Разработка и совершенствование средств и методов диагностики бруцеллеза и кампилобактериоза животных Скляров, Олег Дмитриевич

Короткий опис

Скляров, Олег Дмитриевич.Разработка и совершенствование средств и методов диагностики бруцеллеза и кампилобактериоза животных : диссертация ... доктора ветеринарных наук : 16.00.03. - Москва, 2006. - 271 с. : ил.
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИдоктор ветеринарных наук Скляров, Олег Дмитриевич
Список сокращений.
Введение.6
1. Обзор литературы.12
1.1. Бруцеллез.12
1.1.1. Краткая историческая справка.12
1.1.2. Характеристика возбудителя бруцеллеза.
1.1.2.1 Таксономия.
1.1.2.2. Геном.15
1.1.3. Краткий анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу 16
1.1.4. Резервуар и источники бруцеллезной инфекции.
1.1.5. Диагностика бруцеллеза животных.
1.1.5.1. Серологические методы диагностики бруцеллеза.
1.1.5.2. Аллергическая диагностика бруцеллеза.
1.1.5.3. Бактериологическая диагностика бруцеллеза.33
1.1.5.4. Молекулярно-генетическая диагностика бруцеллеза 34
1.2. Кампилобактериоз.47
1.2.1. Краткая историческая справка.47
1.2.2. Характеристика возбудителя болезни.
1.2.2.1. Таксономия.48
1.2.2.2. Морфологические свойства.
1.2.2.3. Культуральные свойства.49
1.2.3. Эпизоотология заболевания.51
1.2.4. Диагностика кампилобактериоза животных.57
1.2.5. Идентификация кампилобактерий.71
1.3. Анализ обзора литературы.74
2. Собственные исследования.89
2.1. Материалы и методы.89
2.1.1. Подготовка исследуемого материала.
2.1.2. Выделение геномной ДНК из исследуемого материала . 91
2.1.3. Постановка ПЦР.
2.1.4. Очистка ампликонов методом фенольной экстракции . 93
2.1.5. Рестрикционный анализ.
2.1.6. Электрофоретический анализ.95
2.1.7. Изучение свойств кампилобактерий.96
2.2. Результаты собственных исследований.
2.2.1. Разработка ПЦР-тест-системы для выявления бруцелл 101-140 2.2.1.1. Краткое теоретическое обоснование основных принципов при разработке ПЦР-тест-систем.101
2.2.1.2. Определение чувствительности и специфичности праймеров WboA.104
2.2.1.3. Оценка чувствительности и специфичности ПЦР-тест-системы для выявления бруцелл.109
2.2.2. Оценка чувствительности ПЦР-тест-системы с использованием молока, крови и спермы животных, контамини-рованных бруцеллами и крови морских свинок, инфицированных бруцеллами.113
2.2.3. Изучение чувствительности и специфичности ПЦР-тест-системы в производственных условиях.120
2.2.3.1. Московская область.120
2.2.3.2. Смоленская область.123
2.2.3.3. Волгоградская область.127
2.2.3.4. Краснодарский край.;.131
2.2.4. Дифференциация видов и штаммов бруцелл.140
2.2.4.1 Идентификация вакцинного штамма Brucella abortus 19 . 140
2.2.4.2 Идентификация диссоциированных штаммов бруцелл . 141
2.2.4.3 Дифференциация видов бруцелл, основанная на полиморфизме расположения в геноме бруцелл элемента IS 711.144
2.2.4.4 Дифференциация всех биоваров В. abortus.149
2.2.4.5 Использование ПЦР-ПДРФ-анализа для дифференциации В. canis и В. neotomae.151
2.2.5. Изучение дифференциально-диагностических признаков кампилобактерий.156
2.2.6. Разработка тест-системы для выявления Campylobacter jejuni subspecies jejuni.159
2.2.6.1. Краткое теоретическое обоснование основных принципов при разработке ПЦР-тест-системы для диагностики кампилобактериоза.
2.2.6.2. Изучение чувствительности и специфичности ПЦР-тест-системы для выделения и идентификации кампилобактерий подвида jejuni.160
2.2.7. Конструирование питательной среды для выделения и культивирования кампилобактерий 166
2.2.7.1. Сравнительное изучение разных питательных сред для культивирования кампилобактерий.166
2.2.7.2. Определение оптимального состава питательной среды на основе гидролизатов казеина.168
2.2.7.3. Изучение селективных свойств СПК.170
2.2.7.4. Изучение селективных и ростообеспечивающих свойств
СПК с использованием биологического материала.172
2.2.7.5. Сравнительное изучение ростообеспечивающих и селективных свойств СПК и сред для кампилобактерий фирмы "Oxoid" .173
2.2.7.6. Сравнительное изучение ростообеспечивающих и селективных свойств СПК и МППА.174
Обсуждение результатов собственных исследований . 179
Выводы.197
Практические предложения.199