Фалеева Татьяна Георгиевна. Молекулярно-генетическая идентификация потожировых следов в отпечатках пальцев на коже человека

Короткий опис

Фалеева Татьяна Георгиевна. Молекулярно-генетическая идентификация потожировых следов в отпечатках пальцев на коже человека;[Место защиты: ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации], 2021

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ
УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«СЕВЕРО-ЗАПАДНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ
УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.И. МЕЧНИКОВА»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
На правах рукописи
ФАЛЕЕВА
Татьяна Георгиевна
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОТОЖИРОВЫХ
СЛЕДОВ В ОТПЕЧАТКАХ ПАЛЬЦЕВ НА КОЖЕ ЧЕЛОВЕКА
3.3.5. Судебная медицина
1.5.7. Генетика
ДИССЕРТАЦИЯ
на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор И.Н. ИВАНОВ; доктор биологических наук, И.В. КОРНИЕНКО
Санкт-Петербург - 2021
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1 ВОЗМОЖНОСТИ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПОТОЖИРОВЫХ СЛЕДОВ ЧЕЛОВЕКА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 13
1.1. Объекты ДНК-идентификации личности 13
1.2. Морфология кожи, физиология потоотделения и источники ДНК в
потожировом веществе человека 15
1.3. Методы обнаружения следов рук и их влияние на эффективность 23
ДНК-идентификации 23
1.4. Методы сбора и хранения ДНК-содержащих биологических следов 37
1.5. Методы выделение ДНК из потожировых следов 42
1.6. Генотипирование объектов, содержащих малое количество ДНК, и
интерпретация результатов 45
Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 50
2.1. Материалы исследования 50
2.2. Методы исследования 54
2.2.1. Методы обнаружение потожировых следов 54
2.2.1.1. Использование дактилоскопических порошков для обнаружения
потожировых следов 54
2.2.1.2. Использование нингидрина для обнаружения потожировых следов 56
2.2.1.3. Использование цианоакрилата для обнаружения потожировых следов .... 56
2.2.1.4. Использование паров йода для обнаружения потожировых следов 59
2.2.2. Методы сбора потожировых следов 61
2.2.2.1. Использование дактилоскопических пленок и клейких 61
лент для сбора потожировых следов 61
2.2.2.2. Использование метода смыва потожировых следов на бумажный и
хлопчатобумажный носитель 64
2.2.2.3. Использование ДНК-стабилизирующего раствора для сбора, хранения и
пробоподготовки препаратов ДНК из потожирового вещества 65
2.2.2.4. Использование различных сред для установления наличия пота и
определения его групповой принадлежности 67
2.2.3. Методы выделения ДНК 70
2.2.3.1. Выделение ДНК методом органической экстракции 70
2.2.3.2. Выделение ДНК методом нуклеосорбции 70
2.2.3.3. Выделение ДНК при помощи ионообменной смолы Chelex 100 71
2.2.3.4. Сравнение эффективности методов выделения ДНК 71
из объектов с малым её содержанием 71
2.2.4. Количественная оценка ДНК при помощи ПЦР «в реальном времени» 72
2.2.5. Качественная оценка выделенной ДНК и ампликонов при помощи
электрофореза в агарозном геле 73
2.2.6. Генотипирование ДНК 74
2.2.7. Характеристика использованных статистических методов 75
Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 78
3.1. Исследование архивного материала 78
3.2. Особенности влияния средств обнаружения потожировых следов на ПЦР.... 82
3.2.1. Исследование влияния дактилоскопических порошков на ПЦР 82
3.2.2. Исследование влияния нингидрина на ПЦР 85
3.2.3. Исследование влияния цианоакрилата на ПЦР 88
3.2.4. Исследование влияния паров йода на ПЦР 94
3.3. Особенности влияния методов фиксации и сбора 97
потожировых следов на ПЦР 97
3.3.1. Исследование влияния дактилоскопических пленок
и клейких лент на ПЦР 97
3.3.2. Исследование влияния бумажного и хлопчатобумажного
носителя на ПЦР 99
3.4. Исследование стабильности ДНК в смывах при хранении 102
3.5. Исследование жидкостей, применяемых для установления пота, его групповой принадлежности, и оценка их влияния на сохранность ДНК и ПЦР . 108
3.6. Сравнительная оценка эффективности методов выделения ДНК из объектов с
малым её содержанием 114
3.7. Исследование количества ДНК в потожировом веществе на кожных покровах
человека 115
3.8. ДНК-идентификация личности по потожировому веществу, оставленному
человеком на искусственной коже 120
3.9. ДНК-идентификация личности по потожировому веществу, оставленному
человеком на кожных покровах живых лиц 129
3.10. ДНК-идентификация личности по потожировому веществу, оставленному
человеком на кожных покровах трупов 138
3.11. Применение разработанной методики в судебно-медицинской экспертной
практике 147
Глава 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ 149
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 170
ВЫВОДЫ 173
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 175
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ 176
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 178
ПРИЛОЖЕНИЕ 208

Список літератури

ВЫВОДЫ
1. Комплексное исследование следов рук может включать одновременно их дактилоскопию, судебно-биологическую и молекулярно-генетическую экспертизу, требует применения материалов, которые не ингибируют ПЦР. Для выявления потожировых следов целесообразно использовать черные магнитные нелюминесцентные дактилоскопические порошки, мелкодисперсный реагент SPR и окуривание парами йода, а для фиксации контактных следов - дактилоскопические пленки и клейкие ленты.
2. Сбор и пробоподготовка потожировых следов путем смыва с использованием разработанного ДНК-стабилизирующего раствора, включающего мягкие детергенты и активаторы ПЦР, позволяют получить больше генетического материала по сравнению с использованием стандартных растворителей (деионизованной воды и 0,9% раствора хлорида натрия), обеспечивать сохранность ДНК в течение месяца в смывах без существенной ее деградации.
3. Значимых различий в концентрации ДНК на подушечках каждого пальца в отдельности как у мужчин, так и у женщин не установлено (р > 0,05). Вместе с тем количество ядерной ДНК на подушечках пальцев женщин выше, чем у мужчин (р < 0,05). Содержание ДНК на ладонях, предплечьях и шее отдельно у мужчин и женщин, а также между ними различий не имело (р > 0,05). Не обнаружены достоверные отличия в количестве генетического материала на всех исследованных участках тела в зависимости от доминирующей руки (р > 0,05) отдельно у лиц обоего пола.
4. В следах подушечек пальцев рук мужчин на искусственной коже выявлено в 2,4 раза больше ДНК, по сравнению со следами женщин (р < 0,0005). После контакта донора мужского пола с реципиентом вероятность обнаружения оставленного генетического профиля на коже живых лиц по аутосомным микросателлитным локусам выше в 3,2 раза (р < 0,05), а по микросателлитным локусам Y-хромосомы - в 5,9 раз (р < 0,05), по сравнению с кожей трупов.
При молекулярно-генетической идентификации потожировых следов на кожных покровах человека необходимо учитывать возможные артефакты, такие как отсутствие продукта амплификации, вставки и выпадения аллелей, вследствие малых концентраций ДНК. Для установления факта присутствия постороннего генетического материала в потожировом веществе на кожных покровах человека необходимо, прежде всего, оценить результаты типирования микросателлитных локусов аутосомной ДНК размером не более 250 п.н., а при исследовании Y-хромосомы - микросателлитных локусов размером не более 300 п.н