Нейропротективные свойства нейрональных и глиальных клеток-предшественников, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека Салихова Диана Ирековна

Короткий опис

Салихова,ДианаИрековна.Нейропротективныесвойстванейрональныхиглиальныхклеток-предшественников,полученныхизиндуцированныхплюрипотентныхстволовыхклетокчеловека: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.03.04 /СалиховаДианаИрековна; [Место защиты: ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологиичеловека»]. - Москва, 2020. - 170 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 4
состава секретомовнейрональныхиглиальныхклеток-предшественников.................................... 99 3.3. Сравнительный анализ экспрессии генов регуляторных белковнейрональнымииглиальнымиклетками-предшественниками..................... 101 3.4. Сравнительный анализнейропротективногои прорегенеративного действиянейрональныхиглиальныхклеток-предшественниковв моделях in...

стр. 7
оценканейропротективныхсвойствсекретомов (кондиционированных сред)нейрональныхиглиальныхклеток-предшественников,полученныхизиндуцированныхплюрипотентныхстволовыхклеток, на моделях глутаматной эксайтотоксичности и гипоксии in vitro, транзиторной окклюзии средней мозговой артерии in vivo.

стр. 8
клеточная биология, цитология, гистология. Научная новизна исследования Дана сравнительная оценка эффективностинейрональныхиглиальныхклеток-предшественников,полученныхизиндуцированныхплюрипотентныхстволовыхклетокчеловека, в паракринной регуляции репаративных процессов нервной ткани. Впервые с помощью протеомного анализа установлено, чтоглиальныеклетки-предшественникисекретируют 304 белка, а...

Оглавление диссертациикандидат наук Салихова Диана Ирековна
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Технологии получения и применения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток
1.1.1. Интеграционные и неинтеграционные методы генетического репрограммирования
1.1.2. Применение производных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в терапевтических целях
1.2. Дифференцировка ИПСК в нейрональном и глиальном направлениях
1.2.1. Нейральная индукция
1.2.2. Специализация нейральных стволовых клеток в нейрональные и глиальные клетки
1.3. Патогенез ишемического инсульта
1.3.1. Ишемический каскад
1.3.2. Основные механизмы клеточной гибели при ишемическом инсульте
1.3.3. Роль окислительного стресса при ишемическом инсульте
1.3.4. Постишемическое воспаление
1.3.5. Повышенная экспрессия матричных металлопротеиназ
1.3.6. Современные подходы к терапии ишемического инсульта
1.4. Модели оценки нейротрофического и нейропротективного действия биологически активных веществ in vitro
1.5. Экспериментальные животные модели ишемического инсульта
1.5.1. Методы оценки степени тяжести ишемического инсульта
1.6. Заключение к обзору литературы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Составы сред для культивирования клеток
2.2. Протоколы экспериментов
2.2.1. Информация о донорах биологического материала
2.2.2. Получение первичных культур фибробластов кожи человека
2.2.3. Получение ИПСК с помощью генетических конструкций
2.2.4. Культивирование ИПСК человека
2.2.5. Приготовление препаратов метафазных хромосом ИПСК человека
2.2.6. Формирование и спонтанная дифференцировка эбриоидных телец
2.2.7. Дифференцировка ИПСК в нейрональном и глиальном направлениях
2.2.8. Иммуноцитохимический анализ
2.2.9. Проточная цитометрия
2.2.10. ПЦР в режиме реального времени
2.2.11. Получение кондиционированных сред на основе нейрональных и глиальных клеток-предшественников
2.2.12. Иммуноферментный анализ
2.2.13. Выделение мозжечковых нейронов
2.2.14. Культивирование и дифференцировка линии SH-SY5Y
2.2.15. Моделирование глутаматной эксайтотоксичности
2.2.16. Моделирование гипоксии
2.2.17. Оценка гибели клеток
2.2.18. Оценка роста нейритов
2.2.19. Процедура протеомного анализа
2.2.19.1. Измерение концентрации белка
2.2.19.2. Электрофорез белков в полиакриаламидном геле
2.2.19.3. Гидролиз трипсином в геле
2.2.19.4 Масс-спектрометрический анализ
2.2.20. Лабораторные животные
2.2.21. Моделирование экспериментального инфаркта мозга
2.2.22. Внутриартериальное введение кондиционированных сред
2.2.23. Магнитно-резонансная томография
2.2.24. Оценка терапевтической эффективности
2.2.25. Гистологическое исследование
2.2.26. Иммуногистохимическое исследование
2.2.27. Оценка ангиогенеза
2.2.28. Статистический анализ
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1.Получение и характеристика нейрональных и глиальных клеток-предшественников путем направленной дифференцировки ИПСК
3.1.1.Отбор и характеристика полученных линий ИПСК
3.1.2. Количественный анализ нейральных стволовых клеток в культуре и их характеристика
3.1.3. Анализ морфологии нейрональных и глиальных клеток-предшественников
3.2. Сравнительный анализ секретомов нейрональных и глиальных клеток-предшественников
3.2.1. Сравнительный протеомный анализ состава секретомов нейрональных и глиальных клеток-предшественников
3.2.2. Сравнительный иммуноферментный анализ состава секретомов нейрональных и глиальных клеток-предшественников
3.3. Сравнительный анализ экспрессии генов регуляторных белков нейрональными и глиальными клетками-предшественниками
3.4. Сравнительный анализ нейропротективного и прорегенеративного действия нейрональных и глиальных клеток-предшественников в моделях in vitro
3.4.1. Сравнительный анализ нейропротективного и прорегенеративного действия нейрональных и глиальных клеток-предшественников на модели гипоксии
3.4.1.1. Оценка жизнеспособности клеток в культуре SH-SY5Y
3.4.1.2. Количественная оценка некротических и апоптотических клеток
3.4.1.3. Оценка роста нейритов
3.4.2. Сравнительный анализ нейропротективного и прорегенеративного действия нейрональных и глиальных клеток-предшественников на модели глутаматной эксайтотоксичности
3.4.2.1. Оценка жизнеспособности клеток культуры мозжечковых нейронов
3.4.2.2.Оценка количества некротических и апоптотических клеток
3.4.2.3. Оценка роста нейритов
3.5. Анализ нейропротективного действия кондиционированных сред глиальных и нейрональных клеток-предшественников на модели экспериментального инфаркта мозга у крыс
3.5.1. Терапевтические эффекты внутриартериального введения кондиционированных сред глиальных и нейрональных клеток-предшественников
3.5.1.1. Оценка выживаемости животных
3.5.1.2. Оценка неврологического дефицита
3.5.1.3. Оценка изменения объема очага инфаркта
3.5.1.4. Оценка безопасности кондиционированных сред
3.5.2 Гистологическое и молекулярно-генетическое исследование головного мозга крыс при инфузии кондиционированных сред глиальных и нейрональных клеток-предшественников в условиях острой фокальной ишемии
3.5.2.1. Оценка изменения профиля экспрессии генов в тканях в области повреждения мозга
3.5.2.2. Гистологическое исследование
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
166