Роль генетического обмена в формировании энтеротоксигенных вариантов вакцинных штаммов Escherichia coli Тихонова, Наталия Борисовна

Короткий опис

Тихонова, Наталия Борисовна.
Роль генетического обмена в формировании энтеротоксигенных вариантов вакцинных штаммов Escherichia coli : диссертация ... кандидата биологических наук : 16.00.03. - Моск. обл., п. Родники, 2004. - 124 с. : ил.
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат биологических наук Тихонова, Наталия Борисовна
1. Введение
2. Обзор литературы
2.1. Бактериальные токсины
2.1.1. Классификация
2.1.2. Строение
2.1.3. Распространение среди микроорганизмов
2.2. Генетика токсинообразования у Escherichia coli
2.2.1. Строение генов
2.2.2. Роль горизонтального обмена генетическим материалом в формировании токсического фенотипа
2.3. Борьба с токсикоинфекциями и роль вакцинопрофи-лактики
2.3.1. Современные вакцины
2.3.2. Особенности противотоксических вакцин
3.3.3. Биологическая безопасность вакцин
3. Материалы и методы 39 3.1. Получение препаративных количеств плазмидной
3.1.1. Культивирование штаммов Е. coli
3.1.1.1. Использовавшиеся штаммы Е. coli
3.1.1.2. Использовавшиеся плазмиды
3.1.1.3. Среды для культивирования микроорганизмов
3.1.2. Трансформация штаммов Е. coli плазмидной ДНК.
3.1.3. Выделение и очистка плазмидной ДНК
3.1.4. Электрофорез в агарозном геле и визуализация плазмидной ДНК
3.2. Клонирование генов
3.2.1. Расщепление плазмидной ДНК рестриктирующими эндонуклеазами
3.2.2. Выделения нужных1 фрагментов плазмидной ДНК из агарозных гелей
3.2.3. Обработка фрагментов ДНК нуклеазой S
3.2.4. Лигирование вектора со вставкой
3.4. Получение делении в гене.
3.5. Отбор штаммов, содержащих конъюгативные плазми
3.6. Введения вектора в бактерии-реципиенты с помощью мобилизации
3.6.1. Постановка триродителского скрещивания на плотной среде
3.7. Реакция двойной иммунодиффузии в агаровом геле по методу Ухтерлони.
3.8. Оценка токсичности штаммов Е. coli
3.9. Оценка протективной активности потенциально вакцинного штамма
4. Результаты
4.1. Клонирование оперона полноразмерного LT в плазмиду pBR
4.2. Клонирование детерминант А-субъединицы LT и В-субъединицы LT в плазмиду pBR
4.3. Введение делеции в А-субъединицу полноразмерного
4.4. Конструирование штамма Е. coli, содержащего детерминанту токсоида LT и систему рестрикции-модификации
4.4.1. Оценка эффективности мобилизации потенциального вектора в триродительском скрещивании
4.4.2. Введение детерминанты токсоида в плазмиду pSClOl
4.4.3. Получение штамма Е. coli, продуцирующего токсоид
4.4.4. Введение детерминанты, обеспечивающей биологическую безопасность потенциально вакцинного штамма
4.4.5. Контроль апатогенности полученной конструкции
4.5. Конструирование штамма Е. coli, содержащего детерминанту А-субъединицы LT.
4.5.1. Клонирование генов eltA и eltB в отдельные векторные плазмиды
4.5.2. Клонирование eltA в плазмиду pCRl
4.6. Оценка возможности восстановления токсической активности термолабильного токсоида при скрещивании штаммов
4.7. Оценка протективной активности рекомбинантного препарата
5. Обсуждение результатов
6. Выводы