ІМУНОМОДУЛЮЮЧА АКТИВНІСТЬ ТРАНСФЕР-ФАКТОРА ПРОТИ ВІРУСУ ЧУМИ М’ЯСОЇДНИХ

Краткое описание

НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ

На правах рукопису

ТАШУТА Олександр СЕРГІЙович

УДК 619:612.017: 616.98:578.831.2

ІМУНОМОДУЛЮЮЧА АКТИВНІСТЬ ТРАНСФЕР-ФАКТОРА ПРОТИ ВІРУСУ ЧУМИ М’ЯСОЇДНИХ

16.00.03 ветеринарна мікробіологія, епізоотологія, інфекційні
хвороби та імунологія

Дисертація на здобуття наукового ступеня
кандидата ветеринарних наук

Науковий керівник :
Скибіцький Володимир Гурійович
доктор ветеринарних наук, професор

Київ - 2009

ЗМІСТ

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ, СИМВОЛІВ, ОДИНИЦЬ, СКОРОЧЕНЬ І ТЕРМІНІВ ........................................................................................................ 6
ВСТУП ...................................................................................................................... 8
РОЗДІЛ 1
ОГЛЯД ЛІТЕРАТУРИ ........................................................................................... 13
1.1. Збудник чуми м’ясоїдних ..................................................................... 13
1.1.1. Репродукція та культивування вірусу ................................. 15
1.1.2. Клінічні ознаки ....................................................... 18
1.1.3. Патолого-анатомічні зміни .... 22
1.1.4. Патогенез ..... 23
1.1.5. Лабораторна діагностика ... 25
1.1.6. Імунітет і засоби специфічної профілактики ... 28
1.1.7. Терапія тварин, хворих на чуму м’ясоїдних .... 31
1.2. Трансфер-фактор .. 34
1.2.1. Роль імунної системи організму та імунодефіцити .... 34
1.2.2. Імуномодулятори та трансфер-фактор . 37
1.2.3. Видові особливості та фізико-хімічні властивості фактора перенесення .. 42
1.2.4. Механізм утворення та дії фактора перенесення .... 44
1.2.5. Неспецифічна та специфічна дія фактора перенесення .. 46
1.2.6. Практичне застосування трансфер-фактора .... 48
1.2.7. Заключення з огляду літератури ..... 51
РОЗДІЛ 2
ЗАГАЛЬНА МЕТОДИКА ТА ОСНОВНІ МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ ............. 52
2.1. Матеріали і методи досліджень.............................................................. 52
2.2. Реактиви та обладнання.......................................................................... 53
2.3. Культивування вірусу чуми м’ясоїдних з метою отримання його препаративної маси для імунізації тварин-донорів ТФ.. 56
2.4. Отримання трансфер-фактора................................................................ 59
2.4.1. Вибір оптимальної схеми імунізації тварин-донорів. 60
2.4.2. Виділення трансфер-фактора активного імунітету проти збудника чуми м’ясоїдних................61
2.4.2.1. Виділення лімфоцитів для отримання трансфер-фактора.. 62
2.4.2.2. Отримання діалізного екстракту лімфоцитів. ................. 62
2.5. Визначення активності отриманих зразків трансфер-фактора.... 64
2.5.1. Перенесення гіперчутливості сповільненого типу ксеногенним реціпієнтам....................................................................... 64
2.5.2. Постановка реакції інгібіції міграції лейкоцитів........ 65
2.5.3. Визначення впливу зразків трансфер-фактора, специфічного щодо збудника ЧМ, на здатність лімфоцитів до бласттрансформації ..... 68
2.6. Визначення активності фактора перенесення активного імунітету, специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних на КЕ ..................... 72
2.7. Відпрацювання методики визначення біологічної активності дослідних зразків ТФ, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних, на курячих ембріонах.................................................................................................................. 74
2.8. Дослідження впливу специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних трансфер-фактора на деякі біохімічні, гематологічні та імунобіологічні показники крові собак.... 75
2.8.1. Визначення популяційного та субпопуляційного складу імунокомпетентних клітин собак... 76
2.8.2. Визначення деяких біохімічних показників у сироватці крові піддослідних собак ..... 80
2.9. Отримання полівалентного трансфер-фактора, специфічного щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції та чуми м’ясоїдних, та визначення його імунобіологічних властивостей .86
2.10. Використання гельпроникаючої хроматографії для розділення зразків ТФ на окремі фракції .. 86
2.11. Діагностика чуми м’ясоїдних. Ідентифікація вірусу чуми м’ясоїдних методом ІФА . 88
2.12. Визначення ефективності клінічного застосування експериментальних зразків ТФ для лікування хворих собак .... 91
2.13. Статистична обробка експериментальних даних ................................. 92
РОЗДІЛ 3
РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ................................................................................94
3.1. Оптимізація культивування вірусу чуми м’ясоїдних з метою отримання його препаративної маси для імунізації тварин-донорів ТФ ........ 94
3.1.1. Культивування вірусу ЧМ у курячих ембріонах ....................... 94
3.1.2. Оптимізація культивування вірусу чуми м’ясоїдних у клітинній культурі ........ 97
3.2. Вплив антигену ЧМ та схем імунізацій на інтенсивність сенсибілізації тварин-донорів трансфер-фактора .. 103
3.3. Вплив специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних трансфер-фактора на біохімічні, гематологічні та імунобіологічні показники крові собак ........... 105
3.4. Імуномодулююча активність експериментальних зразків трансфер-фактора проти вірусу чуми м’ясоїдних .............................. 115
3.4.1. Результати дослідження міжвидової активності експериментальних зразків трансфер-фактора. Перенесення гіперчутливості сповільненого типу ксеногенним реципієнтам ........116
3.4.2. Визначення імунобіологічної активності ТФ в реакції інгібіції міграції лейкоцитів ............................ 119
3.4.3. Стимулюючий вплив трансфер-фактора на бласттрансформацію лімфоцитів під дією специфічного антигену та фітогемаглютиніну ....... 121
3.4.4. Визначення протективних властивостей фактора перенесення активного імунітету, специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних в умовах експериментального зараження КЕ відповідним вірусом ..... 126
3.4.5. Тестування біологічної активності експериментальних зразків ТФ у КЕ ........ 130
3.5. Отримання полівалентного трансфер-фактора «ГексаканісТФ», специфічного щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції та чуми м’ясоїдних та визначення його імунобіологічних властивостей ... 131
3.6. Хроматографічне фракціонування зразків ТФ, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних ..... 136
3.7. Тестування активності окремих фракцій трансфер-фактора в РІМЛ .. 137
3.8. Діагностика чуми м’ясоїдних .................................................................. 143
3.9. Ефективність клінічного застосування експериментальних зразків ТФ для лікування хворих собак . 145
РОЗДІЛ 4
АНАЛІЗ ТА УЗАГАЛЬНЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕНЬ. 152
ВИСНОВКИ........................................................................................................... 169
ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ .. 172
ДОДАТКИ .. 174
СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ 179

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ ПОЗНАЧЕНЬ, СИМВОЛІВ, ОДИНИЦЬ, СКОРОЧЕНЬ І ТЕРМІНІВ

АГ антиген
БТЛ бласттрансформація лімфоцитів
БУО бляшкоутворююча одиниця
ВІЛ вірус імунодефіциту людини
ВІД вторинні імунодефіцити
ВК вірус кору
ВНА віруснейтралізуючі антитіла
ВРХ велика рогата худоба
ВЧ ВРХ вірус чуми великої рогатої худоби
ВЧМ вірус чуми м'ясоїдних
ВЧС вірус чуми собак
ГЕБ гематоенцефалічний бар’єр
ГКГ головний комплекс гістосумісності
ГСТ гіперчутливість сповільненого типу
ДЕЛ діалізний екстракт лімфоцитів
ДНКІБШМ Державний науково-контрольний інститут біотехнології та штамів мікроорганізмів
ЕМ електронна мікроскопія
ІФА імуноферментний аналіз
ІМЛ індекс міграції лімфоцитів
КЕ курячі ембріони
КК культура клітин
ММ молекулярна маса
МФА метод флуоресціюючих антитіл
ПГ парагрип
ПВІС парвовірусна інфекція собак
РБТЛ реакція бласттрансформації лімфоцитів
РДП реакція дифузійної преципітації
РЗК реакція зв’язування комплементу
РІМЛ реакція інгібіції міграції лімфоцитів
РГА реакція гемаглютинації
РІФ реакція імунофлуоресценції
РН реакція нейтралізації
РНГА реакція непрямої гемаглютинації
РЛА реакція латексаглютинації
РУК розеткоутворюючі клітини
СМФ система мононуклеарних фагоцитів
ТФ трансфер-фактор
ТхТ - хелпери
ТсТ - супресори
ФГА фітогемаглютинін
ФКЕ фібробласти курячого ембріона
ФП фактор переносу
ФНП фактор некрозу пухлин
ХАО хоріоналантоїсна оболонка
ЧМ чума м’ясоїдних
ЧС чума собак
ЦПД цитопатогенна дія
ЦПЕ цитопатичний ефект
ЦПЗ цитопатичні зміни
ЦНС центральна нервова система
ШКТ шлунково-кишковий тракт
ШОЕ швидкість ocідання еритроцитів
CAV-1 вірус інфекційного гепатиту собак
CAV-2 збудник аденовірозу собак

ВСТУП

Актуальність теми. Чума домашніх і диких м'ясоїдних тварин одна з найпоширеніших і небезпечних інфекційних хвороб [6, 17, 34, 36, 38, 39, 132]. Вона завдає значних економічних збитків хутровому звірівництву і собаківництву через високу летальність. Симптоматика її помітно змінюється. Останнім часом чимало типових ознак хвороби не реєструється [132, 135, 161]. Це, очевидно, пов’язано з інтенсивним застосуванням різноманітних профілактичних і терапевтичних засобів, які створюють умови для природної селекції модифікованих штамів вірусу [9, 12, 259]. Використання існуючих вакцинних препаратів для профілактики цього захворювання та відомих засобів терапії хворих на чуму тварин не завжди призводить до очікуваного ефекту. З цього випливає необхідність пошуку більш надійних засобів профілактики та терапії при чумі м'ясоїдних. Важливим завданням сьогодення все ще залишається діагностика, профілактика та терапія чуми м'ясоїдних.
Нині відмічається широке впровадження в практику ветеринарної медицини засобів і методів профілактики та терапії інфекційних захворювань, а також певні досягнення у клінічній імунології. Удосконалення існуючих засобів залишається об’єктом досліджень багатьох наукових центрів світу [5, 13, 22, 29, 42, 260]. Публікації, щодо згаданих проблем, вказують на те, що одним із пріоритетних напрямків цих досліджень є створення препаратів на основі трансфер-фактора [28, 32, 78, 91, 96, 118, 127, 129]. Всебічне вивчення імунобіологічних властивостей цих препаратів спрямоване на подальше широке застосування їх для лікування хворих людей і тварин [32, 127, 130]. Сьогодні людство в арсеналі лікарських засобів має цілий ряд препаратів ТФ. Отримані антигеноспецифічні трансфер-фактори знаходять все більше клінічне використання [32, 234]. Препарати на основі трансфер-фактора мають ряд суттєвих переваг над іншими імуномодуляторами та традиційними засобами, які широко використовуються нині для лікування хворих людей і тварин, зокрема вони не мають у своєму складі трансплантаційних антигенів, безпечні, здатні терміново обумовити «адресну» резистентність організму.
Співробітники кафедри мікробіології, вірусології та біотехнології Національного університету біоресурсів і природокористування України мають певний досвід в отриманні ефективних зразків трансфер-фактора, специфічного, зокрема проти збудника сказу, ротавірусної та коронавірусної інфекцій великої рогатої худоби і деяких інших. З доступних нам літературних джерел ми не знайшли відомостей щодо наявності препаратів на основі згаданого фактора при чумі м'ясоїдних. Тому наші наукові дослідження були спрямовані саме на створення відповідного препарату.
Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертація є частиною комплексних досліджень за темою «Розробити наукові основи отримання препаратів з протективною активністю на основі факторів клітинної кооперації (цитокінів)», номер державної реєстрації 0106U005716.
Мета і завдання дослідження. Мета роботи отримати трансфер-фактор активного імунітету проти чуми м’ясоїдних та дослідити його імуномодулюючу активність.
Відповідно до мети роботи були поставлені такі наукові завдання:
оптимізувати параметри культивування вірусу чуми м’ясоїдних у культурі клітин та в курячих ембріонах для отримання препаративної маси антигену;
розробити метод сенсибілізації свиней-донорів трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних;
отримати дослідні зразки трансфер-фактора активного імунітету, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних, та визначити їх імунобіологічну активність;
вивчити імунобіологічну активність окремих фракцій трансфер-фактора, отриманих методом гельпроникаючої хроматографії;
здійснити перенесення гіперчутливості сповільненого типу до збудника чуми м’ясоїдних від сенсибілізованих донорів (свиней) до інтактних ксеногенних реципієнтів (білих мишей та курячих ембріонів) за допомогою трансфер-фактора, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних;
визначити вплив ТФ на деякі біохімічні та гематологічні показники крові собак;
дослідити на курячих ембріонах протективну активність трансфер-фактора, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних;
розробити методику отримання комбінованих зразків трансфер-факторів, специфічних щодо аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції, лептоспірозу та чуми собак та дослідити їх терапевтичну ефективність в умовах клінік міст Києва та Чернігова.
Об’єкт дослідження. Трансфер-фактор клітинного (активного) імунітету при чумі м’ясоїдних.
Предмет дослідження. Методика отримання, імуномодулюючі властивості та терапевтична ефективність дослідних зразків трансфер-фактора.
Методи дослідження. Поставлені в роботі наукові завдання вирішували експериментально з використанням вірусологічних (культивування вірусу чуми м’ясоїдних в КК та КЕ), імунологічних (реакціях гіперчутливості сповільненого типу (ГСТ), бласттрансформації лімфоцитів (РБТЛ) та (РІМЛ) інгібіції міграції лейкоцитів), біохімічних (дослідження сироватки крові тварин), гематологічних (визначення популяційного та субпопуляційного складу лімфоцитів), клінічних (обстеження хворих тварин) та статистичних методів досліджень.
Наукова новизна одержаних результатів. Вперше розроблено схему сенсибілізації свиней-донорів для отримання трансфер-фактора, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних, яка включала імунізацію тварин антигеном ЧМ у поєднанні з ад’ювантом ISA25; отримано зразки трансфер-фактора активного імунітету щодо вірусу чуми м’ясоїдних, визначено та охарактеризовано його високу імунобіологічну активність в реакціях ГСТ, РБТЛ та РІМЛ; оптимізовано методику культивування вірусу чуми м’ясоїдних (штам 668КФ) в культурі клітин фібробластів курячих ембріонів та в курячих ембріонах, що дозволило отримати в умовах лабораторії вірус із титром біологічної активності 106,61ТЦД50/см3; розроблено раціональний метод визначення активності трансфер-фактора, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних, який дозволяє опосередковано визначати біологічну активність отриманих зразків ТФ із використанням КЕ; встановлено здатність індукції активного клітинного імунітету до вірусу чуми м’ясоїдних у ксеногенних реципієнтів, що підтверджують результати ГСТ, РБТЛ та РІМЛ; доведено можливість комбінованого отримання ефективних зразків трансфер-факторів, розроблено «Спосіб отримання трансфер-фактора «Гексаканіс-ТФ», специфічного щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції та чуми м’ясоїдних», на що отримано патент UA 36156, А61К 39/00.
Практичне значення одержаних результатів. Результати досліджень обґрунтовують ефективність використання трансфер-фактора, специфічного щодо збудника чуми м’ясоїдних, у практиці ветеринарної медицини. Експериментальні зразки ТФ, отримані із лімфоїдних органів імунізованих донорів, виявили також терапевтичний ефект при клінічному застосуванні хворим на чуму тваринам (собакам).
Результати дисертаційного дослідження можуть бути впроваджені як елементи біотехнології промислового виготовлення препарату на основі трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних та інших актуальних інфекційних хвороб, а також використовуватись в навчальному процесі на кафедрі мікробіології, вірусології та біотехнології НУБіПУ. Результати науково-дослідної роботи увійшли до методичних рекомендацій та вказівок для спеціалістів ветеринарної медицини, агропромислових підприємств, працівників і студентів аграрних навчальних закладів.
Особистий внесок здобувача полягає у самостійному проведенні теоретичних та практичних експериментальних досліджень, аналізі їх результатів та підготовці матеріалів до опублікування.
Апробація результатів дисертації. Основні результати досліджень доповідалися на чотирьох наукових конференціях професорсько-викладацького складу та аспірантів Національного аграрного університету в 20052008 рр. та Міжнародному конгресі спеціалістів ветеринарної медицини, присвяченому 110- річчю НАУ.
Публікації. За матеріалами досліджень опубліковано 4 статті у фахових виданнях та 8 тез доповідей, в яких викладені основні положення дисертаційної роботи.

Список литературы

ВИСНОВКИ

1. У дисертації наведене теоретичне узагальнення і нове вирішення наукової задачі, що виявляється в експериментальному обґрунтуванні отримання біологічно активних зразків трансфер-фактора, специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних та доведено можливість отримання його у комбінації з іншими ТФ, специфічними щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту та парвовірусної інфекції собак; підтверджено їх виразний вплив на клітинний імунітет та встановлено протективну дію трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних в умовах експериментальної інфекції на курячих ембріонах.
2. За допомогою експериментальних зразків трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних та комбінованого зразка «Гексаканіс ТФ», здійснено перенесення активного клітинного імунітету до збудників чуми і інших патогенів від свиней донорів трансфер-фактора ксеногенним тваринам (білим мишам).
3. Найбільш біологічно активними виявились експериментальні зразки трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних, отримані із лімфоїдних органів свиней-донорів при одноразовому введенні їм антигену чуми м’ясоїдних (вірус шт. 668КФ + ад’ювант ISA25 у співвідношенні 1:1) порівняно з 3-кратним введенням відповідного антигену.
4. Зразки трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних, інтенсивно стимулюють бласттрансформаційну активність лімфоцитів у присутності специфічного антигену та мітогену ФГА (Р < 0,001).
5. Оптимізовано елементи методики приготування первинно-трипсинізованої культури фібробластів КЕ (ФКЕ) та культивування вірусу чуми м’ясоїдних (шт. 668КФ та шт. ТС2), які дозволяють отримувати в умовах лабораторії вірус із титром біологічної активності 106,61 ТЦД 50/см3 та 10 5,19 ТЦД 50/см3 відповідно .
6. Трансфер-фактор, специфічний щодо вірусу чуми м’ясоїдних, призводить у собак до вірогідного збільшення популяції циркулюючих у крові лімфоцитів і обумовлює виразну зміну субпопуляційного складу Т-клітин, що виражається у знижені числа теофілінчутливих лімфоцитів і підвищенні кількості теофілінрезистентних клітин. Після одноразового введення ТФ показник співвідношення Тх/Тс у дослідних тварин досягав максимальних значень через тиждень і становив 3,62, а ще через сім діб після повторного введення препарату зростав до 3,74.
7. Зразки трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних, практично не впливали на біохімічні показники крові собак: вміст загального білка, креатиніну та активність ферментів аспартатамінотрансферази і аланінамінотрансферази. Введення препарату ТФ у рекомендованих дозах не спричиняє негативного впливу на стан та функціональну активність життєво важливих органів собак: печінки та нирок.
8. Застосування ТФ, специфічного щодо збудника ЧМ у собак, із лікувально-профілактичною метою є нешкідливим і безпечним, про що свідчать результати гематологічних досліджень.
9. Зразки фактора перенесення активного імунітету проти вірусу чуми м’ясоїдних в умовах експериментальної інфекції на КЕ, обумовили виразний протективний ефект.
10. Запропонований метод для визначення активності ТФ, специфічного щодо вірусу чуми м’ясоїдних, який базується на експериментальній інфекції курячих ембріонів, показав високий ефект і відкриває перспективи для поліпшення стандартизації відповідних препаратів за їх активністю.
11. За допомогою колоночної хроматографії отримано по 7 фракцій зразків ТФ (ГексаканісТФ та ТФПЧМ1), з яких активними і антигенспецифічними фракціями виявилися: зразки № 4, 5, 3 і 6 (ТФПЧМ1) та зразки № 6, 4, 5 і 7 (ГексаканісТФ); в РІМЛ індекс міграції їх становив 41 %, 44, 55, 58 % та 43,6 %, 49,3, 57,7, 63 % відповідно. Антигенспецифічні фракції препаратів ТФ мали ММ у діапазоні від 2500 до 4000Д.
12. У результаті експериментальних випробувань ефективності лікування ТФ найбільш розповсюджених інфекційних захворювань собак із застосуванням зразків фактора перенесення (ГексаканісТФ та ТФПЧМ1) було встановлено значне прискорення термінів одужання хворих собак, у середньому до двох діб порівняно з контрольними групами. Застосування зразків ТФ при тяжких нервових формах чуми м’ясоїдних виявилось неефективним.
13. Терапія із застосуванням трансфер-фактора істотно поліпшує імунний статус у собак хворих на чуму, лептоспіроз, аденовіроз, інфекційний гепатит, парвовірусну інфекцію.

ПРОПОЗИЦІЇ ВИРОБНИЦТВУ

Для проведення науково-дослідної роботи з проблем діагностики чуми м’ясоїдних, вивчення клітинного імунітету тварин та створення препаратів на основі фактора перенесення запропоновано:
1. «Методичні рекомендації з оцінки та корекції клітинного імунітету у тварин», затверджені Науково-методичною радою Державного Департаменту ветеринарної медицини Мінагрополітики України 20.12.2006р. (протокол №2).
2. Методичні вказівки для спеціалістів ветеринарної медицини, співробітників науково-дослідних і навчальних закладів, аспірантів і студентів факультету ветеринарної медицини «Оцінка та корекція клітинного імунітету у тварин», Видавничий центр НАУ, 2005р.
3. Методичні вказівки для студентів і магістрантів факультету ветеринарної медицини та слухачів підвищення кваліфікації лікарів ветеринарної медицини вірусологів «Лабораторна діагностика чуми м’ясоїдних». Київ, Видавничий центр НАУ, 2007р.
4. Спосіб отримання трансфер-фактора ГексаканісТФ”, специфічного щодо збудників лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції та чуми м’ясоїдних (патент № 36156, який зареєстровано в Державному реєстрі патентів України на корисні моделі 10.10.2008 р.).
5. Для промислового виготовлення біологічно активних зразків трансфер-фактора, специфічного щодо чуми м’ясоїдних та полівалентного препарату «ГексаканісТФ» проти збудників чуми, лептоспірозу, аденовірозу, інфекційного гепатиту, парвовірусної інфекції собак при імунізації свиней-донорів необхідно використовувати антигени вірус шт. 668КФ + ад’ювант ISA25 у співвідношенні 1:1 та вакцину Гексаканівак фірми «Ветзвероцентр» (Росія) за ТУ 9384-057-0494185-94, відповідно.
6. За умови позитивної експертизи ТУ на препарат «ГексаканісТФ», лікарям клінік ветеринарної медицини пропонуємо використовувати його для терапії тварин при чумі, лептоспірозі, аденовірозі, інфекційному гепатиті, парвовірусній інфекції собак.

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ
1. Авербах М. М. Изучение in vitro действия на макрофаги медиаторов, синтезируемых сен­сибилизированными лимфоцитами / М. М. Авербах, Э. Л. Блох, Н. С. Колодяжная [и др.] // Пат. физиол. 1973. № 3, С. 3639.
2. Адаптация вакцинного вируса чумы плотоядних к некоторым культурам клеток и испытание иммуногенности изготовленного вакцин­ного препарата "Вакчум" в контролированных опытах на норках и песцах / М.П.Чумаков, В.П.Грачев, Ю.А.Свежинина [и др.] // Материалы науч.-произв. конф. по профилактике заболеваний пушных зверей. Омск, 1972. С. 6368.
3. Бабкін М.В. Вивчення чутливості перещеплюваних культур до вірусу чуми м'ясоїдних / М.В. Бабкін // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 3-ї Міжнар. наук.- практ. конф. К., 1998. С. 1820.
4. Бабкин М.В. Использование микрометода нейтрализации для титро­вания антител к вирусу чумы плотоядных / М.В. Бабкин // Пробл. вет. обслуговування дрі­бних домашніх тварин: 3б. матеріалів. 4-ї Міжнар. наук.-практ. конф. К., 1999. С. 100101.
5. Бастен А. Фактор переноса. Клиническое использование и экспериментальные данные / Иммунологическая инженерия / А. Бастен, С. Крофт ; Под. ред. Д. Джирша. М.: Медицина, 1982. 214 c.
6. Белов А.Д. Болезни собак /А.Д. Белов, Е.П. Данилов/ ─ М.: Колос, 1995. ─ С. 259273.
7. Бергман Ж. Вакцини фірми «Інтервет» та сучасні дані про вакци­націю собак проти корона-, парвовірусного ентеритів та чуми м'ясоїдних / Ж. Бергман // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 2-ї Міжнар. наук.-практ. конф. К., 1997. C. 1416.
8. Бергман Ж. Переваги вакцинного штаму чу­ми м'ясоїдних вакцин фірми "Інтервет". Експеримент. дані / Ж. Бергман, Р. Навратіл, Г. Роерінг // Ветеринарна медицина України. 1999. №1. С.2627.
9. Бергман Ж. Переваги вакцинного штаму чу­ми м'ясоїдних вакцин фірми "Інтервет". Експеримент, дані / Ж. Бергман, Р. Навратіл, Г. Роерінг // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 3-ї Міжнар. наук.-практ. конф.К., 1998. С. 811.
10. Бережной А.Е. Сравнительная эффективность иден­тичных штаммов в составе вакцин различной валентности / А.Е. Бережной, А.А. Сидорчук // Матеріали IX Междунар. вет. конгресс. Москва, 2001. С. 9899.
11. Біологічні властивості вірусу чуми м'ясоїдних у вакцині Nobi-vac Puppi DP (Нідерланди) / М.В. Косенко, І.К. Авдосьєва, В.В. Регенчук [та ін. ] // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 2-ї Міжнар. наук.-практ. конф. К., 1997. С. 1213.
12. Божко В.Б. Вакцинные препараты для профилактики инфекционных заболеваний собак / В.Б. Божко, Л.Н. Роцько, Ю.А. Собко // Тезисы докл. Междунар. конф.УНАУ. К., 1996. С. 60.
13. Бокарев А.В. Критический анализ эффективности применения стимуляторов иммунитета при нервной форме чумы собак / А.В.Бокарев, А.В.Переверзева // Вет. Практика. 2000. № 3. С. 712.
14. Болезни пушных зверей / Е.П. Данилов, А.И. Майоров, В.А. Чижов [и др.]; Под ред. Е.П. Данилова.-3-е изд., перераб. и доп. М.: Колос, 1984. 336 с.
15. Болезни пушных зверей / С.И. Братюха, А.Ф. Евтушенко, А.А. Шев­цов, В.И. Береза.2-е изд., перераб. и доп. К.: Урожай. 1987. 182 с.
16. Болезни собак / Сост. В.А. Лукьяновский. М.: Росагропромиздат. 1988. 382 с.
17. Болезни собак / В.А.Лукьяновский, Ю.Н.Филиппов, Е.П.Копенкин и др. М.: Агропромиздат. 1990. 368 с.
18. Болезни собак: Справочник / А.Д. Белов, Е.П. Данилов, И.И. Дукур [и др.]. М.: Агропромиздат, 1990. 368 с.
19. Болезни собак и кошек: Справочное пособие / С.И. Братюха, И.С. Нагорный, И.П. Ревенко [и др.]. 3-е изд., перераб. и доп. К.: Вища шк., 1989. 255 с.
20. Борисевич В.Б. Заразные и незаразные болезни со­бак / В.Б. Борисевич, Б.В. Борисевич // Кировоград: гос. изд-во, 1997. 436 с.
21. Васильев А.В. РНГА для выявле­ния антител к вирусу чумы плотоядных / А.В. Васильев, В.М. Колышкин, А.Л. Елаков // Ветеринария. 1996. №11. С.2023.
22. Вершигора А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора /. К.: Вища школа, 1990. 736 с.
23. Вірус чуми м'ясоїдних для приготування лікувальних препаратів / Б. Ярчук, Л. Корнієнко, Л. Корнієнко [та ін.] // Тваринництво України. 1997. № 11. С.17.
24. Вивчення лікувального ефекту гіперімунної сироватки проти чуми м'ясоїдних / М.В. Косенко, І.К. Авдосьєва, В.В. Регенчук [та ін.] // Збірник праць ДНДКІВП і КД. Львів, 1996. С. 4748.
25. Використання різних донорів і ад'ювантів для отримання гіперімунних сироваток проти вірусу чуми м'ясоїдних / В.В.Власенко, Б.М.Ярчук, Л.Є.Корнієнко, Л.М.Корнієнко // Вісн. Білоцерків. держ. аграр. ун-ту. Біла Церква, 1996. Вип.1. С. 810.
26. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина // М.: ВНИТИБП, 1998. 928 с.
27. Вирусовыделение при экспериментальной чуме собак / И.В. Ножна, А.Д. Середа, М.А. Дымин [и др.] // Ветеринария. 1998. № 11. С. 2426.
28. Возианов А.Ф. Цитокины. Биологичес­кие и противоопухолевые свойства / А.Ф. Возианов, А.К. Бутенко, К.П. Зак /. Киев: Наук. Думка, 1999. 313 с.
29. Возианов А.Ф. Комбинированное лечение и иммунореабилитация больных с прогрессирующей почечно-клеточной карциномой (ПКК) при применении цитокинов и 5-фторурацила (5-ФУ) / А.Ф. Возианов, В.М. Бабич, К.П. Зак // Int. J. Immunoreabilit. 1997. № 4. С. 153154.
30. Возианов А.Ф.. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства /А.Ф. Возианов, А.К. Бутенко, К.П. Зак /. К.: Наукова думка, 1998. 320 с.
31. Войтенок Н.И. Физико-химические свойства митогенного фактора лимфоцитов человека, индуцированного фитогемагглютинином / Н.И. Войтенок, Н.В. Варивоцкая, П.П. Мурзенок, Н.Д. Потемкина // Бюлл. экспер. биол. 1976. № 8. С. 963965.
32. Воробьев А.А. Принципы классификации и стратегия применения иммуномодуляторов в медицине / А.А. Воробьев // ЖМЭИ. 2002. N4. С.93 98.
33. Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии / А.М. Горячковский / Одесса: ОКФА, 1994. 416 с.
34. Груздев И.K. Чума плотоядных / И.K. Груздев, А.В. Селиванов/ М.: Агропромиздат, 1985. 80 с.
35. Гуславский И.И. Сравнительная еффективность вак­цин "КФ-668" и "Вакчум" в специфической профилактике чумы собак / И.И. Гуславский, С.И. Снигирев // Ди­агностика, лечение и профилактика инф. болезней животных Казахстана. Алма-Ата, 1989. С. 6468.
36. Данилов Е.П. Болезни пушных зверей / Е.П. Данилов / М.: Колос, 1984. 335 с.
37. Деякі аспекти профілактики чуми м'ясоїдних у собак / Л. Корнієнко, Л. Корнієнко, В. Власенко [та ін.] // Ветеринарна медицина України. 2000. № 10. С. 2021.
38. Диагностика вирусных болезней животных: Справочник / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина /. М.: Агропромиздат, 1991. 528 с.
39. Домский И.А. Чума плотоядных у пушных зверей / И.А. Домский // Кролиководство и звероводство. 2000. № 3. С. 2627.
40. Домский И.А., Малахов Ю.А, Уласов В.И. Новая ассоциирования вакцина для пушных зверей / И.А.Домский, Ю.А. Малахов, В.И.Уласов // Кролиководство и звероводство. 1999. № 4. С. 24.
41. Дубова О.А. Рання діагностика чуми м'ясоїдних / О.А. Дубова, В.Є. Кирюшин // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 4-ї Між­нар. наук.-практ. конф. К., 1999. С. 4951.
42. Ежов Б.В. "О Трансфер Факторах" 2008. Режим доступу до джерела: http://www.immunity-4life.com/.
43. Експериментальна інфекція у цуценят, заражених вірусом чуми м'ясоїдних / В.В.Власенко, Л.М.Корнієнко, Л.Є.Корнієнко, Б.М.Ярчук // Розвиток ветеринарної науки в Україні: здобутки та проблеми: 3б. матеріалів Міжнар. наук.-практ. конф. Харків, 1997. С. 166.
44. Ершов Ф.И, Наровлянский А.Н., Мезенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях / Ф.И. Ершов, А.Н. Наровлянский, М.В. Мезенцева // Цитокины и воспаление. 2004. Т.3. N1. С. 36.
45. Ефективність вірус-вакцини "Nobi-vac Puppi ОР"(Нідерланди) для первинної вакцинації проти чуми / М.В. Косенко, І.К. Авдосьева, І.Л. Мельничук [та ін.] // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 4-ї Міжнар. наук.-нракт. конф. К., 1999. С. 9193.
46. Ефективність гіперімунної сироватки при чумі м'ясоїдних у собак / В. Головаха, Л. Корнієнко, О. Дикий [та ін.] // Ветеринарна медицина Украї­ни. 1999. № 3. С. 18.
47. Застосування ентеросорбентів у схемах комплексної терапії собак, хворих на гастроентерити / А.М.Головко, В.О.Ушкалов, М.С.Романько, В.М. Баранов // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: 3б. матеріалів 3-ї Міжнар. наук.-практ. конф. К., 1998. С. 1518.
48. Застосування регідратаційної терапії при чумі та парвовірусному ентериті у собак / В.Т. Головаха, Л.Є. Корнієнко, О.А. Дикий [та ін.] // Пробл. вет. обслуговування дрібних домашніх тварин: Зб. матеріалів 4-ї Міжнар. наук.-практ. конф. К., 1999. С. 6062.
49. Зелютков Ю.Г. Лечение собак с ки­шечной формой чумы / Ю.Г. Зелютков, В.В. Петров, А.В. Михайлова // Матеріали IX Междунар. вет. конгресса. М., 2001. С. 56.
50. Иммунитет и защита при чуме собак / А.Д. Середа, К.Е. Гаврилов, В.В. Макаров, В.И. Уласов // Сельскохозяйственная биология. 1998. № 6. С. 96107.
51. Иммуногенные и реактогенные свойства культуральной вирусвакцины против чумы плотоядных / В.Я. Савукова, Е.М. Хрипунов, Г.М. Карпов и др. // Ветеринария. 1999. № 9. С. 2327.
52. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов чумы плотоядных и сальмонелл у пушных зверей / В.И. Уласов, Ю.А. Малахов, И.А. Домский [и др.] // Всерос. гос. НИИ контроля, стандартиз. и сертиф. вет. препаратов: Сб. науч. тр. ВГНКИ. 1996. Т. 59. С. 4549.
53. Иммуноферментный анализ (ИФА), как метод для диагностики чу­мы плотоядных / В.Н. Сазонкин, В.Г. Чулкова, A.M. Шестопалов [и др.] // Со­стояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России: Сб. материалов научной сессии РАСХН. М., 1999. С. 298299.
54. Иммуноферментный метод определения антител к вирусу чумы плотоядных / В.В. Цыбезов, Т.А. Аристова И.П. Феоктистова [и др.] // Материалы ІХ Междунар. вет. конгресса. М., 2001. С. 4142.
55. Імунітет, імунопатологія при чумі м'ясоїдних і корекція цих проце­сів з застосуванням гіперімунних сироваток / Л.Є. Корнієнко, Л.М. Корнієнко, Ю.М. Тирсіна, В.В. Власенко // Ветеринарна медицина: Міжвідомчий темат. зб. 1999. Вип. 76. С. 912.
56. Иммунный ответ у зверей при вакцинации против чумы плотоядных / В.И. Уласов, А.Л. Елаков, В.М. Колышкин // Кролиководство и звероводство. 1998. № 2. С. 24.
57. Изменение показателей крови у норок при экспериментальной чуме плотоядных / В.Ф. Кузнецов, И.А. Домский, О.М. Бухарин [и др.] // Ветеринария. 1997. № 1. С. 2426.
58. Изучение антигенной активности живой и инактивированной вакцин против чумы плотоядных у щенков собак / С.К. Старов, Г.О. Утмелидзе, A.M. Евсеев [и др.] // Проблемы инфекционной патологии сельскохозяйственных животных : Сб. науч. работ. Владимир, 1997. С. 171.
59. Кашкин Н.П. Фактор переноса гиперчувствительности замедленного типа (трансфер-фактор) и его клиническое применение / Н.П. Кашкин, В.П. Кубась, С.М. Лихолето