Хасаева, Марина Александровна. Влияние окислительного стресса на состояние мембран клеток крови и эндотелия сосудов при желчном перитоните перитоните (экспериментальное исследование)

Короткий опис

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
04201251901 На пРавахрукописи

ХАСАЕВА Марина Александровна
ВЛИЯНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА НА СОСТОЯНИЕ МЕМБРАН КЛЕТОК КРОВИ И ЭНДОТЕЛИЙ СОСУДОВ ПРИ ЖЕЛЧНОМ ПЕРИТОНИТЕ
(экспериментальное исследование)
14.01.17- хирургия
Диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук
Научный руководитель:
Заслуженный изобретатель РФ, лауреат премии Правительства РФ и РАМН, доктор медицинских наук профессор Петросян Эдуард Арутюнович.
Научный консультант: доктор медицинских наук Аксенов Игорь Васильевич.
Краснодар - 2011
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
AJIT - аланинаминотрансаминаз ACT - аспартатаминотрансаминаза АФК - активные формы кислорода
ВНСММ - вещества низкой и средней молекулярной массы ГК - главная компонента
ДВС - диссеминированный внутрисосудистый синдром свертывания
ДК - диеновые конъюгаты
ЖКБ - желчнокаменная болезнь
ЖП - жёлчный перитонит
КФК - креатинфосфокиназа
ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации
МДА - малоновый диальдегид
ОД - объемная доля
ОС - окислительный стресс
ПОЛ - перекисное окисление липидов
СР - средний размер
СРО - свободнорадикальное окисление
ССВР — синдром системной воспалительной реакции
ССЭ - сорбционная способность эритроцитов
СТЗ - сосудисто-тромбоцитарное звено
ЩФ - щелочная фосфатаза
ЭИ - эндогенная интоксикация
N0 - оксид азота
SH-группы - тиоловые группы

з
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр.
J СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ 2
I ВВЕДЕНИЕ 5
f ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ВЗГЛЯДЫ НА ЭТИОЛОГИЮ И 10
ПАТОГЕНЕЗ ЖЕЛЧНОГО ПЕРИТОНИТА (обзор литературы)
. 1.1. Медико-социальная проблема желчного перитонита 10
I' 1.2. Современные представления об этиологии и патогенезе 12
£ желчного перитонита
/. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 33
■' 2.1. Материал исследования З 3
2.1.1. Характеристика экспериментальных исследований на 33 животных
2.1.2. Создание модели 24-часового экспериментального 33 желчного перитонита
і 2.2. Методы исследований 35
7, 2.2.1. Гематологические методы исследований 35
і/ 2.2.2. Физико-химические методы исследования 36
з, 2.2.3. Биохимические методы исследования 36
2.2.4. Морфологические методы исследований 39
І- 2.2.5. Гистохимические методы исследований 39
Г) 2.2.6. Морфометрические методы исследования 40
jf- 2.2.7. Приборы, аппараты и вспомогательное оборудование 40
I’1 для проведения биохимических исследований, условия проведения
'• анализов
2.2.8. Контроль качества исследований 41
2.2.9. Статистические методы исследования 41
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ РАЗВИТИЯ 43
СОСТОЯНИЯ СИСТЕМНОЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ
ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЖЕЛЧНОМ ПЕРИТОНИТЕ
3.1. Клиническая и макроскопическая картина животных при 43
;■ экспериментальном желчном перитоните
II 3.2. Состояние процессов свободнорадикального окисления 44
*2 • при экспериментальном желчном перитоните
у 3.3. Структурно-функциональное состояние клеточных 51
| мембран эритроцитов при экспериментальном желчном перитоните
3.4. Состояние внутриклеточных ферментов крови при 54
| ' экспериментальном желчном перитоните
3.5. Состояние метаболизма оксида азота (нитраты/нитриты) 56 при экспериментальном желчном перитоните
j-1 3.6. Состояние сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза 59
It. при экспериментальном желчном перитоните
*" 3.7. Построение интегральных критериев диагностики 64

экспериментального желчного перитонита
ГЛАВА 4. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И МОРФО­МЕТРИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПОЧКАХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЖЕЛЧНОМ ПЕРИТОНИТЕ
4.1. Оценка морфофункционального состояния структуры почки при экспериментальном желчном перитоните
4.2. Оценка морфометрических изменений в почках при экспериментальном желчном перитоните
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. В европейских странах около 10% взрослого населения имеет желчные камни [Festi D. et al., 1999]. Ежегодно в мире выполняется более 1,5 миллионов холецистэктомий поводу желчнокаменной болезни [Ветшев П.С., Ногтев П.В., 2005]. Несмотря на широкое внедрение малоинвазивных методов в современной хирургии печени и желчевыводящих путей, количество ятрогенных осложнений, одним из которых является желчный перитонит, не имеющих тенденции к снижению [Левин Л.А., 2009; AmendolaraM. et al., 2001]. Желчный перитонит при повреждении внепеченочных желчевыводящих путей во время лапароскопической холецистэктомии развивается у 94,5% пациентов [Nardello О. et al., 2003]. Он также может осложнять течение трансплантации печени, эндоскопических эндобилиарных вмешательств, лапароскопической и чрезкожной пункционной биопсии печени [Капранов С.А., Хачатуров А.А., 2008; Lebeau G., et al.,1996; Bravo A.A., et al., 2001; Orlando R., Lirussi F., 2004; Sanai F.M., Keeffe E.B., 2010].
Желчный перитонит является одним из наиболее тяжелых осложнений острых хирургических заболеваний органов брюшной полости [Совцов С.А., 2001; Журавлев В.Н. и соавт. 2003; Pikoulis Е. et al., 2006; Liess B.D. et al., 2006; Aydin U. et al., 2007; Kang P.O. et al., 2008]. Однако, несмотря на всю серьезность данной патологии, он остается обойденной вниманием хирургов [Thompson R.W., Schuler J.G. 1986; Andersson R. et al., 1990; Sokemen S, et al., 2001; Yang H. et al., 2004; Maghsoudi H. et al., 2005].
Диагностика и лечение желчного перитонита продолжают оставаться сложной клинической задачей (Gabriele R. et al., 2010). Единичные исследования посвящены цитологической диагностике желчного перитонита [Elsheikh Т.М., et al.,1996], роли окислительного стресса [Карякина Е.В.,
Белова С.В., 2004; Sun D., Aikawa N., 1999], печеночно-почечной недостаточности [Козлов B.C. и соавт., 2003; Baylis С., Bloch J., 1996; Numata M. et al., 2003]. До настоящего времени отсутствует единая классификация желчного перитонита [Koch М. et al., 2011]. При этом исследование патогенеза, разработка новых методов диагностики и лечения желчного перитонита продолжают оставаться вне поля зрения исследователей, несмотря на то, что послеоперационная летальность составляет при желчном перитоните от 10 до 34% [Брискин Б.С., 2006; Курбонов К.М., Даминова
Н.М., 2007; Amorotti С. et al., 2002].
Нерешенность приведенных выше проблем делает необходимым проведение дальнейших исследований с целью углубления представления о патогенезе, механизмах развития полиорганной недостаточности, разработки новых методов ранней диагностики и лечения желчного перитонита.
1. Цель исследования - оценить влияние окислительного стресса на состояние мембран клеток крови и эндотелий сосудов при экспериментальном желчном перитоните.
Задачи исследования.
1. Оценить структурно-функциональные нарушения состояния мембран клеток крови у животных с желчным перитонитом.
2. В опытах на животных с желчным перитонитом охарактеризовать метаболизм оксида азота.
3. У животных с желчным перитонитом установить характер нарушения сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза.
4. Методом многомерного анализа определить наиболее информативные диагностические критерии тяжести течения экспериментального желчного перитонита.
5. В опытах на животных с желчным перитонитом оценить морфофункциональные и морфометрические изменения в почках для
определения направленности гемокоагуляционных расстройств.
Новизна результатов исследования
В результате проведенных исследований впервые:
- установлено, что при экспериментальном желчном перитоните на фоне интенсификации свободнорадикальных процессов происходит нарушение структурно-функциональной организации клеточных мембран эритроцитов, сопровождающихся повышением содержания в крови SH-групп, ростом ССЭ, повышением активности внутриклеточных ферментов крови (ACT, AJ1T), нарушением метаболизма эндотелиального N0 плазмы и тромбоцитарного NO, а также активация сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза;
- наиболее информативными лабораторными показателями влияния окислительного стресса на состояние мембран клеток крови и эндотелий сосудов при экспериментальном желчном перитоните в порядке уменьшения их значимости являются: ДК < МДА < концентрация лейкоцитов < ЛИИ < ACT < АЛТ < метаболиты эндотелиального N0 плазмы < ССЭ < SH-групп < концентрация тромбоцитов.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. Ведущим звеном пато- и морфогенеза экспериментального желчного перитонита является синдромом эндогенной интоксикацией с нарушением структурно-функциональной организации клеточных мембран эритроцитов, ферментемией, нарушением метаболизма эндотелиального и тромбоцитарного NO, расстройством микроциркуляции в виде полнокровия капилляров, стазами, агрегацией эритроцитов с образованием эритроцитарно-фибриновых тромбов, дающие положительную реакцию на «зрелый» фибрин и указывающие на наличие объективных признаков ДВС- крови.
2. Расширены современные представления о пато- и морфогенезе гемокоагуляционных расстройств при экспериментальном желчном
перитоните.
Теоретическая значимость исследования
Совокупность полученных данных существенно расширяет и систематизируют представления о патогенезе и морфогенезе желчного перитонита, что может служить базой для проведения дальнейших научно- исследовательских работ.
Практическая значимость исследования
Выявленный комплекс наиболее информативных лабораторных показателей крови может быть использован для ранней диагностики желчного перитонита, разработки патогенетически обоснованных методов лечения и оценки их эффективности.
Сведения о практическом использовании результатов исследования
Внедрение более информативных критериев диагностики в практику лечебных учреждений позволит проводить раннюю диагностику желчного перитонита. Основные научные положения работы включены в план лекционного материала и практических занятий кафедр патологической физиологии и патологической анатомии, клинической иммунологии и лабораторной диагностики Кубанского государственного медицинского университета.
По результатам исследования опубликованы 20 печатных работ (см. приложение 2).
Считаю своим долгом выразить искреннюю признательность и глубокую благодарность моему научному руководителю, заведующему кафедрой топографической анатомии и оперативной хирургии Кубанского государственного медицинского университета доктору медицинских наук профессору Эдуарду Арутюновичу Петросяну и научному консультанту доктору медицинских наук Игорю Васильевичу Аксенову за ежедневную
помощь в выполнении работы.
Выражаю благодарность и признательность коллективу кафедры топографической анатомии и оперативной хирургии за оказанную помощь и дружескую поддержку в выполнении диссертационной работы.

Список літератури

ВЫВОДЫ
1. У животных с желчным перитонитом на фоне интенсификации свободнорадикальных процессов происходит нарушение структурно­функциональной организации мембран клеток крови, что проявляется достоверным ростом тиоловых групп, сорбционной способности эритроцитов и активности внутриклеточных ферментов.
2. При экспериментальном желчном перитоните наблюдается достоверное повышение содержания в крови метаболитов оксида азота, что является проявлением эндотелиальной дисфункции.
3. Развитие экспериментального желчного перитонита сопровождается активацией сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза, выражающейся увеличением количества тромбоцитов и активацией их агрегационных свойств.
4. Наиболее информативными критериями диагностики ранних проявлений развития синдрома системной воспалительной реакции при экспериментальном желчном перитоните в порядке уменьшения их значимости являются: ДК < МДА < концентрация лейкоцитов < ЛИИ < ACT < АЛТ < метаболиты N0 плазмы < ССЭ < SH-группы < концентрация тромбоцитов.
5. У животных с желчным перитонитом в почках выявлены морфофункциональные изменения, указывающие на развитие серозно­фибринозного воспаления с выраженными альтеративными и сосудисто­экссудативными проявлениями в виде отека межуточной ткани, лейкоцитарной инфильтрации, дистрофических и некробиотических изменений, полнокровия капилляров, агрегацией эритроцитов с образованием эритроцитарно-фибриновых тромбов, дающие положительную реакцию на «зрелый» фибрин с достоверным морфометрическим
увеличением параметров его среднего размера и объемной доли, что указывает на наличие объективных признаков ДВС-синдрома.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ УКАЗАТЕЛЬ
1. Абрамов А.Ю. Опыт лечения травмы печени в общехирургическом стационаре // Анналы хирургической гепатологии. - 2003. - №2. - С. 128-129.
2. Авдеева М.Г., Шубич М. Г. Патогенетические механизмы инициации синдрома системного воспалительного ответа (обзор литературы) Клиническая лабораторная диагностика. - 2003. - №6. - С. 3-10.
3. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. - М.: Медицина, 2002. - 240 с.
4. Аккер Л.В., Варшавский Б.Я. Показатели оксидантного и антиоксидантного статуса у беременных с гестозом // Акушерство и гинекология. - 2000. - №2. - С. 19-20.
5. Алипов В.В., Слесаренко С.С., Щуковский В.В. и др. Коррекция синдрома диссеменированного внутрисосудистого свертывания крови в неотложной хирургии рака желудочно-кишечного тракта // Вестник хирургии. - 1997. - №1. - С. 97-100.
6. Апсатаров Э.А., Концевой А.В., Макарова Т.Б. Некоторые аспекты нарушения гормонального статуса при перитоните // Хирургия. - 1993. - №
7. -С. 39-41.
7. Архипов У.А., Прохорова И.П. Желчный перитонит как осложнение желчнокаменной болезни и выбор хирургического лечения // Вестник хирургии. - 1987. - №4. - С. 3-5.
8. Арчаков А.И., Карузина И.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии // Вестник АМН СССР. - 1988. - №1. - С. 14-28.
9. Афендулов С.А., Бегежанов Б.Л. Ошибки и результаты лечения травм печени // Анналы хирургической гепатологии. - 1998. - № 3. - С. 176 - 177.
10. Ашмарин И.П., Гайло Т.А., Гончарова В.П. и соавт. Влияние катионных белков миелина, лизосом и ядра головного мозга и зобной железы на проницаемость мембран // Биохимия. - 1975. - № 5. - С. 331- 337.