Модифицированные субтилизины в сегментной конденсации пептидов Колобанова, Светлана Викторовна

Короткий опис

Колобанова, Светлана Викторовна.
Модифицированные субтилизины в сегментной конденсации пептидов : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10. - Москва, 1999. - 131 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат химических наук Колобанова, Светлана Викторовна
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР МОДИФИЦИРОВАННЫЕ СУБТИЛИЗИНЫ
1.1. Общая характеристика субтилизинов
1.1.1. Строение молекулы субтилизинов
1.1.2. Активный центр и механизм катализа
1.1.3. Зона связывания субстрата и специфичность
1.2. Модификация субтилизинов
1.2.1. Модификация активного центра.
1.2.1.1. Тиолсубтшизин и субтшигаза
1.2.1.2. Свленосубт ил из ии
1.2.1.3. Ангидросубтилизин
1.2.1.4. Модификация остатков А$р32, Н1з64, Абп155
1.2.2. Замены аминокислотных остатков вблизи активного
центра и в зоне связывания субстратов
1.2.3. Мутации в участках связывания ионов Са2+
1.2.4. Модификации в областях, удаленных от активного центра
1.3. Заключение
II. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 63 II. 1.1. Получение и свойства тиолсубтилизина 65 II. 1.2. Тиолсубтилизин как катализатор синтеза различных пептидов 74 II. 2. БВЗ-субтшшзии как возможный катализатор синтеза пептидов
на твердом носителе
II. 2.1. Выбор носителя
II. 2.2. Выбор спейсера
II. 2.3. Модельная реакция
II. 2.4. Двух- и трехстадийная конденсация пептидных сегментов
на аминосилохроме
II.2.5. Отщепление пептида от твердого носителя
II. 3. Заключение 99 III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Материалы и методы
III.I. Получение и изучение ферментативных свойств тиолсубтилизина
111,1,1. Получение тиолсубтилизина
III. 1.2. Выделение тиолсубтилизина 104 III, 1,3. Определение ферментативной активности
III. 1.3.1. Определение активности по Glp-Ala-Ala-Leu-pNA
III. 1.3.2. Определение активности по п-нитрофенилацетату
III. 1.3.3. Определение активности по азоказеину
III. 1.4. Определение цистеина
III. 1.5. Определение сульфгидрильных групп 106 III. 1.6. Гидролиз эфиров пептидов и аминокислот
тиолсубтилизином 106 III. 1.7. Синтез пептидов при помощи тиолсубтилизина
(типичная методика)
III. 1.8. Определение выхода пептидов методом ВЭЖХ
III. 1.9. Препаративный синтез Z-Phe-Gly-NIfy
III. 1.10. Препаративный синтез Z-Phe-Ala-Ala-pNA 108 III.2. Конденсация пептидов на твердом носителе под действием SDS-субтилизина
111.2.1. Получение комплекса SDS-субтилизин
111.2.2. Синтез H-Met- Gly-Gly-аминосилохрома
III. 2.2.1. Присоединение Вое-Met-Gly-Gly-ОН к аминосилохрому
III. 2.2.2. Ацетилирование свободных аминогрупп
III. 2.3. Пикриновый тест
III. 2.2.4. Удаление Вос-группы
111.2.3. Синтез Dnp-Alu-Ala-Leu-Met-Gly-Gly-амино-
силохрома
III.2.4. Катализируемый субтилизином гидролиз пептидил-
аминосилохрома
111.2.5. Синтез Dnp-Ala-Ala-Leu-Met-Gly-Gly-aMum-
силохрома
111.2.6. Синтез Boc-Ala-Ala-Leu-Phe-Met-Gly-Gly-аминосилохрома
111.2.7. Отщепление пептида от твердого носителя с
помощью BrCN
ВЫВОДЫ