Производные прогестерона, селективно взаимодействующие с его мембранными рецепторами, и их избирательные эффекты Поликарпова Анна Вадимовна

Короткий опис

Поликарпова,АннаВадимовна.Производныепрогестерона,селективновзаимодействующиесегомембраннымирецепторами,иихизбирательныеэффекты: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.03.01 /ПоликарповаАннаВадимовна; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 121 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
1 МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В.ЛОМОНОСОВА Биологический факультет На правах рукописиПоликарповаАннаВадимовнаПРОИЗВОДНЫЕПРОГЕСТЕРОНА,СЕЛЕКТИВНОВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИЕСЕГОМЕМБРАННЫМИРЕЦЕПТОРАМИ, И ИХИЗБИРАТЕЛЬНЫЕЭФФЕКТЫСпециальность 03.03.01 Физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание

стр. 4
ПРОИЗВОДНЫХПРОГЕСТЕРОНА,СЕЛЕКТИВНОВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХСЕГОМЕМБРАННЫМИРЕЦЕПТОРАМИ................................ 54 3.1. КОНКУРЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬПРОИЗВОДНЫХПРОГЕСТЕРОНАПРИ СВЯЗЫВАНИИ СМЕМБРАННЫМИРЕЦЕПТОРАМИПРОГЕСТЕРОНАВ КЛЕТКАХ ЛИНИИ BxPC3.............................................................................................................................

стр. 53
независимых измерений. 54 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ: ПОИСКПРОИЗВОДНЫХПРОГЕСТЕРОНА,СЕЛЕКТИВНОВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХСЕГОМЕМБРАННЫМИРЕЦЕПТОРАМИ3.1. КОНКУРЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬПРОИЗВОДНЫХПРОГЕСТЕРОНАПРИ СВЯЗЫВАНИИ СМЕМБРАННЫМИРЕЦЕПТОРАМИПРОГЕСТЕРОНАВ КЛЕТКАХ ЛИНИИ BxPC3 Ранее было показано [Goncharov et al.,

Оглавление диссертациикандидат наук Поликарпова Анна Вадимовна
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. РЕЦЕПТОРЫ ПРОГЕСТЕРОНА
1.1.1. Ядерные рецепторы прогестерона
1.1.1.1. Изоформы ядерного рецептора прогестерона
1.1.1.2. Строение, субклеточная локализация и механизм проведения сигнала ядерного рецептора прогестерона
1.1.1.3. Тканевое распределение и регуляция экспрессии ядерного рецептора прогестерона
1.1.1.4. Лигандсвязывающая активность ядерного рецептора прогестерона
1.1.2. Мембранные рецепторы прогестерона
1.1.2.1. Семейство PAQR
1.1.2.2. Строение и субклеточная локализация мембранных рецепторов прогестерона
1.1.2.3. Сигнальные пути прогестерона, опосредуемые мембранными рецепторами прогестерона
1.1.2.4. Тканевое распределение и регуляция экспрессии мембранных рецепторов прогестерона
1.1.2.5. Лигандсвязывающая активность мембранных рецепторов прогестерона
1.1.3. Другие сенсоры прогестерона
1.1.3.1. Рецепторы окситоцина и у-аминомасляной кислоты
1.1.3.2. Компонент мембранного рецептора прогестерона
1.2. КОРТИКОСТЕРОИД-СВЯЗЫВАЮЩИЙ ГЛОБУЛИН
1.3. ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ПРОГЕСТИНОВ
1.3.1. Половые различия при аутоиммунных и инфекционных заболеваниях
1.3.2. Иммуномодулирующие эффекты прогестерона в репродуктивной системе
1.3.3. Иммуномодулирующие эффекты прогестерона при беременности
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. БИОЛОГИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ
2.1.1. Клеточные линии
2.1.1.1. Обоснование выбора клеточной линии BxPC3 длярадиолигандного анализа
2.1.1.2. Обоснование выбора культуры мононуклеарных клеток (PBMC) и других клеточных линий (Jurkat, THP-1, ^62) для определения эффектов прогестерона и его аналогов
2.1.1.3. Обоснование выбора дрожжей для определения транскрипционной активности
2.1.2. Используемые в работе животные
2.1.2.1. Обоснование выбора крысиного материала для радиолигандного анализа
2.2. МАТЕРИАЛЫ
2.2.1. Реактивы
2.2.2. Исследуемые синтетические стероиды
2.3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ
2.3.1. Культивирование клеток
2.3.1.1. Культивирование клеточных линий
2.3.1.1.1. Особенности культивирования линии BxPC3
2.3.1.1.2. Приготовление лизата клеток BxPC3
2.3.1.1.3. Особенности культивирования линий Jurkat, THP-1 и ^62
2.3.1.2. Выделение PBMC из периферической крови доноров
2.3.1.3. Инкубация клеток с гормонами
2.3.1.4. Культивирование дрожжевых клеток
2.3.1.4.1. Трансформация клеток дрожжей
2.3.1.4.2. Отбор клонов методом ПЦР и электрофореза в агарозном геле
2.3.2. Радиолигандный анализ
2.3.2.1. Измерение и анализ связывания [3Н]прогестерона с целыми клетками линии BxPC3
2.3.2.2. Измерение и анализ связывания [3Н]прогестерона с цитозольной фракцией матки
2.3.2.3. Получение бесстероидной сыворотки, измерение и анализ связывания [3Н]прогестерона с транскортином сыворотки крови
2.3.2.4. Анализ результатов радиолигандного анализа
44
45
2.3.3. Определение антагонистической и агонистической активности соединений к nPRs в
клетках дрожжей
2.3.4. Молекулярно-биологические методы
2.3.4.1. Определение экспрессии мРНК цитокинов методом ПЦР-РВ
2.3.4.1.1. Выделение РНК из клеток
2.3.4.1.2. Обработка РНК ДНКазой
2.3.4.1.3. Синтез кДНК
2.3.4.1.4. Количественная ПЦР в реальном времени
2.3.4.1.5. Анализ результатов ПЦР-РВ
2.3.4.2. Секвенирование ПЦР продуктов
2.3.5. Биохимические методы
2.3.5.1. Иммуноблоттинг
2.3.5.2. Определение концентрации цитокинов в культуральной среде
2.3.6. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ: ПОИСК ПРОИЗВОДНЫХ ПРОГЕСТЕРОНА, СЕЛЕКТИВНО ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХ С ЕГО МЕМБРАННЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ
3.1. КОНКУРЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ ПРОГЕСТЕРОНА ПРИ СВЯЗЫВАНИИ С МЕМБРАННЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ ПРОГЕСТЕРОНА В КЛЕТКАХ ЛИНИИ BxPC3
3.2. КОНКУРЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ ПРОГЕСТЕРОНА ПРИ СВЯЗЫВАНИИ С ЯДЕРНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ ПРОГЕСТЕРОНА МАТКИ КРЫСЫ
3.3. ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ТРАНСКРИПЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ nPR-B, ЭКПРЕССИРОВАННОГО В ДРОЖЖАХ Saccharomyces сегву181ав
3.4. КОНКУРЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ ПРОГЕСТЕРОНА ПРИ СВЯЗЫВАНИИ С ТРАНСКОРТИНОМ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ: ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ АНАЛОГОВ НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ ИММУННЫМИ КЛЕТКАМИ
4.1. ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ЭКСПРЕССИЮ ЦИТОКИНОВ В КЛЕТКАХ ЛИНИИ JURKAT
4.2. ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ЭКСПРЕССИЮ ЦИТОКИНОВ В КЛЕТКАХ ЛИНИИ THP-1
4.3. ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ЭКСПРЕССИЮ ЦИТОКИНОВ В КЛЕТКАХ ЛИНИИ К562
4.4. ВЛИЯНИЕ ВЫБРАННЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ЭКСПРЕССИЮ ЦИТОКИНОВ В МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТКАХ КРОВИ (PBMC)
4.4.1. Половые различия в экспрессии мРНК цитокинов в PBMC
4.4.2. Влияние прогестерона и его селективных к mPRs аналогов в концентрации 10 мкМ на экспрессию мРНК цитокинов
4.4.3. Сравнение уровней мРНК исследуемых цитокинов в контрольных образцах с образцами после обработки прогестероном
4.4.4. Влияние прогестерона и его селективных к mPRs аналогов (20 и 50 мкМ) на экспрессию мРНК провоспалительных цитокинов в клетках PBMC
4.4.5. Влияние прогестерона и его селективных к mPRs аналогов (20 и 50 мкМ) на экспрессию противовоспалительных цитокинов в клетках PBMC
4.4.6. Влияние прогестерона и его селективных к mPRs аналогов (20 и 50 мкМ) на экспрессию факторов клеточного иммунного ответа в клетках PBMC
4.4.7. Соответствие изменений в экспрессии мРНК изменениям в уровне секретируемого белка цитокинов в клетках PBMC
4.4.8. Суммированные результаты по влиянию прогестерона и его селективных к mPRs аналогов на экспрессию мРНК факторов иммунитета в разных клеточных линиях
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
ВВЕДЕНИЕ