Разработка ускоренных способов ДНК-диагностики для определения бактерий в мясе и мясопродуктах Мамаев, Максим Александрович

Короткий опис

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат ветеринарных наук Мамаев, Максим Александрович
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Бактериологический анализ мяса и мясопродуктов при ветеринарно-санитарной экспертизе и сертификации.
1.2. Сравнительная оценка методов ДНК-диагностики при индикации и идентификации микроорганизмов.
1.2.1. Гибридизация нуклеиновых кислот.
1.2.2. Амплификация генов.
2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Цель и задачи исследований.
2.2.Объекты и методы исследований.
2.2.1.Объекты исследований.'.
2.2.2.Методика бактериологического анализа мяса и мясопродуктов.
2.2.3 .Контаминация мяса и мясопродуктов микроорганизмами.
2.2.4.Выделение и очистка тотальных ДНК для идентификации бактерий.
2.2.5.Выделение и очистка ДНК с использованием гуанидинтиоизоционата.
2.2.6. Мечение тритием бактериальных ДНК методом ник-трансляции.
2.2.7.Мечение биотином бактериальных ДНК методом ник-трансляции.
2.2.8. Мечение ДНК методом рассеянной затравки.
2.2.9. Получение меченых ДНК-зондов с помощью полимеразной цепной реакции.
2.2.10.ДНК гибридизация на мембранных нитроцеллюлозных фильтрах с реперными, ДНК меченными тритием.
2.2.11. Точечная ДНК гибридизация на мембранных фильтрах с биотинилированными ДНК.
2.2.12. ДНК гибридизация с использованием тест-набора с ДНК-зондами, меченными биотином.
2.2.13. Методика полимеразной цепной реакции.
2.2.14. Статистическая обработка результатов.
2.3. Результаты исследований
2.3.1.Разработка модификации метода ускоренной идентификации бактерий на основе гомологии тотальных ДНК, меченных биотином.
2.3.2. Усовершенствование способа ускоренной индикации энтеробактерий в мясе и мясопродуктах на основе ДНК-зондов с возможностью дифференциации токсигенных форм.
2.3.3.Разработка модификации метода количественного определения бактерий, в мясе и мясопродуктах на основе ПЦР с мечеными дезоксинуклеозидтрифосфатами.
2.3.4. Сравнительная оценка результатов индикации и идентификации бактерий в мясе и мясопродуктах полученных, с помощью разработанных и общепринятых методов.
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ВЫВОДЫ.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.