Клеточные механизмы нейрорегенерации спинного мозга при трансплантации генетически модифицированных клеток мезенхимного происхождения Мухамедшина Яна Олеговна

Короткий опис

Мухамедшина,ЯнаОлеговна.Клеточныемеханизмынейрорегенерацииспинногомозгапритрансплантациигенетическимодифицированныхклетокмезенхимногопроисхождения: диссертация ... доктора медицинских наук : 03.03.04 /МухамедшинаЯнаОлеговна; [Место защиты: ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»]. - Казань, 2021. - 365 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
рукописиМУХАМЕДШИНАЯнаОлеговнаКЛЕТОЧНЫЕМЕХАНИЗМЫНЕЙРОРЕГЕНЕРАЦИИСПИННОГОМОЗГАПРИТРАНСПЛАНТАЦИИГЕНЕТИЧЕСКИМОДИФИЦИРОВАННЫХКЛЕТОКМЕЗЕНХИМНОГОПРОИСХОЖДЕНИЯ03.03.04 клеточнаябиология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант:

стр. 2
Клеткикрови пуповины 62 1.6.1.5.Мезенхимныестволовыеклетки68 1.6.1.5.1. Молекулярные иклеточныемеханизмы, 75 опосредующие воздействиемезенхимныхстволовыхклетокна микроокружение в области поврежденияспинногомозга1.7.Генетическаямодификацияклеток88 2 1.8. Генно­клеточная терапия травмыспинногомозга91 1.9. Концепция применения биодеградируемых матриксов в 94 приложении кклеточной...

стр. 8
гемопоэтические стволовыеклеткиконтузионная травмаспинногомозгамононуклеарныеклеткикрови пуповины человекамезенхимныестволовыеклеткимезенхимныестволовыеклеткижировой тканимезенхимныестволовыеклеткикостногомозгамезенхимныестволовыеклеткипульпы зуба нейральные прогениторныеклеткинейральные стволовыеклеткине рестрицированные соматические стволовыеклетки...

Оглавление диссертациидоктор наук Мухамедшина Яна Олеговна
ОГЛАВЛЕНИЕ Стр.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. Обзор литературы
1.1. Клиническая характеристика травматического 21 повреждения спинного мозга
1.2. Современные представления о патогенезе травмы спинного 23 мозга
1.3. Лимитирующие факторы нейрорегенерации
1.3.1. Эффекты ингибиторов роста аксонов
1.3.2. Глиальный рубец
1.3.3. Отсутствие трофической поддержки
1.4. Моделирование травмы спинного мозга у крыс и свиней
1.4.1. Полная или частичная перерезка
1.4.2. Компрессионная травма
1.4.3. Контузионная травма
1.5. Маркеры глиальных клеток нервной ткани
1.6. Современные подходы к регенеративной терапии травмы 51 спинного мозга
1.6.1. Клеточная терапия
1.6.1.1. Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки
1.6.1.2. Нейральные стволовые клетки
1.6.1.3. Глиальные клетки
1.6.1.4. Клетки крови пуповины
1.6.1.5. Мезенхимные стволовые клетки 68 1.6.1.5.1. Молекулярные и клеточные механизмы, 75 опосредующие воздействие мезенхимных стволовых клеток на микроокружение в области повреждения спинного мозга
1.7. Генетическая модификация клеток
1.8. Генно-клеточная терапия травмы спинного мозга
1.9. Концепция применения биодеградируемых матриксов в 94 приложении к клеточной и генно-клеточной терапии
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Получение и генетическая модификация мононуклеарных 97 клеток крови пуповины человека
2.2. Выделение и культивирование клеток микроглии
2.3. Генетическая модификация клеток микроглии
2.4. Выделение и культивирование мезенхимных стволовых 100 клеток крысы
2.5. Выделение и культивирование мезенхимных стволовых 101 клеток свиньи
2.6. Генетическая модификация мезенхимных стволовых 103 клеток крысы и свиньи
2.7. Проточная цитофлуориметрия и иммуноцитохимический 103 анализ культур клеток
2.8. Оценка фагоцитарной активности клеток микроглии in 105 vitro
2.9. Методика проведения MTT-теста полученных культур 106 клеток
2.10. Оценка пролиферации и миграции мезенхимных 106 стволовых клеток свиньи in vitro
2.11. Животные и экспериментальные группы
2.12. Методика проведения операции на спинном мозге крысы 109 и свиньи с последующей трансплантацией клеток
2.13. Оценка восстановления двигательной функции
2.14. Электрофизиологические методы
2.15. Классические морфологические методы
2.16. Иммуногистохимические методы
2.17. Электронная и иммуноэлектронная микроскопия
2.18. Методы количественной оценки экспрессии мРНК генов с 123 помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени
2.19. Вестерн блот анализ
2.20. Оценка цитокинового профиля
2.21. Статистическая обработка результатов 128 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование генетически модифицированных 129 мононуклеарных клеток крови пуповины человека in vitro
3.1.1. Оценка экспрессии мРНК генов vegf, gdnf и egfp в 129 генетически модифицированных мононуклеарных клетках крови пуповины человека
3.2. Исследование влияния интраспинальной инъекции
генетически модифицированных мононуклеарных клеток крови пуповины человека на функциональные изменения и посттравматические процессы спинного мозга крысы
3.2.1. Оценка экспрессии мРНК генов ув^ и gdnf в области 130 повреждения спинного мозга крысы
3.2.2. Сроки выживания и характеристика миграционного 131 потенциала генетически модифицированных мононуклеарных клеток крови пуповины человека
3.2.3. Оценка восстановления двигательной функции
3.2.4. Результаты электрофизиологических методов 136 исследования
3.2.5. Морфометрия области повреждения
3.2.6. Оценка активации астроцитов и экспрессия аксональных 144 белков CGRP и GAP43 в области повреждения
3.2.7. Электронномикроскопический анализ
3.2.7.1. Ультраструктурные признаки ткани спинного мозга в 148 области повреждения в группе без проведения клеточной терапии
3.2.7.2. Ультраструктурные признаки ткани спинного мозга в 151 области повреждения при трансплантации мононуклеарных клеток крови пуповины человека, трансдуцированных Ad5-EGFP
3.2.7.3. Ультраструктурные признаки ткани спинного мозга в 155 области повреждения при трансплантации мононуклеарных клеток крови пуповины человека, трансдуцированных Ad5-VEGF и Ad5-GDNF
3.2.8. Иммунноэлектронный микроскопический анализ ткани 159 спинного мозга в области повреждения экспериментальных
групп
3.2.9. Анализ популяции шванновских клеток мигрантов в 164 области повреждения
3.3. Исследование микроглии in vitro
3.3.1. Оценка уровня мРНК генов egfp, gdnf и продуктов их 174 экспрессии в генетически модифицированных клетках микроглии крысы
3.3.2. Характеристика морфологии, фенотипа и фагоцитарной 176 активности генетически модифицированных клеток микроглии крысы
3.4. Исследование влияния интраспинальной инъекции 182 генетически модифицированных клеток микроглии на функциональные изменения и посттравматические процессы спинного мозга крысы
3.4.1. Оценка экспрессии мРНК генов gdnf, egfp, ibal и irf5 в 182 области повреждения спинного мозга крысы
3.4.2. Сроки выживания и характеристика миграционного 184 потенциала генетически модифицированных клеток микроглии
3.4.3. Оценка микроглии и астроцитов в области травмы 185 спинного мозга
3.4.4. Морфометрия области повреждения
3.4.5. Оценка восстановления двигательной функции
3.5. Исследование мезенхимных стволовых клеток in vitro
3.5.1. Характеристика культур мезенхимных стволовых клеток, 195 полученных из жировой ткани, костного мозга и пульпы зуба крысы
3.5.2. Характеристика культуры мезенхимных стволовых 199 клеток, полученных из жировой ткани свиньи, и подбор оптимальных условий их культивирования
3.5.3. Пролиферация и миграция мезенхимных стволовых 210 клеток свиньи на модели контузионной травмы спинного мозга
in vitro
3.6. Исследование влияния аппликации на область травмы 216 заключенных в фибриновый матрикс мезенхимных стволовых клеток, полученных из жировой ткани, костного мозга или пульпы зуба, на функциональные изменения и посттравматические процессы спинного мозга крысы
3.6.1. Сроки выживания и характеристика миграционного 216 потенциала мезенхимных стволовых клеток крысы
3.6.2. Оценка восстановления двигательной функции
3.6.3. Результаты электрофизиологических методов 226 исследования
3.6.4. Морфометрия области повреждения
3.6.5. Оценка астроцитов и микроглии в области повреждения 234 спинного мозга крысы
3.6.6. Уровень экспрессии мРНК генов в области повреждения 237 спинного мозга крысы
3.7. Исследование цитокинового профиля на фоне травмы 243 спинного мозга крысы и аппликации мезенхимных стволовых клеток
3.7.1. Цитокиновый профиль в ткани спинного мозга
3.7.2. Цитокиновый профиль в сыворотке крови
3.8. Исследование влияния аппликации на область травмы 258 заключенных в фибриновый матрикс мезенхимных стволовых клеток жировой ткани на функциональные изменения и посттравматические процессы спинного мозга свиньи
3.8.1. Сроки выживания и характеристика миграционного 258 потенциала мезенхимных стволовых клеток свиньи
3.8.2. Оценка восстановления двигательной функции
3.8.3. Результаты электрофизиологических методов 262 исследования
3.8.4. Морфометрия области повреждения
3.8.5. Оценка астроцитов и микроглии в области повреждения 266 спинного мозга свиньи
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ