Молекулярные механизмы действия тиамина (витамина В1) в нервной ткани Мкртчян Гарик Варданович

Короткий опис

Мкртчян,ГарикВарданович.Молекулярныемеханизмыдействиятиамина(витаминаB1)внервнойткани: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.08 /МкртчянГарикВарданович; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова]. - Москва, 2017. - 120 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ФАКУЛЬТЕТ БИОИНЖЕНЕРИИ И БИОИНФОРМАТИКИ На правах рукописи МКРТЧЯНГАРИКВАРДАНОВИЧМОЛЕКУЛЯРНЫЕМЕХАНИЗМЫДЕЙСТВИЯТИАМИНА(ВИТАМИНАВ1) ВНЕРВНОЙТКАНИ03.01.08 Биоинженерия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: БУНИК ВИКТОРИЯ ИВАНОВНА Доктор химических

стр. 11
и содержит 37 рисунков и 4 таблицы. 11 2. Обзор литературы 2.1.МеханизмыдействиятиаминавнервнойтканиТиамин(витаминВ1) является незаменимым водорастворимымвитаминоми широко используется в качестве фармакологического препарата при лечении неврологических расстройств. В организм млекопитающих

стр. 25
особой некоферментной функциитиаминавнервнойткани. 2.1.6. Некоферментная рольтиаминавнервнойтканиПервые попытки исследования функциитиаминапомимо

Оглавление диссертациикандидат наук Мкртчян Гарик Варданович
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Механизмы действия тиамина в нервной ткани
2.1.1. Природные производные тиамина и их внутриклеточная локализация
2.1.2. Механизмы транспорта тиамина и его производных в клетку
2.1.3. Ферменты, участвующие в метаболизме тиамина и его производных
2.1.4. Антагонист ы тиамина
2.1.5. Тиамин как кофактор ферментов центрального метаболизма
2.1.6. Некоферментная роль тиамина в нервной ткани
2.2. ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ ТИАМИНА И ПОИСКА ЕГО НОВЫХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МИШЕНЕЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ
2.2.1. Тиамин и заболевания нервной системы
2.2.2. Тиамин и его фармакологические формы для лечения патологий ЦНС
3. МЕТОДЫ
3.1. Материалы
3.2. Эксперименты с использованием клеточных культур
3.2.1. Получение и культивирование первичной культуры астроцитов из мозга крысы
3.2.2. Культивирование мышиной линии нейробластомы (N2A)
3.2.3. Подсчет количества клеток в полученных культурах
3.2.4. Используемые клеточные модели патологий
3.2.5. Измерение клеточной жизнеспособности
3.3. Пробоподготовка биологических образцов
3.3.1. Приготовление метанол-уксусных экстрактов из клеточных культур
3.3.2. Приготовление метанол-уксусных экстрактов из коры головного мозга крыс
3.3.3. Приготовление клеточных лизатов для анализа ферментативных активностей
3.3.4. Приготовление гомогенатов мозга для анализа ферментативных активностей
3.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография для анализа уровней тиамина и его производных
3.5. Количественное определение глутамата как индикатора функции ОГДК и основного возбуждающего нейромедиатора мозга
3.6. Идентификация тиамин--зависимых белков мозга методом аффинной ХРОМАТОГРАФИИ И МАСС-спектрометрии
3.7. Фракционирование тканей
3.7.1. Выделение митохондриальной и цитоплазматической фракций из мозга крыс
3.7.2. Выделение митохондриальной и цитоплазматической фракции из печени крыс
3.8. Определение концентрации общего белка
3.9. Измерение дыхания сопряженных митохондрий in vitro
3.10. ДСН-электрофорез в ПААГ и иммуноблоттинг
3.11. Эксперименты на животных
3.11.1. Введение сукцинилфосфоната и тиамина интактным крысам
3.11.2. Модель тяжелой травмы спинного мозга
3.11.3. Краткосрочная модель острой травмы головного мозга
3.12. Измерения активностей ферментов
3.12.1. 2-оксоглутарат- и 2-оксоадипатдегидрогеназный комплекс
3.12.2. Глутаматдегидрогеназа
3.12.3. Малатдегидрогеназа
3.12.4. Малик-фермент
3.12.5. Пиридоксалькиназа
3.12.6. Пируватдегидрогеназный комплекс
3.13. Ацетилирование глутаматдегидрогеназы in vitro
3.14. Биоинформатические методы анализа
3.14.1. Биоинформатическийресурс "DAVID"
3.14.2. База данных "PANTHER "
3.14.3. Анализ экспрессии ферментов с использованием базы данных GEO
3.15. Статистический анализ результатов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Увеличение транспорта тиамина в клетку вследствие снижения функции ТДФ-зависимых ферментов
4.1.1. Астроциты и нейробластомные клетки отличаются содержанием тиамина и его производных
4.1.2. Уровни транскриптов мРНК тиамин-зависимых и функционально связанных с ними белков в нейробластомных клетках и астроцитах
4.1.3. Ингибитор ОГДГК сукцинилфосфонат вызывает увеличение содержания тиаминовых производных в астроцитах и мозге крыс, но не в нейробластомных клетках
4.2. Функция белков, метаболически связанных с ТДФ-зависимыми дегидрогеназами 2-оксокислот, зависит от тиамина и/или его производных
4.2.1. Изменения в активностях малатдегидрогеназы и глутаматдегидрогеназы мозга при введении высоких доз тиамина животным
4.2.2. Изменения активностей глутаминсинтетазы и малатдегидрогеназы в клеточной модели дефицита тиамина
4.2.3. Тиамин- и ТДФ-зависимая регуляция митохондриального дыхания и ферментов центрального метаболизма митохондрий, связанных с ТДФ-зависимыми ферментами
4.2.4. Некоферментный тип регуляции тиамином и/или его производными исследуемых ферментов in vitro
4.3. Биоинформатический анализ массивов данных по масс-спектрометрической идентификации белков мозга, связывающихся с аффинными носителями, содержащими тиамин или его производные
4.3.1. Сравнение протеомов, элюированных с тиамин-содержащего носителя путем специфической элюции тиамином и неспецифической элюции хлоридом натрия и мочевиной
4.3.2. «Ацетилирование» как наиболее представленный термин аннотации протеомов тиамин-зависимых белков
4.3.3. Идентификация известных тиамин- и ТДФ-связывающих белков в исследуемых протеомах
4.4. Экспериментальное исследование действия тиамина на процессы регуляторного ацетилирования
4.4.1. Введение высоких доз тиамина приводит к увеличению митохондриальной деацетилазы сиртуина 3 и активности глутаматдегидрогеназы в мозге
4.4.2. In vitro ацетилирование глутаматдегидрогеназы и малатдегидрогеназы митохондрий мозга
4.5. Тиамин-зависимая регуляция ацетилирования связана с циркадными ритмами
4.5.1. Влияние дневных ритмов животных на экспрессию сиртуина 3 и ее регуляцию под действием тиамина
4.5.2. Влияние тиамина на дневные ритмы ацетилирования глутаматдегидрогеназы в мозге животных
4.6. КОФЕРМЕНТНОЕ И НЕКОФЕРМЕНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ТИАМИНА ВОВЛЕЧЕНЫ В ЕГО НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫЙ ЭФФЕКТ ПРИ ТРАВМАТИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ МОЗГА
4.6.1. Защитное действие тиамина при острой черепно-мозговой травме
4.6.2. Защитное действие тиамина при спинно-мозговой травме
5. ОБСУЖДЕНИЕ
5.1. Тиамин и устойчивость клеток при метаболическом стрессе
5.2. Новые ферменты-мишени тиаминовых соединений метаболически связаны с
ТДФ-ЗАВИСИМЫМИ ФЕРМЕНТАМИ
5.3. Биологическая роль тиаминовой регуляции ацетилирования белков
5.3.1. Регуляторное действие тиамина in vivo через стимуляцию деацетилирования ферментов
5.3.2. Связь тиамина и циркадныхритмов
5.4. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ ТИАМИНА КАК НЕЙРОПРОТЕКТОРА ПРИ ТРАВМАТИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ МОЗГА
6. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ
7. БЛАГОДАРНОСТИ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ