Молекулярная детекция представителей зипертермофильнык аркей и характеристика аркейной термостаБильной ДНК-полимеразы

Короткий опис

СодержаниеОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ 3I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 71. Гипертермофильные микроорганизмы 71.1. Места обитания гипертермофилов 81.2. Физиологические свойства гипертермофилов 101.3. Филогения и таксономия гипертермофилов 122. Род Thermococcus 142.1. Таксономия и места обитания 142.2. Генотипическое разнообразие 202.3. Фенотипические свойства 213. Возможности промышленного использования ферментов гипертермофилов 26 3.1 Термостабильные ДНК-полимеразы 284. Молекулярные методы в микробной экологии 304.1. Роль молекулы 16S рРНК в современной таксономии и филогении 304.2. ПЦР-клонирование-секвенирование - основная магистраль молекулярного анализа микробных сообществ 324.2.1. ПЦР со специфичными праймерами 334.3. Электрофорез в денатурирующем градиентном геле 344.4. In situ гибридизация 344.5. Недостатки методов микробной молекулярной экологии 35 4.6 Сочетание методов классической и молекулярной микробной экологии 37РЕЗЮМЕ 38И. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 40III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 521. ПЦР-детекция гипертермофильных архей семейства Thermococcaceae 52 1.1 .Специфичность праймеров ТсРс 173F-TcPc589R 521.2. Чувствительность метода 571.3. Идентификация чистых культур микроорганизмов 591.4. Детекция представителей Thermococcaceae в природных образцах и накопительных культурах 612. ПЦР-детекция архей в гипертермофильной накопительной культуре, полученной из метантенка, работающего в термофильном режиме 652.1. Получение культуры гипертермофильных микроорганизмов 662.2. ПЦР-анализ накопительных культур 662.3. Амплификация и сиквснс архейных генов 16S рРНК 692.4. Физиологические характеристики роста КР4 703. Выделение и характеристика архейной термостабильной ДНК-полимеразы 723.1. Скрининг коллекции гипертермофильных архей на наличие термостабильных ДНК-полимераз 723.2. In situ характеристика отобранных архейных термостабильных полимераз 743.3. Выделение и очистка ДНК-полимеразы из штаммаThermococcus sp Shi AM 763.4. Молекулярная масса и термостабильность очищенной ДНК-полимеразы 763.5. Способность к ПЦР-амплификации ДНК 763.6. Характеристика 3'-5'экзонуклеазной активности 803.7. Определение частоты ошибок выделенной ДНК-полимеразы 804. Клонирование гена ДНК-полимеразы из штамма Thermococcus sp. Shi AM 845. Экспрессия гена ДНК-полимеразы из Thermococcus sp. Shi AM 88 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 94 ВЫВОДЫ 96 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 97