174, 175, 234, 264]. В России в ВИЭВ разработана и испытана в производственных условиях с положительным результатом инактивированная эмульсин-вакцина из штамма B.ovis64 при оздоровлении овцеводческих хозяйств от инфекционного эпидидимита баранов (АбулхаировГ.Ш., 1991; МельниченкоВ.И., РомаховВ.А. и др., 1998) [4, 91].
В связи с указанным, создание экологически безопасного и высокоиммуногенного препарата для профилактики ИЭ баранов, а также совершенствование системы контроля бруцеллаовисной инфекции в условиях применения вакцин является актуальной проблемой.
Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнялась согласно научной тематики государственных программ Института экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УААН: ОНТП 0.51.09.01. 16Д Внедрить в производство научно-обоснованную систему мероприятий по профилатике и борьбе с бруцеллезом с.-х. животных (1986-1990гг.); УАО 1009822 Р Удосконалити диференційну діагностику та профілактику бруцельозу сільськогосподарських тварин (1991-1995гг.); 04.04 Удосконалити систему і засоби контролю епізоотичної ситуації по бруцельозу тварин в Україні, № держреєстрації 0197U000757 (1996-2000гг.) и 05.03 Розробити та впровадити сучасні засоби і методи діагностики й профілактики бруцелаовісної, кампілобактерійної і хламідійної інфекцій, № держреєстрації 0101U001610 (2001-2005гг.).
Цель и задачи исследований. Цель работы изготовить и определить иммуногенность, антигенность и безвредность инактивированных эмульсин-вакцин против инфекционного эпидидимита баранов из штаммов Brucella abortus и Brucella ovis, разработатать регламент на изготовление и контроль вакцины и наставление по ее применению.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
изучить стабильность культурально-морфологических и антигенных свойств вакцинных штаммов B.abortus 7-26 и B.ovis 67/Б, а также вирулентность контрольных штаммов B.ovis, которые используют для заражения животных при исследовании напряженности иммунитета;
провести адаптацию штамма B.ovis 67/Б к производственным условиям выращивания бактериальной массы;
изготовить инактивированную эмульсин-вакцину из штамма B.abortus 7-26, провести контроль на стерильность, безвредность и в сравнительных опытах на морских свинках и баранах изучить иммуногенность живой и инактивированной вакцин из штамма B.abortus 7-26;
в сравнительных опытах на морских свинках и баранах изучить антигенные и иммуногенные свойства эмульсин- и гидроокисьалюминиевой вакцин из штамма B.ovis 67/Б и клонов 67/Б-1, 67/Б-2;
отработать технологию изготовления инактивированной эмульсин-вакцины из штамма B.ovis 67/Б и клона 67/Б-1;
определить значение специфического гуморального и клеточного факторов иммунитета в оценке иммуногенности инактивированных эмульсин-вакцин и вирулентности контрольных штаммов.
Объект исследований: специфическая профилактика инфекционного эпидидимита баранов, живые и инактивированные вакцины.
Предмет исследований: иммуногенность, антигенность и безвредность инактивированных вакцин против инфекционного эпидидимита баранов из штаммов Brucella abortus и Brucella ovis, гуморальные и клеточные реакции специфического иммунитета у вакцинированных и инфицированных животных.
Методы исследования. При изготовлении и определении безвредности, иммуногенности, антигенности вакцинных препаратов и вирулентности контрольных штаммов использовали метод биологического эксперимента, а также методы бактериологического, гематологического исследования, реакции гуморального и клеточного иммунитета. Статистическую обработку результатов проводили на компьютере IBM PC с помощью программы Stat SF”, разработанной в ИЭКВМ. Достоверность различия средних показателей вычисляли по критерию Стьюдента.
Научная новизна полученных результатов. Впервые при инфек-ционном эпидидимите баранов установлена высокая иммуногенность инактивированной эмульсин-вакцины в сравнении с живой из отечественного вакцинного штамма B.abortus 7-26, инактивированной эмульсин-вакцины из штамма B.ovis 67/Б и его клонов.
Селекционированы клоны B.ovis67/Б-1 и 67/Б-2 вакцинного штамма B.ovis67/Б, адаптированные к условиям выращивания на питательных средах без сыворотки и повышенной концентрации СО2, с целью оптимизации и удешевления технологии изготовления инактивированных эмульсин-вакцин. Определена степень иммунного ответа и протективных свойств вакцин из штамма B.ovis 67/Б и клонов 67/Б-1, 67/Б-2 с различными адъювантами на морских свинках при бруцеллаовисной инфекции. На основе этого штамма впервые изготовлена и изучена инактивированная эмульсин-вакцина против ИЭ баранов. В опытах на морских свинках и баранах установлена высокая иммуногенная активность (100% иммунных животных) и оптимальная иммунизирующая доза инактивированной эмульсин-вакцины из штамма B.ovis67/Б и клона 67/Б-1 (5,0х109м.к./см3).
Изучена динамика и продолжительность поствакцинальной серопози-тивности и специфической клеточной реактивности организма животных и степень защиты после прямого заражения баранов, привитых вакцинами из отечественных штаммов B.abortus и B.ovis.
Получены патенты Украины на изобретение Штам Brucella ovis67/Б для виготовлення інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів (пат. 51379 А) и Інактивована емульсин-вакцина з штаму Brucella ovis 67/Б проти інфекційного епідидиміту баранів” (пат. 53940 А).
Практическое значение. Установлены параметры изготовления инактивированной эмульсин-вакцины из отечественного штамма B.ovis67/Б и клона B.ovis 67/Б-1. Научно обосновано и предложено проводить оценку степени инцированности животных в контроле после аппликации B.ovis на слизистую оболочку глаз и препуция баранам комплексно, учитывая наряду с изоляцией культуры заражающего штамма появление и титры антител в РДСК, РИД с бруцелллаовисным антигеном. Разработаны лабораторний регламент на изготовление и контроль инактивированной эмульсин-вакцины против инфек-ционного эпидидимита баранов и временное наставление по ее применению, рассмотренные методкомиссией ИЭКВМ и утвержденные директором ИЭКВМ 22.04.2004г. Применение вакцины позволит значительно снизить экономи-ческий ущерб и сократит сроки оздоровления овцеводческих хозяйств, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов.
Личный вклад соискателя состоит в самостоятельном выполнении научных экспериментов, бактериологических, -серологических и гематологи-ческих методов исследования, статистической обработке и анализе первичных данных, обобщении результатов и выводов.
Апробация результатов диссертации. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на: Всесоюзной научной конференции Повышение продуктивности с.-х. животных и усовершенствование мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств” (17-22 сентября 1991г., ХЗВИ, г.Харьков); конференции молодых ученых Проблеми вет. медицини по обслуговуванню тваринництва колективних та фермерських господарств” (26 октября 1992г., ИЭКВМ, г.Харьков); Международной научной конференции Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы” (20-22 сентября 1995г., ИЭКВМ, г.Харьков), Международной научно-практической конференции Ветеринарна наука на порозі ХХІ віку” (15-16 ноября 2000г., ИЭКВМ, г.Харьков); 5-м съезде паразитоценологов Украины Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини” (5-6 апреля 2001г., ХЗВИ, ХГМУ, г.Харьков); Международной научно-практической конференции ІЕКВМ 80 років на передовому рубежі ветеринарної науки” (15-19 октября 2002г., ИЭКВМ, г.Харьков); Международной научно-практической конференции Актуальні проблеми ветеринарної медицини в умовах сучасного ведення тваринництва” (26 мая-2 июня 2003г., г.Феодосия); Международной научно-практической конференции Ветеринарна медицина 2004: сучасні аспекти розробки, маркетингу і виробництва ветеринарних препаратів” (24-31 мая 2004г., г.Феодосия); заседаниях и отчетных сессиях Ученого совета ИЭКВМ УААН в 1990-2003гг.; заседаниях методических комиссий ИЭКВМ; межлабораторном совещании ИЭКВМ в 2004г.
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 12 научных работах, в том числе 8 статей в специализированных трудах, включенных в перечень ВАК. Получены 2 патента на изобретение.

Список литературы

ВЫВОДЫ
1. Изучена стабильность культурально-морфологических, антигенных и иммуногенных свойств отечественных вакцинных штаммов B.abortus 7-26 и B.ovis 67/Б, разработаны параметры режима инактивации суспензий B.abortus и B.ovis, установлена оптимальная концентрация микробных клеток и адъювантов в вакцинных препаратах, определена динамика гуморального и клеточного специфического иммунного ответа, установлена степень иммуногенности инактивированных эмульсин-вакцин в опытах на морских свинках и баранах, разработан лабораторный регламент на изготовление и контроль инактивированной эмульсин-вакцины против инфекционного эпидидимита баранов и наставление по ее применению.
2. Вакцинные штаммы B.abortus 7-26 и B.ovis 67/Б при хранении путем пересевов на плотных питательных средах с интервалом 30-45 суток или в лиофилизированном состоянии в течение 10 лет стабильны по культурально-морфологическим, антигенным и иммуногенным свойствам.
3. В целях оптимизации процесса получения инактивированной эмульсин-вакцины против инфекционного эпидидимита баранов селекцинио-нированы клоны B.ovis 67/Б-1 и B.ovis 67/Б-2, стабильно сохраняющие антигенные и иммуногенные свойства исходного штамма B.ovis 67/Б, но отличающиеся накоплением и более легким смывом бактериальной массы при выращивании на плотных питательных средах без сыворотки крови животных и без повышенного содержания СО2 в атмосфере культивирования.
4. Бактериальные суспензии 2-3-х суточных культур B.abortus 7-26, B.ovis 67/Б и клонов 67/Б-1, 67/Б-2 при концентрации 5,0х109 или 10,0х109м.к./см3 в 0,85% растворе натрия хлорида, рН 7,2 полностью инактивируются раствором формалина в конечной концентрации 0,4% в течение 24 часов при 37,5±0,5ОС и последующим выдерживанием суспензии при 6,0±2,0ОС в течение суток.
5. Коньюнктивальный способ аппликации живой вакцины из штамма B.abortus 7-26 в дозе 5,0х107м.к. создавал иммунитет у 100% морских свинок после контрольного заражения штаммом B.ovis 65939 в дозе 2,0х109м.к. в сравнении с подкожной прививкой в дозе 25,0х107м.к., которая индуцировала иммунитет у 83,3-100,0% животных. Инактивированная эмульсин-вакцина из штамма B.abortus 7-26 создавала иммунитет у 100% привитых морских свинок в дозе 25,0х106м.к. У контрольных морских свинок заражающий штамм реизолирован у 83,3-100% животных, индекс инфицированности 21,4-28,6%.
После прививки живой вакциной из штамма B.abortus 7-26, бруцеллезную и бруцеллаовисную серопозитивность выявили в единичных случаях через 45 суток, в то время как применение инактивированной эмульсин-вакцины вызывало высокий уровень гуморальных антител у всех вакцинированных морских свинок как с бруцеллезным (РА 2,70±0,11lg, РСК 2,64±0,11lg), так и с бруцеллаовисным (РДСК 2,45±0,11lg, РИД 1,83±0,32lоg2) антигенами.
6. Инактивированная эмульсин-вакцина из штамма B.abortus 7-26 в дозе 5,0х109м.к. была слабореактогенной и высокоиммуногенной в опытах на 67 баранах, вызывала высокий уровень гуморальных антител в реакциях с бруцеллезным (РБП 4,50±0,33lоg2, РА 2,83±0,09lg, РСК 3,10±0,02lg) и с бруцеллаовисным (РДСК 2,35±0,10lg, РА 2,83±0,08lg, РИД 5,50± 0,33lоg2) антигенами и реакций клеточного иммунитета: положительная внутрикожная или пальпебральная пробы гиперчувствительности замедленного типа, реакция специфического лизиса лейкоцитов крови in vitro с бруцеллином 20,34±3,56% и бруцеллоовином 11,05±2,63%, активизацию фагоцитарной системы (ОФР 95,21±0,09%).
Через 6 месяцев после однократного применения вакцины иммунитет выявлен у 100% привитых баранов при выделении заражающего штамма B.ovis у 88,9-100% в контрольных животных, индекс инфицированности 11,2-50,0%.
7. Разработана и испытана в комиссионных опытах инактивированная эмульсин-вакцина против инфекционного эпидидимита баранов из штамма B.ovis 67/Б и его клонов 67/Б-1, 67/Б-2 на основе масляных адъювантов российского и французского (Montanide ISA 70) производства. В опытах на 75 морских свинках, привитых в дозе 2,5х109м.к., через 30-60 суток после вакцинации установлен иммунитет у 100% животных и в опытах на 26 баранах, привитых в дозе 5,0х109м.к., через 6 и 12 месяцев после прививки выявлен иммунитет у 100% животных. Поствакцинальная бруцеллаовисная серопозитивность проявилась у всех привитых животных при отсутствии бруцеллезной серопозитивности.
8. Разработан лабораторный регламент на изготовление и контроль инактивированной эмульсин-вакцины из штамма B.ovis 67/Б-1 на стерильность, безвредность и иммуногенность. Вакцину вводят подкожно морским свинкам в дозе 0,5см3 (2,5х109м.к.) и баранам в дозе 1,0см3 (5,0х109м.к.). Оценка иммуногенности серий вакцины: при экспериментальном заражении вакцина должна создавать иммунитет не менее, чем у 80% вакцинированных животных и инфицировании в контроле не менее 80% животных.
9. Инактивированная эмульсин-вакцина на основе отечественного вакцинного штамма B.ovis 67/Б, клонов 67/Б-1 и 67/Б-2, с масляным адъювантом безвредный, экологически безопасный и иммуногенный препарат. Применение вакцины рекомендуется на период оздоровления овцеферм, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

По результатам исследований разработан Лабораторний регламент на виготовлення і контроль інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів и Тимчасова настанова по застосуванню інактивованої емульсин-вакцини проти інфекційного епідидиміту баранів, рассмотренные методкомиссией ИЭКВМ и утвержденные директором ИЭКВМ 22.04.2004г.
Применение инактивированной эмульсин-вакцины предлагается в системе искоренения болезни в овцеводческих фермах, неблагополучных по инфекционному эпидидимиту баранов. Это позволит снизить экономический ущерб за счет сохранения племенных баранов и сократит сроки оздоровления.
Для оценки иммуногенности инактивированной эмульсин-вакцины и вирулентности контрольного штамма предложено использовать РДСК (ТУУ 64.15.059-95), РИД (ТУУ 46.15.197-96) с бруцеллаовисным антигеном и РСЛЛ с бруцеллином или бруцеллоовином.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. АбдуллоевУ.А., ДжумаевМ. Биохимические показатели крови при инфекционном эпидидимите баранов // Биологические основы повышения продуктивности и охраны здоровья животных. Душанбе, 1988. С.39-41.
2. АбдуллоевУ.А. Распространение инфекционного эпидидимита в хозяйствах Таджикистана и эффективность мер по их оздоровлению: Автореф. дисканд. вет. наук: М., 1975. 24 с.
3. Абулхаиров Г.Ш. Вирулентные свойства штамма Brucella ovis в опытах на морских свинках и баранах // Бюлл. ВИЭВ. 1990. Вып. 73-74. С.128-133.
4. Абулхаиров Г.Ш., Ромахов В.А. Антигенные и иммуногенные свойства вакцинных препаратов бруцелл овечьего типа // Совершенствование методов гос. контроля вет. препаратов: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. М., 1991. С.116-118.
5. Аллергическая диагностика инфекционного эпидимита баранов с применением нового препарата бруцеллоовина / У.Э.Ниязов, Н.П.Ива-нов, К.В.Шумилов и др. // Совершенствование методов гос.контроля вет. препаратов: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. М., 1991. С.126-128.
6. Альбертян М.П., Яраев Р.Г. Вакцина из штамма 19 при коньюнктивальном методе введения против бруцеллеза крупного рогатого скота // Проблемы изыскания, синтеза и производства новых препаратов для ветеринарии: Тез. докл. науч. конф. Самарканд, 1994. С.13.
7. Альжанов С.Ж., Вернер И.К. Выделение, фракционирование и характе-ристика липополисахаридов S и Rтипа из бруцелл овечьего типа // Совершенствование методов гос. контроля вет. препаратов: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. М., 1991. С.119-120.
8. Аманжолов Б.А. Специфическая профилактика инфекционного эпиди-димита баранов: Дисканд. вет. наук: М., 1978. 148 с.
9. Антонов В.С., Руденко А.Ф. Антигенна спорідненість культури Brucella ovis та культури вакцинного штаму Brucella abortus 7-26 // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1982. Вип. 55. С.20-21.
10. Афанасьев Б.Н. Бактериологическая диагностика инфекционного эпиди-димита баранов, вызываемого бруцелла овис // Тр. / Ставропольской НИВС. 1974. Вып. 7. С.89-92.
11. Афанасьев Б.Н., Кислов Г.И. Диагностика и борьба с инфекционным эпидидимитом баранов // Инфекционные и паразитарные болезни овец на Сев. Кавказе. Новочеркасск, 1982. С.37-44.
12. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиоло-гических исследованиях. Л. 1962.
13. Бабкин А.Ф., Галищев Н.И. Изучение вирулентности и иммуногенности штаммов бруцелла овис на морских свинках // Общая эпизоотология: иммунол., экол. и методол. пробл.: Материалы междунар. науч. конф., 20-22 сент. 1995 г. / ИЭКВМ. Х., 1995. С.536-540.
14. Бабкин А.Ф., Галищев Н.И., Мелихов С.В. Серологическая идентификация культур возбудителя инфекционного эпидидимита баранов Brucella ovis// Пробл. зооiнженерiї та вет. медицини: Зб. наук. праць / ХЗВI: Матерiали 5-го з`їзду паразитоценологiв України 5-6 квiтня 2001 р. Х., 2001. С.172-173. С.6869.
15. Бабкин А.Ф. Концепция эпизоотологического надзора и государственная система профилактики бруцеллеза в Украине // Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. Х., 1998. Вип. 74. С.18-28.
16. Бабкін А.Ф. Результати виробничого випробування реакції імунодіфузії для діагностики інфекційного епідидиміту баранів // Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. Х., 1997. Вип. 73. С.3-6.
17. Борисов В.В., Сурнев Д.С., Борисов А.В. Изучение иммунобиологических свойств масляных адьювантов Монтанид ИЗА 70 и Монтанид ИЗА 206 в составе инактивированной вакцины против синдрома гидроперикардита кур// Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. Х., 2000. Вип. 78. С.23-28.
18. Бровик Е.А. Реактивность овец при различных способах иммунизации вакци-ной из штамма Br.melitensis Rev-1 // Бюлл. ВИЭВ. 1990. Вып. 75. С.25-27.
19. Бронников В.С., Львова О.В., Сидоренко О.А. Иммунологические реакции у лабораторных животных на введение экологически безопасной химиче-ской противобруцеллезной вакцины с различными иммуномодуляторами // Сиб. аграр. наука 111 тысячелетия. Новосибирск, 2000. С.146-147.
20. Бусол В.А., Бабкин А.Ф., Жованик П.Н. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. К.: Урожай, 1991. 176с.
21. Вакцинний процес у овець після щеплення противобруцельозної вакцини/ П.М.Жованік, А.Ф.Бабкін., П.М.Діренко та ін. // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1983. Вип. 58. С.3-6.
22. Вождаев Н.С., Шергин Ю.К., Сманов К.С. Экспериментальное заражение баранов Br.ovis // Тр. / Кирг. науч.- произв. объединение по животно-водству. 1979. Вып. 30. С.3-5.
23. Временное наставление по применению набора компонентов для серологи-ческой диагностики лейкоза крупного рогатого скота в РИД / В.А.Бусол, В.И.Цымбал, В.В.Киприч, А.Ф.Бабкин, В.А.Дудник, П.П.Достоевский; Утвердж. Глав. Упр. ветеринарии Госагропрома УССР 19.03.1991г.; Регистр. № 15-9, 1/8. Харьков, 1991. 6 с.
24. Выбор масляного адьюванта для эмульсионной инактивированной вакцины против пастереллеза свиней // А.В.Потехин, В.С.Русалеев, О.В.Прунтова, Г.М.Семенова // Пробл. зооінженерії та вет. медицини. Вет. науки: Зб. наук. праць; Матеріали 5-го з’їзду паразитоценологів України, 5-6 квітня 2001 р./ ХЗВІ. Х., 2001. Вип. 7 (31). С.312-315.
25. ГінзбургВ.В. Исследование природы Br.ovis // Тр. / ЛВИ. 1967. Вып.28. С.20-25.
26. Гістоімуногенез у морських свинок після щеплення противобруцельозної вакцини з штаму Br.abortus 7-26 / П.М.Жованік, Г.А.Красніков, С.К.Горбатенко, М.М.Соса // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1981. Вип. 53. С.5-10.
27. Горбатенко С.К. Контроль імунологічного статусу в стаді нетелей, виро-щуваних під захистом профілактичного щеплення інаглютиногенної бруцельозної вакцини. 2. Наслідки дослідження проб крові методом опсоно-фагоцитарної реакції // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1976. Вип. 44. С.23-26.
28. Далгат М.М. Инфекционный эпидидимит баранов и меры борьбы с ним в Дагестане // Тр. / Дагестанский НИВИ. 1968. Т.2. С.421-423.
29. Далгат М.М., Селимханов Г Материалы экспериментального заражения ба-ранов культурой Br.ovis // Тр./ Дагестанский НИВИ. 1972. Т.5. С.65-69.
30. Далгат М.М., Селимханов Г., Яли Е.П. Клинико-гематологические и патологоанатомические показатели при инфекционном эпидидимите баранов // Тр. / Дагестанский НИВИ. 1974. Т. 6-7. С.49-53.
31. ДегтяренкоЛ.В. Биосинтез антител у баранов, экспериментально зараженных B.ovis // Хронические инфекции животных. Новосибирск, 1981. С.38-42.
32. Дегтяренко Л.В., Кондауров Б.И. Диагностическая ценность комплексного RS-антигена для одновременной диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидидимита баранов в РДСК // Тр. / Сиб.НИВИ. 1980. Вып. 37. С.15-18.
33. Дегтяренко Л.В., Косилов И.А. Производственные испытания овисного антигена СибНИВИ // Бюлл. ИЭВСиДВ. 1976. Вып. 4. С.13-17.
34. Дегтяренко Л.В., Разницына Г.В. Иммунный ответ организма баранов при экспериментальном заражении Br.ovis // Эпизоотология, диагностика и меры борьбы с инфекционными болезнями. Новосибирск, 1986. С.80-85.
35. Дегтяренко Л.В., Разницына Г.В. Результаты изучения метода провокации антител при инфекционном эпидидимите баранов в экспериментальных условиях // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995). С.75-81.
36. Дегтяренко Л.В., Разницына Г.В. Экспериментальное изучение реакции лизиса лейкоцитов при инфекционном эпидидимите баранов // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995). С.86-89.
37. ДегтяренкоЛ.В., ХлыстуновА.Г., ГончаренкоВ.Я. Реактивность организма баранов, привитых противобруцеллезными вакцинами Рев-1 и К-24 // Бюлл. ИЭВСиДВ. 1983. Вып. 31. С.19-24.
38. Дейнеш А.А, Бабкин А.Ф. Применение РИД и ИФА при оздоровлении овцеводческих хозяйтв от инфекционного эпидидимита // Повышение продуктивности с.-х. животных и совершенствование мер борьбы с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства и создания фермерских хозяйств: Тез. докл. Всесоюз. конф. Х.., 1991. С.115.
39. Дейнеш А.А. Эпизоотология, усовершенствование диагностики и мер борьбы с инфекционным эпидидимитом баранов в Украине: Дис. ... канд. вет. наук: Харьков, 1992. 157 с.
40. Диагностика инфекционного эпидидимита баранов методом иммуно-ферментного анализа / У.Э.Ниязов, Л.П.Мельниченко, К.В.Шумилов и др. // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995). С.89-95.
41. Диагностика латентных форм инфекционного эпидидимита баранов/ И.А.Косилов, П.К.Аракелян, Г.С.Клочков и др. // Ветеринария.1995. №5. С.26-29.
42. Диагностическая эффективность РА с овисным антигеном ИЭВСиДВ/ Л.В.Дегтяренко, В.Я.Гончаренко, А.Г.Хлыстунов и др.// Бюлл. ИЭВСиДВ. 1985. Т. 30. С.24-30.
43. Димова А.С. Оценка технологичности различных противобруцеллезных вакцин и схем их применения на крупном рогатом скоте: Автореф. дисканд. вет. наук: Новосибирск, 2003. 22 с.
44. ДимовС.К., ОщепковВ.Г. Использование аллергической пробы при инфекционном эпидидимите баранов// Бюлл. ИЭВСиДВ. 1980. Вып. 16. С.8-12.
45. Диренко П.М., Руденко А.Ф., Билан А.Д. Совершенствование мер борьбы с заболеванием овец, вызываемым Br.ovis // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1984. Вип. 59. С.11-14.
46. Діренко П.М., Руденко А.Ф. Вивчення експериментальної Brucella ovis інфекції в дослідах на вівцях // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1976. Вип. 44. С.26-31.
47. Діренко П.М., Руденко А.Ф. Про оздоровлення стада овець неблагопо-лучного по Br.ovis інфекції // Ветеринарія: Респ. міжвід. темат. наук. зб. К., 1982. Вип. 56. С.28-32.
48. Защита животных от болезней. 70-лет БелНИИЭВ им. С.И.Вышелесского// Минск: Бел. Изд. ТОВ Хата”, 2000. С.93-94.
49. ЗемсковА.М. Некоторые механизмы действия адьювантов// Иммунология. 1982. № 1. С.6-13.
50. Желудков М.М., Чернышева М.И. Использование аллерготеста in vitro для дифференциальной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза у людей// ЖМЭИ. 1985. №2. С.92-95.
51. ІвановВ.Т. Пептидные антигены и адьюванты в специфических вакцинах// ЖВХО им.Д.И.Менделлева. 1983. Т. 33. С.523-530.
52. Иванов Н.П. Изменчивость антигенной активности бруцелл при воздей-ствии на них ультразвуковых волн // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1974. № 5. С.59-62.
53. Иванов Н.П. Новые подходы к изготовлению диагностических препаратов при бруцеллезе и инфекционном эпидидимите баранов // Совершен-ствование систем и методов в борьбе с бруцеллезом и туберкулезом животных: М., 1987. С.18-26.
54. Игнатов П.Е. Изыскание протективных антигенов против инфекции, вызываемой B.ovis: Автореф. дисканд. биол. наук: М., 1981. 23 с.
55. Изучение иммуногенной активности искусственных бруцеллезных антигенов / Р.В.Петров, Р.М.Хаитов, П.И.Игнатов и др.// ЖМЭИ. 1988. № 7. С.39-42.
56. Изучение иммуногенности некоторых вакцин при инфекционном эпидидимите баранов/ Б.Н.Афанасьев, И.Ф.Таран, В.И.Щедрин и др.// Диагностика, профилактика и лечение с.-х. животных в зоне Сев. Кавказа. Новочеркасск, 1984. С.14-23.
57. Изучение реакции непрямой иммунофлуоресценции при диагностике инфекционном эпидидимите баранов/ Л.П.Мельниченко, У.Э.Ниязов, К.В.Шумилов и др. // Методы и средства диагностики, профилактики и лечения инфекционных болезней животных. М, 1985. С.76-78.
58. Иммуногенные, антигенные и вирулентные свойства противобруцеллезной вакцины УНИИЭВ из штамма B.abortus 7-26/ П.Н.Жованик, Г.А.Красников, А.Ф.Бабкин и др. // Состояние и перспективы науч. исследований по диагностике и профилактике туберкулеза и бруцеллеза и меры борьбы с этими болезнями с.-х. животных: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. Омск, 1980. С.261-263.
59. Иммунология инфекционного процесса / В.И.Покровский, С.П.Гордиенко, В.И.Литвинов и др. М., 1993. 306 с.
60. Инактивированная вакцина против инфекционного эпидидимита баранов/ В.И.Мельниченко, В.А.Ромахов, Г.Ф.Коромыслов и др. // Основные науч. исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных, профилактика и орг. мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири: Тез. докл. науч.-практ. конф. Новосибирск, 1995. С.98-99.
61. Калмыков В.В. Зависимость агглютиногенных и иммуногенных свойств адьювант вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота от способа инактивации бруцелл // Акт. проблемы патологии с.-х. животных: Материалы междунар. науч.-практ. конф. Минск, 2000. С.272-274.
62. Калмыков В.В. Пути повышения иммуногенной активности адьювант- вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота // Акт. проблемы патологии с.-х. животных: Материалы междунар. науч.-практ. конф. Минск, 2000. С.270-272.
63. Касьянов А.Н. Аллергическая и серологическая диагностика и профи-лактика бруцеллеза животных. Автореф. дисд-ра. вет. наук: М., 1987. 42 с.
64. Касьянов Г.С., Передереев Н.И. Нефелометрический метод определения белка в новом аллергене бруцеллине ВИЭВ // Бюлл. ВИЭВ. 1971. Вып.10. С.110-114.
65. Касымов Т.К. Результаты сравнительного изучения реакногенных свойств противобруцеллезных вакцин из штамма 53Н38, 45/20, 104-М, Рев-1 на баранах-производителях // Методы и средства диагностики, профилактики и лечения инфекц. болезней животных: Тр./ ВГНКИ. 1985. С.71-75.
66. Касымов Т.К. Эпизоотология бруцеллеза и оптимизация противобру-целлезных мероприятий в условиях Кыргызстана: Дисдокт. вет. наук: Новосибирск, 2002. 48 с.
67. Кислов Г.И., Малышева Л.А., Воскресенская Т.Г. Изучение реактогенных и иммуногенных свойств из штамма Рев-1 при инфекционном эпиди-димите баранов // Тр. / СКЗНИВИ. 1984. Вып. 26. С.6-14.
68. Кислов Г.И. Некоторые вопросы инфекционного эпидидимита баранов в хозяйстсвах Ростовской области// Профилактика и меры борьбы с болез-нями овец: Тез. докл. на науч. совещании. Махачкала, 1973. С.69-70.
69. Кислов Г.И. Экспериментальное заражение овец Brucella ovis // Тр./ СКЗ НИВИ. 1978. Вып. 20. С.123-126.
70. Клочков Г.С., Ощепков В.Г. Изучение аллергических реакций у овец, зараженных Бр. овис // Тр. / Сиб. НИВИ. 1975. Вып. 25. С.18-20.
71. Коромыслов Г.Ф., Игнатов П.Е. Иммуностимуляция: средства, методы и перспективы // Сельхоз. биология. 1983. № 7. С.99-107.
72. Косилов И.А., Аракелян П.К., Клочков Г.С. Изучение специфичности и чувствительности РИД с Ополисахаридным антигеном при бруцеллезе овец // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995). С.52-54.
73. Косилов И.А., Дегтяренко Л.В., Хлыстунов А.Г. Эффективность противо-эпидимитных мероприятий при использовании специфической профилактики и новых средств диагностики // Тез. докл. III Респ. науч.-практ. конф. Минск, 1987. С.125-126.
74. Косилов И.А., Хлыстунов А.Г., Аракелян П.К. Эффективность иммуни-зации баранов против инфекционного эпидидимита // Ветеринария. 1996. № 9. С.27-34.
75. Косилов И.А., Хлыстунов А.Г. Противоэпизоотическая эффективность специфической профилактики инфекционного эпидидимита баранов// Вопросы эпизоотологии, диагностики и мероприятия по ликвидации туберкулеза животных. Новосибирск. 1987. С.99-104.
76. Косинов Л.И. Эффективность диагностических и противоэпизоотических мероприятий при инфекционном эпидидимите баранов: Автореф. дис канд вет. наук: Минск, 1983. 35 с.
77. Кравців Ю.Р., Дацьків О.М. Імунні реакції на антигенну стімуляцію // Вет. медицина: Мiжвiд. темат. наук. зб. Х., 2002. Вип. 80. С.324-326.
78. КрасиковА.П., ИвановаО.Н. Способы повышения напряженности иммунитета при бруцеллезе // Туберкулез и бруцеллез с.-х. животных: методы и средства диагностики и профилактики. Новосибирск, 1994 (1995). С.32-36.
79. Кузмиченок А., Мельниченко В.И. Влияние сроков хранения музейных культур на их фенотипическую и генотипическую изменчивость // Основные науч. исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе Сибири: Тез. докл. науч.-практ. конф. Новосибирск, 1995. С.92-94.
80. Курдина Д.С. Сравнительное изучение остаточной вирулентности вакцин-ных штаммов бруцелл разных типов // ЖМЭИ. 1963. № 4. С.97-102.
81. Лазарев Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина, 1985. 256 с.
82. ЛиховидовГ.Д., БулигінаЕ.С. Питання потребує розробки (про інфекційне захворювання овець) // Тваринництво України. 1971. № 12. С.36-37.
83. Лихолетов С.М. Современные аспекты разработки вакцин, адьювантов и иммуностимуляторов // Успехи современной биологии. 1988. Т.105. Вып.1. С.83-99.
84. Мазуров Д.В., Хамидуллина К.Ф., Пинегин Б.В. Оценка поглощения бактерий гр