МОДИФІКАЦІЯ in vitro БІОЛОГІЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ КЛІТИН РАКУ ЛЕГЕНІ ЛЮДИНИ ІНТЕРФЕРОНОМ-АЛЬФА

Короткий опис

НАЦІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ НАУК УКРАЇНИ
ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ І РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є. КАВЕЦЬКОГО

На правах рукопису

Бездєнєжних Наталя Олександрівна

УДК: 616-006.04:578.245:57.086.83

МОДИФІКАЦІЯ in vitro БІОЛОГІЧНИХ ВЛАСТИВОСТЕЙ КЛІТИН РАКУ ЛЕГЕНІ ЛЮДИНИ ІНТЕРФЕРОНОМ-АЛЬФА

14.01.07 - онкологія

Дисертація на здобуття наукового ступеня
кандидата біологічних наук

Науковий керівник -
доктор біологічних наук
Кудрявець Юрій Йосипович

Київ 2009

ЗМІСТ

Перелік умовних скорочень...5
Вступ7
РОЗДІЛ 1. Огляд літератури.13
1.1. Вплив інтерферону на проліферацію та диференціювання клітин...15
1.2. Індукція інтерфероном апоптозу в пухлинних клітинах....19
1.3. Вплив інтерферону на неоангіогенез в пухлинній тканині22
1.4. Інтерферон як індуктор змін клональної структури клітинних популяцій25
1.5. Клінічне застосування ІФН-терапії в комплексному лікуванні онкологічних хворих.....29
1.6. Деякі властивості неопластичної клітини31
1.7. Рак легені людини: молекулярна патологія, загальні принципи лікування.................................................................................................36
1.7.1. Проблема виникнення лікарської резистентності при лікуванні онкологічних хворих...43
РОЗДІЛ 2. Експериментальна частина...48
2.1. Об’єкти і матеріали....48
2.2. Методи.51
2.2.1. Культивування клітинної лінії А-549 та адаптування її до вмісту інтерферону в середовищі..51
2.2.2. Визначення параметрів ростового циклу клітин..51
2.2.3. Приготування та фарбування цитологічних препаратів..52
2.2.4. Імуноцитохімічний аналіз...53
2.2.5. Дослідження чутливості клітин А-549 та ІФН-модифікованих субліній до хіміопрепаратів та солей металів..54
2.2.6. Дослідження впливу гіпертермії на клітини.55
2.2.7. Дослідження автономності росту клітин in vitro..55
2.2.8. Дослідження впливу механічного стресу на суспензію клітин56
2.2.9. Метод електронної мікроскопії..57
2.2.10. Метод ядерно-магнітного резонансу...57
2.2.11. Дослідження антипроліферативної та цитотоксичної дії офіцинального та механохімічно модифікованого адріабластину...58
2.2.12. Цитофлюориметричний аналіз клітин.59
2.2.13. Імуноферментний аналіз рівня секреції VEGF...60
2.2.14. Метод зворотної транскрипції та полімеразної ланцюгової реакції...60
2.2.15. Методика приготування цитогенетичних препаратів, диференційне фарбування..63
2.2.16. Статистичні методи...63
РОЗДІЛ 3. Зміни біологічних властивостей клітин А-549 за умов тривалої дії на них інтерферону.......64
3.1. Зміни морфології та проліферативного потенціалу клітин А-549 при довгостроковій дії на них інтерферону.......65
3.2. Ультраструктура клітин А-549 за умов тривалої експозиції їх з інтерфероном..74
3.2.1.Дослідження зміни кількісних та якісних характеристик ядерець клітин А-549 під впливом інтерферону..76
3.3. Автономність росту клітин А-549 за умов тривалої дії інтерферону80
3.4. Вплив інтерферону на секрецію та експресію VEGF в клітинах
А-54985
РОЗДІЛ 4 Модифікація чутливості клітин до дії цитотоксичних факторів за умов тривалої дії на них інтерферону.90
4.1. Модифікація інтерфероном чутливості пухлинних клітин до хіміопрепаратів та солей металів.....90
4.2. Дослідження експресії білків, пов’язаних з лікарською резистентністю, в клітинах А-549 при модифікації їх інтерфероном..99
4.2.1. Вплив тривалої модифікації інтерфероном клітин на присутність в них топоізомерази ІІ альфа...106
4.3. Вплив на модифіковані інтерфероном клітини гіпертермії.107
4.4. Чутливість клітин А-549 до комбінованого впливу опромінення та хіміопрепаратів за умов тривалої експозиції їх з інтерфероном 114
4.5. Чутливість клітин А-549 до механічного стресу при тривалій їх експозиції з інтерфероном...................................................................118
4.6. Вплив тривалої дії інтерферону на деякі молекулярні механізми апоптозу клітин А-549.120
РОЗДІЛ 5. Цитогенетична та клональна перебудова в популяції клітин А-549 під дією інтерферону.....130
Аналіз та узагальнення результатів досліджень..137
Висновки..147
Список використаних джерел149

ПЕРЕЛІК УМОВНИХ СКОРОЧЕНЬ

BSA bovine serum albumin
DMSO dimethyl sulfoxide
EGF epidermal growth factor
EGFR epidermal growth factor receptor
GAPDH гліцеральдегід 3 фосфатдегідрогеназа
GST глутатіон S - трансфераза
LRP lung resistance protein
МАР mitogen activated protein
MDR multidrug resistance
MRP multidrug resistance protein
МТТ 3-[4,5-Dimetilthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide
Pgp P-глікопротеїн
Ph філадельфійська хромосома
Rb ретинобластома
VEGF vascular endothelial growth factor
АГ антиген
АМН Академія Медичних Наук
АТ антитіло(а)
ГГТ гаммаглютамілтранспептидаза
ГТ гіпертермія
ДНК дезоксирибонуклеїнова кислота
ЗТ-ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція із зворотною транскрипцією
ІФА імуноферментний аналіз
ІФН інтерферон
ІЦХ імуноцитохімія
кД кілодальтон(и)
КМЯ клітини з мікроядрами
МІ мітотичний індекс
МКАТ моноклональні антитіла
МЛС множинна лікарська стійкість
мМ мілімоль
МЛД мобільні ліпідні домени
МО міжнародна одиниця
МХМ механо-хімічно модифікований
НАН Національна Академія Наук
НДРЛ недрібноклітинний рак легені
ОГ оптична густина
ПЛР полімеразна ланцюгова реакція
ПХТ поліхіміотерапія
РЛ рак легені
РМЗ рак молочної залози
РНК рибонуклеїнова кислота
СНІД синдром набутого імунодефіциту
ТХО трихлороцтова кислота
ФНП фактор некрозу пухлини
ФСБ фосфатносольовий буфер
ХГТ хіміогіпертермія
ХМЛ хронічний мієлолейкоз
ХТ хіміотерапія
ЦНС центральна нервова система
ЯМР ядерно-магнітний резонанс

ВСТУП

Особливості фенотипу клітин, які формують злоякісну пухлину, у великій мірі визначають і характер пухлинного процесу, а саме швидкість росту цієї пухлини, інтенсивність її метастазування і «хоумінг» метастатичних клітин, реакцію на медикаментозне лікування [1, 2]. Отже, дослідження особливостей фенотипу злоякісних клітин кожної конкретної пухлини є надзвичайно актуальною проблемою сучасної онкології, а пошук шляхів та засобів модифікуючого впливу на фенотипові особливості пухлинних клітин є одним із найважливіших напрямків біотерапії раку [3, 4].
Сказане обумовило інтерес дослідників до вивчення патогенетичних механізмів злоякісного росту та метастазування пухлин, а також до тих процесів в організмі, які перешкоджають розвитку і прогресії пухлинного процесу. Адже відомо, що виникнення злоякісних новоутворень пов’язано не тільки з безпосередньою злоякісною трансформацією клітин, але і з нездатністю захисної системи організму протистояти росту та прогресії неоплазми. Однією з таких ендогенних систем захисту є інтерферон (ІФН) убіквітарний цитокін, який контролює цілий каскад подій на молекулярно-генетичному, клітинному та системному рівні, запобігаючи трансформації клітин. Відомо, що ІФН має антимутагенну активністю, посилює апоптоз в пухлинних клітинах, індукований різними чинниками; він пригнічує рухомість пухлинних клітин та експресію в них онкогенів, модифікує взаємовідносини клітин між собою та з різними біологічними субстанціями: антитілами, гормонами, лімфокінами, цитокінами і факторами росту [4 - 8].
Актуальність проблеми. Раніше було встановлено, що ІФН викликає реверсію трансформації, індукованої вірусними онкогенами в клітинах гризунів, проте цей ефект ІФН сприймався скоріше як противірусний [3, 5]. Разом з тим, чисельні, але розрізнені дані вказували, що клітини невірусних пухлин також можуть втрачати деякі ознаки злоякісного фенотипу під дією ІФН, однак систематичних поглиблених досліджень такого ефекту ІФН і механізмів його дії в рамках однієї пухлинної модельної системи, зокрема клітин раку легені людини, так і не було проведено. Механізми посилення ІФН ефективності комбінованої протипухлинної терапії також залишаються повністю не розкритими. Клінічні успіхи застосування ІФН завжди значно випереджали розуміння механізмів його дії. Отже, не дивно, що цей поліпотентний цитокін широко ввійшов в схему медикаментозної терапії хворих на рак нирки, сечового міхура, меланомі, мієломній хворобі, при волосатоклітинному лейкозі і хронічному мієлолейкозі, тощо. Причому курси ІФН-терапії, як правило, тривають багато місяців, хоча механізми ефективності пролонгованої терапії залишаються невідомими. Сьогодні у світі зростає зацікавленість дослідників і клініцистів до ІФН, а по мірі розвитку молекулярної онкології розкриваються і нові механізми його дії. Сказане обумовлює необхідність дослідження не тільки ефектів, але й механізмів пролонгованої дії ІФН на біологічні властивості пухлинних клітин, його впливу на широкий спектр їх фенотипових і цитогенетичних особливостей. Такий підхід буде сприяти, з одного боку, отриманню додаткової інформації відносно механізмів протипухлинної дії ІФН на клітинно-молекулярному рівні, а з іншого надасть вагомих аргументів щодо шляхів раціонального використання цього цитокіну в біотерапії хворих на рак [9, 10], зокрема, на рак легені.
Такий напрямок роботи є надзвичайно важливим: адже саме генетична та фенотипова нестабільність лежить в основі появи і селекції клітин з високим метастатичним потенціалом, і саме фенотипові особливості пухлинних клітин дають їм можливість уникнути пошкоджуючого впливу численних протипухлинних факторів і дати початок вторинному, метастатичному росту. За таких обставин пошук засобів, що здатні модифікувати прояви злоякісного фенотипу пухлинних клітин, є надзвичайно актуальним напрямком, і саме цій проблемі дослідженню активності ІФН як модифікатора біологічних властивостей пухлинних клітин присвячена дана робота.
Зв’язок роботи з науковими програмами, планами, темами.
Дисертаційна робота виконана у відділі експериментальних клітинних систем ІЕПОР ім. Р.Є.Кавецького НАН України у відповідності до плану науково-дослідних робіт Інституту за темою 2.2.5.225 „Клітинний банк ліній з тканин людини та тварин. Створення нових клітинних моделей шляхом цитокінової модифікації пухлинних клітин in vitro” (2003 2008 рр.) та темою «Особливості функціонування онкогеному» (2002-2006 рр., державний реєстраційний №0102U003228). Частину роботи було виконано за підтримки гранту для молодих вчених відповідно до постанови Президії НАН України №101 від 11.04.2007 та розпорядження Президії НАН України №265 від 19.04.2007 на виконання наукових досліджень за договором №2.2.5.324 та №2.2.5.324/1.
Мета дослідження. Дослідити можливості та деякі механізми реверсії злоякісного фенотипу клітин раку легені людини при довгостроковій дії на них інтерферону-альфа.
Задачі дослідження.
За умов тривалої експозиції клітин з інтерфероном-альфа дослідити:
1) морфологічні та ультраструктурні особливості пухлинних клітин А-549 (клітинна лінія недрібноклітинного раку легені людини);
2) ростові характеристики і біологічні особливості клітин А-549 (кінетику росту, ефективність колонієутворення на субстраті та в середовищі з напіврідким агаром, ріст в безсироватковому середовищі, тощо);
3) експресію в клітинах А-549 білків, пов’язаних з проліферативною активністю, рівнем диференціювання, метастатичним потенціалом, апоптозом, лікарською резистентністю та ангіогенезом;
4) чутливість клітин А-549 до цитотоксичних факторів різної природи (хімічної, фізичної та біологічної);
5) цитогенетичні особливості клітин А-549.
Об’єкт дослідження: клітини недрібноклітинного раку легені людини клітинна лінія А-549 та її сублінія модифікована пролонгованою дією інтерферону-альфа in vitro.
Предмет дослідження: біологічні та цитогенетичні особливості клітин лінії А-549 та модифікованих пролонгованою дією інтерферону-альфа (ІФН).
Методи дослідження: культивування клітин, світлова та електронна мікроскопія, імунологічні (імуноцитохімічні, проточна цитофлуориметрія, імуноферментний аналіз), молекулярно-біологічні (полімеразна ланцюгова реакція з зворотною транскрипцією ЗТ-ПЛР), ядерно-магнітний резонанс, цитогенетичні, статистичні.
Наукова новизна. Вперше на лінії клітин недрібноклітинного раку легені людини показано, що тривала експозиція клітин з ІФН призводить до значного пригнічення експресії ядерного антигену Кі-67, зростання часу подвоєння клітинної популяції та зменшення щільності росту клітин. Встановлено, що пролонгована дія ІФН на клітини А-549 раку легені людини призводить до підвищення рівня їх диференціювання, про що свідчить ускладнення ультраструктурної організації клітин, пригнічення в них експресії білку цитоскелету віментину та посилення експресії білку адгезії Е-кадгерину.
Показано, що внаслідок тривалої дії ІФН в клітинах недрібноклітинного раку легені людини зменшується прояв основних ознак злоякісного фенотипу клітин in vitro: знижується автономність росту клітин - колонієутворення на субстраті та в середовищі з агаром, ріст в безсироватковому середовищі, ефективність клонування та щільність росту. Встановлено, що пригнічення злоякісного фенотипу клітин ІФН проявляється також в зниженні в них експресії і секреції білку, що забезпечує неоангіогенез (VEGF).
Вперше встановлена універсальність дії ІФН щодо підвищення чутливості пухлинних клітин до цитотоксичних чинників різної природи: хіміопрепаратів, солей металів, фактору некрозу пухлин, гіпертермії, механічного стресу, тощо. Виявлено, що висока чутливість ІФН-модифікованих пухлинних клітин до цитотоксичних чинників асоційована з підвищенням базального рівня каспази-3 та топоізомерази ІІ альфа, пригніченням експресії Всl-2, р53 та ABC-транспортерів білків множинної лікарської резистентності (Pgp, Gst, MRP, LRP).
Вперше на клітинах раку легені встановлено, що реверсія злоякісного фенотипу пухлинних клітин шляхом тривалої модифікації їх ІФН має стійкий характер: пригнічення секреції VEGF, втрата автономності росту клітин, експресія топоізомерази ІІ альфа зберігаються протягом 40 діб після припинення прямої дії на клітини цитокіну. Встановлено також, що при тривалому впливі ІФН на клітини раку легені людини спостерігається клональна селекція клітин, про що свідчать зміни модального класу хромосом та зміни у домінуванні клітин з певними маркерними хромосомами (der(6)t(6;1), der(2)t(2;1)).
Практичне значення роботи.
Одержані дані обґрунтовують доцільність тривалих курсів застосовування ІФН в онкологічній клініці не тільки як імуномодулюючого агента, але і як протипухлинного чинника з поліпотентними властивостями, здатного до стійкої зміни злоякісного фенотипу пухлинних клітин. Дана робота дозволяє зрозуміти механізми універсальності підвищення ІФН чутливості пухлинних клітин до цитотоксичних агентів різної природи, що є важливим для його комбінованого застосування з іншими протипухлинними чинниками в біотерапії хворих на рак, зокрема на рак легені.
Особистий внесок здобувача. Здобувач самостійно планувала та виконувала наукові досліди. Автором особисто отримана модифікована ІФН клітинна лінія недрібноклітинного раку легені людини А-549 та проведені всі роботи з культурами клітин, зокрема по дослідженню клітинної морфології, кінетики та автономності росту клітин, впливу на клітини цитотоксичних чинників різної природи за умов тривалої їх модифікації ІФН in vitro. Здобувач самостійно досліджувала експресію поверхневих та внутрішньоклітинних антигенів імуноцитохімічним методом, за допомогою проточної цитофлуориметрії, експресію мРНК за допомогою ЗТ-ПЛР. Автором самостійно проведено аналіз первинного матеріалу та статистична обробка отриманих даних, особисто здійснено теоретичне узагальнення результатів та порівняння їх з даними літератури, підготовку матеріалів результатів досліджень для їх публікації; здобувачем особисто підготовлений ілюстративний матеріал і сформульовані основні наукові положення та висновки дисертації.
Апробація результатів дисертації. Основні положення дисертації були представлені та обговорені на: VІІ Міжнародній конференції молодих онкологів „Сучасні проблеми експериментальної і клінічної онкології” (Київ, 2006); ХІ з’їзді онкологів України (Судак, 2006); Всеукраїнській науково-практичній конференції з міжнародною участю „Молекулярні основи і клінічні проблеми резистентності до лікарських засобів” (Київ, 2006); ІХ Міжнародній конференції молодих онкологів „Сучасні проблеми експериментальної та клінічної онкології” (Київ, 2008); Міжнародній конференції „Tumor hypoxia and malignant progression” (Kyiv, 2008); школі-конференції для молодих вчених „Методы культивирования клеток” (Санкт-Петербург, 2008).
Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 15 наукових праць, з яких 5 статей у провідних фахових виданнях затверджених ВАК України та 10 тез доповідей у збірках українських та міжнародних конференцій.
Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота викладена на 169 сторінках машинописного тексту і складається із вступу, огляду літератури, розділу матеріалів і методів дослідження, 3-х розділів власних досліджень, аналізу та узагальнення результатів дослідження, висновків та списку використаної літератури, який включає 202 посилання, у тому числі 151 зарубіжних. Дисертаційна робота ілюстрована 48 рисунками та 7 таблицями.

Список літератури

ВИСНОВКИ

На моделі клітин недрібноклітинного раку легені людини (лінія А-549) розкрито широкий спектр фенотипових і цитогенетичних змін внаслідок тривалої дії ІФН, які свідчать про реверсію злоякісного фенотипу клітин і елімінацію з популяції найбільш злоякісних клітинних клонів.
1. Встановлено, що внаслідок тривалої модифікації клітин раку легені людини А-549 ІФН ускладнюється їх ультраструктурна організація, більшість клітин при цьому набувають епітелієподібної морфології, що разом з комплексом інших ознак (підвищення адгезії клітин та експресії Е-кадгерину (з 22±1,3% до 63±2,6% в ІФН-модифікованих клітинах), зниження експресії віментину (на 20 25%) та EGFR (з 100% до 7±0,5% в ІФН-модифікованих клітинах) є свідченням підвищення рівня їх диференціювання.
2. Тривала дія ІФН на клітини А-549 призводить до пригнічення проліферативного потенціалу клітин, проявів злоякісного фенотипу і ознак туморогенності in vitro, що виражається у зниженні експресії ядерного антигену Кі-67 на 20%, пригніченні автономності росту клітин (стрімко знижується здатність клітин рости в середовищі з рідким агаром та в безсироватковому середовищі, падає їх клонуюча ефективність), зниженні рівня експресії і продукції VEGF та зростанні чутливості до механічного стресу.
3. Виявлено, що в ІФН-модифікованих клітинах відбуваються суттєві зміни в експресії апоптоз-опосередкованих білків: зростання експресії Fas-антигену, підвищення базального рівня активованої каспази-3, зниження експресії антиапоптичного білка Bcl-2 (з 94±1,02% до 29±2,4% в ІФН-модифікованих клітинах), р53 і підвищення чутливості до ФНП-індукованого апоптозу.
4. Виявлено, що внаслідок модифікації клітин ІФН відбувається підвищення чутливості клітин до цитотоксичних агентів хімічної, фізичної та біологічної природи, яке супроводжується зростанням в клітинах базального рівня активованої каспази-3, індукцією топоізомерази ІІ альфа, пригніченням експресії Всl-2, р53 та білків АВС-транспортерів - маркерів лікарської резистентності (Pgp, GST, MRP, LRP).
5. На клітинах недрібноклітинного раку легені людини встановлено, що реверсія злоякісного фенотипу пухлинних клітин внаслідок тривалої модифікації їх ІФН має стійкий характер: втрата автономності росту клітин, експресія топоізомерази ІІ альфа, пригнічення секреції VEGF зберігаються протягом 40 діб після припинення прямої дії на клітини цитокіну.
6. В модельній системі клітин недрібноклітинного раку легені людини встановлено, що при довгостроковій модифікації клітин ІФН зміни фенотипових властивостей супроводжуються і суттєвими змінами у клональному складі популяції злоякісних клітин. На це вказує значна зміна модального класу хромосом та домінування в популяції клітин з маркерною хромосомою: значно зростає кількість метафаз з хромосомною перебудовою der(6)t(6;1) і майже зникають клітини з хромосомною перебудовою der(2)t(2;1), що свідчить про суттєвий і специфічний селективний вплив ІФН на певні клони пухлинних клітин.

СПИСОК ВИКОРИСТАНИХ ДЖЕРЕЛ

1. Vilcek J. My fifty years with interferon / J. Vilcek // J Interferon Cytokine Res. 2007. v.27. P. 535-541.
2. Vilcek J. Interferon research BC (before cloning) / J. Vilcek, M. Pitha // Current Topics Microbiol. Immunol. 2007. v.316. - P. 9-22.
3. Канцерогенез / Г.И. Абелев, Г.А. Белицкий, Ю.М.Васильев [и др.] Москва: Научный Мир, 2000. 420 с.
4. Винсент Т. Биологические методы лечения онкологических заболеваний / Т. Винсент, С. Хеллман, А.С. Розенберг - Москва: Медицина, 2002. 920 с.
5. Телетаева Г.М.. Цитокины и противоопухолевый иммунитет / Г.М.Телетаева // Практическая онкология. 2007. - Т.8, №4. С. 211-218.
6. Кудрявець Ю.Й. Інтерферон α посилює розвиток апоптозу, індукованого різними чинниками в пухлинних клітинах in vitro / Ю.Й.Кудрявець // Експерим.онкол. - 2001. Т.4, №23.- С. 267-273.
7. Deletions of the shorlt arm of chromosome 9, including the interferon - / genes, in acute lympocytic leukemia. Stuides on loss of heterozygosity, parental origin of deleted genes and prognosis / Mats Heyman, Dan Grai, Karen Bröndum-Nielsen [et al] // International Journal of Cancer. 2005. v. 54, №5. P. 748 753.
8. Einhorn Stefan. Chromosome 9 Short Arm Deletions in Malignant Diseases / Stefan Einhorn; Mats Heyman // Leukemia and Lymphoma. 1993. -v. 11. P. 191-196.
9. Возианов А.Ф. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства / А.Ф. Возианов, А.К. Бутенко, К.П. Зак - Киев: Наукова думка, 1998. 314 с.
10. Scott Wadler. New Advances in Interferon Therapy of Cancer / Wadler Scott, Edward L. Schwartz // The Oncologist. -1997. - v. 2, №4. P. 254267.
11. Taniguchi T. The interferon-alpha/beta system in antiviral responses: a multimodal machinery of gene regulation by the IRF family of transcription factors / T. Taniguchi, A. Takaoka // Curr Opin Immunol. - 2002.- v.1, №14. - P. 111-116.
12. Michael G. Tovey. Oromucosal Interferon Therapy: Marked Antiviral and Antitumor Activity / G. Tovey Michael, Maury Chantal // Journal of Interferon & Cytokine Research. 1999. - v.19, №2. P. 145-155.
13. Shayna E.A. Perforin and interferon- activities independently control tumor initiation, growth, and metastasis / E.A Shayna, Erika Cretney, Mark J. Smyth // Blood. 2001. - v. 97, №1. - P. 192-197
14. Tumor-Targeted Interferon- Delivery by Tie2-Expressing Monocytes Inhibits Tumor Growth and Metastasis / Michele De Palma,Roberta Mazzieri,Letterio S. Politi [ et al] // Cancer Cell. 2008. - v. P. 299-311.
15. Tumorous manifestation of hairy cell leukemia after long-term treatment with interferon alpha / D.Huhn, J.Oertel, S.Serke // Annals of Hematology. 1995. v. 70, №2. P. 103-105.
16. Interferon regulatory factor-1 (IRF-1) exhibits tumor suppressor activities in breast cancer associated with caspase activation and induction of apoptosis / B. Kerrie Bouker, C.Todd Skaar, B. Rebecca Riggins [et al] // Carcinogenesis. 2005.- v. 26, №9.- P. 1527-1535.
17. Interferon-alpha sensitizes human hepatoma cells to TRAIL-induced apoptosis through DR5 upregulation and NF-kappa B inactivation / M. Shigeno , K.Nakao , T. Ichikawa [et al] // Oncogene.- 2003. v. 22. №11 P.1653-1662.
18. The human interferon receptor: NMR-based modeling, mapping of the IFN-alpha 2 binding site, and observed ligand-induced tightening / JH Chill, R Nivasch, R Levy [et al] // J Biochemistry. - 2002. - v.19, № 41(11).- P. 3575-3585.
19. Interferons and their receptors in human papillomavirus lesions of the uterine cervix / M Cintorino, SA Tripodi, R Romagnoli [et al]. Eur J Gynaecol Oncol.- 2002.-v.2, №23.- P. 145-150.
20. Structure of the interferon-receptor complex determined by distance constraints from double-mutant cycles and flexible docking / LC Roisman, JPiehler, JY Trosset [et al] // G.Proc Natl Acad Sci - 2001. - v. 23, №6 (98). P. 13231-13236.
21. Structure of the human type I interferon gene claster determined from YAC clone contig / MO Díaz , HM Pomykala , SK Bohlander // Genomics. 1994. v.22, №3. P. 540-552.
22. Іnterferon-alpha activates multiple STAT signals and down-regulates c-Met in primary human hepatocytes / S Radaeva, B Jaruga, F Hong [et al] // Gastroenterology. - 2002. - v.4, №122.- P. 1020-1034.
23. IFN-beta induces serine phosphorylation of Stat-1 in Ewing's sarcoma cells and mediates apoptosis via induction of IRF-1 and activation of caspase-7 / J.Sanceau, J. Hiscott, O. Delattre [et al] // Oncogene. - 2000. - v.13, №19(30). - P. 3372-3383.
24. Decatris M. Potential of interferon-alpha in solid tumours: part 1 / M.Decatris, S. Santhanam, K. O'Byrne // BioDrugs. - 2002. - v.4, №16. - P. 261-281.
25. Inhibition of alpha-interferon and cinnamic acid on proliferation of human lung cancer cell / G. Jin, T. Zhang, T. Wang, LP [et al] // Ai Zheng. - 2002. - v.8, №21. - P. 860-862.
26. Combined stimulation with interferon alpha and retinoic acid synergistically inhibits proliferation of the glioblastoma cell line GB12 / S. Ohno, T. Nishi, Y.Kojima [et al] // Neurol Res. - 2002. - v.7, №24. - P. 697-704.
27. Expression of integrin adhesion molecules in normal ovary and epithelial ovarian tumors / J.E. Bridges, P. Englefield , I.E. Boyd [et al] // International Journal of Gynecological Cancer. 2002. v.- 5, №3. P. 187-192.
28. Cell motility and cytoskeletal regulation in invasion and metastasis / D Kedrin, J van Rheenen, L Hernandez [et al] // J Mammary Gland Biol Neoplasia.-v. 12, N2-3. P. 143-152.
29. Bacac Marina. Metastatic Cancer Cell / Marina Bacac, Ivan Stamenkovic // Pathology: Mechanisms of Disease. 2007. -v. 3. P. 221-247.
30. Physiological Mechanisms of Tumor-Cell Invasion and Migration / David H. Geho, Russell W. Bandle, Timothy Clair [et al] // Physiology.-2005.-v. 20, N3. P. 194-200.
31. Role of protein kinase C-delta (PKC-delta) in the generation of the effects of IFN-alpha in chronic myelogenous leukemia cells / S. Kaur, S. Parmar, J. Smith [et al] // Exp Hematol. - 2005. - v.5, №33. - P. 550-557.
32. High susceptibility of human leukemic cells to Fas-induced apoptosis is restricted to G(1) phase of the cell cycle and can be increased by interferon treatment / I. Jedema, RM. Barge, R. Willemze [et al] // JH. Leukemia.- 2003.- v.3, №17. - P. 576-584.
33. Anti-tumour activity of interferon-alpha in multiple myeloma: role of interleukin 6 and tumor cell differentiation / W. Matsui, CA. Huff, M. Vala [et al] // J. Haematol. - 2003. - v.2, №121.-P. 251-258.
34. Лушников Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е.Ф.Лушников, А.Ю.Абросимов. - Москва: Медицина, 2001.-192 с.
35. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С.Р.Уманский.- Мол. Биол. 1996. т.30, вып.3. с. 487 502.
36. Kerr J.F.R. Apoptosis. Its significance in cancer and cancer therapy / J.F.R Kerr, B.V. Harmon // Cancer. - 1994. - v.73, №8. - Р. 2013 2026.
37. Фильченков А.А. Апоптоз. Семинары по гематологии/ А.А.Фильченков, Р.С. Стойка. Киев, 1995. - 24 с.
38. Bright J. Apoptosis: Programmed cell death in health and disease / J.Bright, A. Khar // Bioscience Reports. - 1994. - v.14, №2.- P. 67 81.
39. Chawla-Sarkar M. Apoptosis and interferons: Role of interferon-stimulated genes as mediators of apoptosis / M. Chawla-Sarkar, D.J.Linder, Y.F. Liu // Apoptosis.- 2003.- v.3, №8.- P. 237-249.
40. Eguchi H. Augmentation of antitumor activity of 5-fluorouracil by interferon alpha is associated with up regulation of p27Kip1 in human hepatocellular carcinoma cells / H. Eguchi, H. Nagano, H. Yamamoto // Clin. Cancer Res. - 2000.- v.7, №6.- P. 2881-2890.
41. p202, an interferon-inducible protein, mediates multiple antitumor activities in human pancreatic cancer xenograft models / Y. Wen, D.H. Yan, B. Wang [et al] // Cancer.Res. 2001.- v.19, №61. - P. 7142-7147.
42. Cytochrome c release, mitochondrial membrane depolarization, caspase-3 activation, and Bax-alpha cleavage during IFN-alpha-induced apoptosis in Daudi B lymphoma cells / N. Yanase, K. Ohshima, H. Ikegami, J. Mizuguchi // J Interferon Cytokine Res.- 2000.- v.12, №20 .- P. 1121-1129.
43. How interferon fight disease / H.M. Johnson, F.W. Bazer, B.E. Szente, M.A.Jarpe // Scientific Amer. - 1994.- №5.- P. 40-47.
44. Osman Y. Enhanced elimination of Ph+ chromosome cells in vitro by combined hyperthermia and other drugs (AZT, IFN-alpha, TNF and quercetin): its application to autologous bone marrow transplantation for CML / Y.Osman, Y.Moriyama, A. Shibata // Experim Hematol.- 1995.- №23.- P. 444-452.
45. Воронцова А.Л. Влияние интерферона на токсический эффект и противоопухолевую активность винбластина при комбинированной терапии метастазирующей карциномы Льюис / А.Л. Воронцова, Ю.И. Кудрявец, В.А.Фадеев // Эксперим Онкол.-1984.-№6. - C. 54-57.
46. Воронцова А.Л. Интерфероны и их применение в клинической онкологии / А.Л. Воронцова, Ю.И. Кудрявец, В.Е.Жильчук // Здоровье женщины - 2003. Т.16, №4.- С. 8-13.
47. Walder S. Antineoplastic activity of the combination of interferon and cytotoxic agents against experimental and human malignancies: A rewiew / S.Walder, E.I. Schwartz // Cancer Res. - 1990. - №50. - Р. 3473-3486.
48. Лісняк І.О. Неоваскуляризація і пухлинний ріст / І.О. Лісняк // Дисертація на здобуття наукового ступеня доктора біологічних наук. - Київ: 2004.
49. Dinney C.P. Inhibition of basis fibroblast growth factor expression, angiogenesis, and growth of human bladder carcinoma in mice by systemic interferon-alpha administration / C.P. Dinney, D.R. Bielenberg, P. Perrotte // Cancer Res. - 1998. - 58. Р. 808-814.
50. Ferrara N. The biology of vascular endothelial growth factor / N. Ferrara, T. Davis Smyth // Endocr Rev. 1997. №18. Р. 4-25.
51. Ellis L.M. Angiogenesis and metastasis / L.M. Ellis, I.J. Fidler // Eur. J. Cancer. 1996. - № 32. Р. 2451-2456.
52. Hefler L. Serum concentrations of vascular endothelial growth factor in vulvar cancer / L. Hefler, А. Tempter. // Clin Cancer Res. 1999. - №5. Р. 2806-2809.
53. Воронцова А.Л. Антиметастатическое действие интерферона при удалении экспериментальных опухолей / А.Л. Воронцова, Ю.И. Кудрявец, В.А.Фадеев, К.Р. Балицкий // Экспериментальная Онкология. - 1983. - №5. - С. 45-49.
54. Жильчук В.Е. Ингибирующее влияние интерферона-альфа на уровень фактора роста эндотелия сосудов в сыворотке крови больных раком молочной железы при комплексном лечении / В.Е. Жильчук, И.И. Лисняк, А.Л. Воронцова [и др.] // Онкология.- Т.10, №3. - 2008. - С. 321-326.
55. Interferon and cell division. IV. Effect of Interferon treatment of L1210 cells in vitro on tumor and colony formation / I Gresser, M.-T Thomas, D Brouty-Boye [et al] // Nature, New Biol.- 1971. v.231. - P. 20-21.
56. Hahn T. The interferon system in patients with malignant disease / T.Hahn, S.Levis // J. Interferon. Res. - 1982. v.2, №1. P. 97-102.
57. Brouty-Boye D. Reversibility of the transformed and neoplastic phenotype. 1. Progressive reversion of the phenotype of X-Ray-transformed C3H/IOTI/2 cell under prolonged treatment with interferon / D.Brouty-Boye, I.Gresser // Int. J. Cancer. 1981. v. 28. - P. 165-173.
58. Aguet M. High-affinity binding of I125 labelled mouse interferon to a specific cell surface reseptor / M.Aguet // Nature. 1980. v.284. - P. 459-461.
59. Electrophoretically pure mouse interferon exerts multiple biologic effects / Gresser I., De Maeyer-Guignard J., Tovey M.G. [et al] // Proc. Nat. Acad. Sci. 1979.- v. 76. - P. 5308-5312.
60. Gresser I. On the varied biologic effects of interferon / I. Gresser // Cell.Immunol. 1977. v. 34. - P. 406-415.
61. Gresser I. How does interferon inhibit tumor growth? / I.Gresser // Phil.Trans. 1982. - v. 299. - P. 69-76.
62. Gresser I. Antitumor effects of interferon / I.Gresser, M.G.Tovey // Biochim.Biophys. 1978. v.516. - P. 231-247.
63. Effect of Interferon on cellular enzymes / T.Sreevalsan, I.Lee, T.R. Butt [et al] // Interferons. 1982. - P. 103-122.
64. Reorganization of the cytoskeleton by interferon in MSV-transformed cells / Bourgeade M.F., Rousset S., Paulin D [et al] // J. Interferon Res. 1981. v.1, №2. - P. 323-332.
65. Brouty-Boye D. Association of phenotypic reversion of transformed cells induced by interferon with morphological and biochemical changes in the cytoskeleton / D.Brouty-Boye, Yin-Shyun E.Cheng, Lan Bo Chen // Cancer Res.- 1981. v.41. - P. 4174-4184.
66. Воронцова А.Л. Интерферон как важный элемент оптимизации лечения онкологических больных / А.Л. Воронцова, Ю.И. Кудрявец // Онкология. - 2000. - №2.- С. 16-24.
67. Knudson A.G. Mutation and cancer: A personal odyssey. / A.G. Knudson // Cancer Res. - 1995. v. 67. - P. 1-23.
68. Stanbridge E.J. Functional evidence for human tumour supressor genes: Chromosome and molecular genetic studies / E.J. Stanbridge // Cancer Surv - 1992. - v.12. - P. 5-24.
69. Weinberg R.A. Oncogenes and tumor suppressor genes. / R.A. Weinberg // CA Cancer J Clin. - 1994. - v.44. - P. 160-170.
70. A new fusion gene TPM3-ALK in anaplastic large cell lymphoma created by a (1;2)(q25;p23) translocation / L. Lamant, N. Dastugue, K. Pulford [et al] // Blood. - 1999. - v.93. P. 3088-3095.
71. Sacchi S. Effects of interferon-alpha therapy on lymphocyte subpopulations in patients with chronic myeloid leukemia / S. Sacchi, J. Cortes // Hematology and Molecular Hematology. - 1997. v.1, № 11. - Р. 41-47.
72. Kantarjian H. Chronic myelogenous leukemia: a concise update / H.Kantarjian, A. Deisseroth // Blood. 1993. v.82. P. 691.
73. Белоусова А.К. Молекулярно-биологические подходы к терапии опухолей / А.К. Белоусова. - Москва, 1993. - 207с.
74. Блохин Н.Н. Химиотерапия опухолевых заболеваний / Н.Н. Блохин, Н.И.Переводчикова. - Москва: Медицина, 1984. - 304с.
75. Величко Л.Н. Иммунобиологические эффекты интерферона / Л.Н.Величко // Офтальмологический Журнал. - 1997. - №6. С. 449-452.
76. Ад’ювантна цитокінохіміотерапія хворих на рак молочної залози при органозберігаючому хірургічному лікуванні / В.Є. Жильчук, А.Л. Воронцова, Г.І. Максим’як [та ін.] // Онкологія. - 2002. T.3, №4. - C. 200-203.
77. З досвіду застосування вітчизняного рекомбінантного альфа-2b інтерферону лаферону в онкологічній клініці / С.І. Коровін, В.Є. Жильчук, Т.Є. Ткачук [та ін.] // Фарм. Журн. 1998 - №1. C. 66-70.
78. Післяопераційна ад’ювантна терапія злоякісної меланоми шкіри / С.І. Коровін, А.Л. Воронцова, Б.О. Толстоп’ятов [та ін.] // Методичні рекомендації - Київ, 2003. 15 с.
79. Трансформированная клетка / Эш Б.Б., Билл П.Т., Камерон И.Л. [и др.]. Пер. с англ. Под ред. Бутенко З.А. Киев: Наукова думка, 1985. 384 с.
80. Копнин Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы их возникновения / Б.П. Копнин // Практическая онкология 2002. Т.3, №4. С. 229 235.
81. Integrin-mediated cell adhesion to type I collagen fibrils / J.Jokinen, E.Dadu, P.Nykvist [et al] // Biol. Chem. 2004. v.23, №30 31956-63.
82. Molecular mechanisms of metastasis / H Dave,K Minoru, K Joseph [et al] //