Ставский Евгений Александрович. Совершенствование системы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности

Короткий опис

Ставский Евгений Александрович. Совершенствование системы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности : диссертация ... доктора медицинских наук : 03.00.06 / Ставский Евгений Александрович; [Место защиты: ФГУН "ГНЦ вирусологии и биотехнологии "Вектор""].- Кольцово, 2009.- 534 с.: ил.

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ВИРУСОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ “ВЕКТОР”

ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
На правах рукописи

Ставский Евгений Александрович
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ОБЕСПЕЧЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ РАБОТ С ВИРУСАМИ I-II ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
03.00.06 - вирусология; 14.00.30 - эпидемиология
Диссертация
на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Том I
Научный консультант:
доктор медицинских наук, профессор И. Г. ДРОЗДОВ
Кольцово - 2008 
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
Том I
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ 6
ВВЕДЕНИЕ 8
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 24
1.1. Биологические угрозы дестабилизации биологической безопасности Россий- 24
ской Федерации
1. 2, Общие принципы обеспечения биологической безопасности в микробиологи- 37
ческих лабораториях
1.3. Современное состояние и тенденции совершенствования биологической безо- 46
пасности при работах с микроорганизмами I-IV групп патогенности
1.3.1. Сравнительный анализ основных руководств по биобезопасности России, 46
США и ВОЗ •
1.3.2. Сравнительный анализ устройства, инженерно-технического оснащения и 79
организации работы в микробиологических лабораториях с высшим уровнем био¬безопасности Швеции, США, Франции, Швейцарии и Российской Федерации
1. 4. Внутри лабораторные заражения персонала 103
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 114
2.1. Вирусы 114
2.2. Бактериальные и вирусные препараты 114
2.3. Животные, РКЭ 115
2.4. Культуры клеток, питательные среды и сыворотки 115
2.5. Культивирование и получение очищенного вируса 115
2.6. Титрование вирусных препаратов 116
2.7. Проверка отсутствия остаточной инфекционности инактивированных препа- 117
ратов вирусов на новорожденных белых мышах
2.8. Определение виремии в пробах крови экспериментальных животных 117
2.9. Серологические реакции 118
2.10. Получение ДНК-зондов для определения РНК ВЭ 120
2.11. Оценка инфекционности и отбор проб 122
2.12. Иммунизация животных 122
2.13. Отбор крови у животных 122

2.14. Отбор и подготовка проб крови, фекалий, мочи и слюны животных 122 
2.15. Отбор смывов с поверхностей, из воздуха 123
2.16. Определение концентрации белка 124
2.17. Анализ физиологического статуса организма персонала, работающего в 124
ИСИЗ
2.18. Статистическая обработка результатов 125
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ ПРИ РАБОТАХ С ВИРУСАМИ 126
I-II ГРУПП ПАТОГЕННОСТИ
3.1. Сравнительный анализ методов определения защитной эффективности филь- 126 тров тонкой очистки воздуха с использованием аэрозолей диоктилфталата и тур¬бинного масла
3.2. Биологическая безопасность при работах с вирусом натуральной оспы 132
3.2.1. Обеспечение биологической безопасности при организации и проведении 132
работ с вирусом натуральной оспы
3.2.2. Контроль соблюдения требований биобезопасности при получении раэлич- 187
ных препаратов вируса натуральной оспы и остаточной инфекционности этих об¬разцов
3.2.2.1. Контроль соблюдения требований биобезопасности при выделении ДГІК 187
вируса натуральной оспы и ее остаточной инфекционности
3.2.2.2. Контроль соблюдения требований биобезопасности при выделении белков 194
вируса натуральной оспы и остаточной инфекционности приготовленных белковых препаратов
3.2.2.3. Контроль соблюдения требований биобезопасности при выделении реком- 196
бинантных плазмид, содержащих фрагменты ДНК вируса вируса натуральной ос¬пы, и определения их специфической контаминации
3.2.2.4. Контроль соблюдения требований биобезопасности при получении образ- 199
цов для электронной микроскопии и их остаточной инфекционности
3.3. Биологическая безопасность при работах с возбудителями геморрагических 203
лихорадок, комплекса клещевых энцефалитов, ВИЧ и других вирусных инфекций.
3.3.1. Обеспечение биологической безопасности при организации и проведении 203
работ с вирусами геморрагических лихорадок на примере возбудителей Эбола и Марбурга
3.3.2. Контроль соблюдения требований биобезопасности при получении различ- 252 ных вирусных препаратов, остаточной инфекционности и специфической конта-
минации этих образцов
3.4. Контроль специфической контаминации воздуха, поверхностей окружающей среды вирусами I-II групп патогенности
3.4.1. Контроль специфической контаминации вирусом натуральной оспы
3.4.2. Контроль специфической контаминации филовирусами
3.4.3. Контроль специфической контаминации высоко патогенным вирусом грип¬па А подвида H5N1
3.5. Организация и контроль качества проведения дезинфекционных мероприятий при работах с возбудителями вирусных инфекций I - II групп патогенности
3.6. Система организации и контроля эксплуатации СИЗ, ИСИЗ персонала, рабо¬тающего с высоко патогенными вирусами. Изучение физиологического статуса
организма персонала, работающего в ИСИЗ
ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНОСТИ ПРИМЕ¬НЕНИЯ НЕТКАНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ И ПРОИЗВОДСТВА СРЕДСТВ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЗАЩИТЫ ПРИ РАБОТЕ С ВОЗБУДИТЕЛЯМИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ, ВКЛЮЧАЯ ООИ
4.1. Экспериментальная оценка защитных свойств нетканых материалов, перспек¬тивных для изготовления одноразовой медицинской специальной одежды. Разра¬ботка защитной специальной одежды на основе нетканых материалов
4.2. Экспериментальная оценка защитных свойств нетканых материалов, перспек¬тивных для изготовления индивидуальных средств защиты органов дыхания
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА МЕР ЗАЩИТЫ ПЕРСОНАЛА ОПАСНОГО БИОЛОГИ¬ЧЕСКОГО ОБЪЕКТА, НАСЕЛЕНИЯ ПРИЛЕГАЮЩЕЙ К НЕМУ ТЕРРИТОРИИ ОТ ПРИРОДНЫХ, ТЕХНОГЕННЫХ И ТЕРРОРИСТИЧЕСКИХ УГРОЗ БИОЛО¬ГИЧЕСКОГО ХАРАКТЕРА
5.1. Разработка комплекса противоэпидемических мероприятий по защите опас¬ного биологического объекта и населения, прилегающей к нему территории, от особо опасной антропозоонозной инфекции на примере случая подозрительного на завозную легочную чуму
5.2. Анализ аварий, аварийных ситуаций на инженерно-технических системах био¬безопасности научно-лабораторных корпусов ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор” Роспотреб¬надзора при работах с вирусами I - II групп патогенности
5.3. Анализ случаев нарушения целостности ИСИЗ и внутри лабораторного зара¬жения сотрудников ФГУН ГНЦ ВБ “Вектор” Роспотребнадзора при работе с воз-
будителями вирусных инфекций I - II групп патогенности
5.4. Моделирование акта почтового биотерроризма, актов биотерроризма на тер- 348
ритории особо опасного биологического объекта и крупного города, а также ре¬зультатов их последствий
5.5. Экспериментальная оценка эффективности обеззараживания ускоренными 364
электронами образцов и предметов внешней среды, контаминированных или по¬тенциально контаминированных бактериальными и вирусными микроорганизма¬ми
5.6. Разработка комплекса защитных мероприятий от чрезвычайных ситуаций при 372 работах с возбудителями I-II групп патогенности, санитарной охране территории опасного биологического объекта от завоза, возникновения и распространения карантинных инфекций и при массовых эпидемических осложнениях, включая ак¬ты биотерроризма
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 427
ВЫВОДЫ 463
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 466
ТОМ И. ПРИЛОЖЕНИЕ - - -
ОГЛАВЛЕНИЕ 2
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. АНАЛИЗ ОБСТОЯТЕЛЬСТВ АВАРИЙ, ПОВЛЕКШИХ 3
ВНУТРИ ЛАБОРАТОРНЫЕ ЗАРАЖЕНИЯ ПЕРСОНАЛА ВИРУСАМИ ГЕМОР¬РАГИЧЕСКИХ ЛИХОРАДОК МАРБУРГ И ЭБОЛА, И ПРИНЯТЫХ В СВЯЗИ
ЭТИМ МЕР
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. КОСТЮМ “ВЕКТОР” ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОТ ПАТОГЕННЫХ 35
БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген АТ - антитело
Бел НИИ ЭиМ - Белорусский НИИ эпидемиологии и микробиологии
БОЕ - бляшкообразующие единицы
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВГЛ - вирусные геморрагические лихорадки
ВКЖ - вируссодержащая культуральная жидкость
ВНО - вирус натуральной оспы
ВЭ - вирус Эбола
ГЛПС — геморрагическая лихорадка с почечным синдромом
ДВС - диссеминированного внутрисосудистого свертывания (синдром)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДОФ - диоктилфталат
ИД - инфекционная доза
ИН - индекс нейтрализации
ИО — иммунный ответ
ИР - индекс резистентности
ИСИЗ - изолирующие средства индивидуальной защиты ИФА - иммуноферментный анализ ИФН - интерферон а К - контроль
Кп - коэффициент проскока КРС - крупный рогатый скот
КИПиА - контрольно-измерительные приборы и автоматика КК - культура клеток
ККГЛ - крым-конго геморрагическая лихорадка КОЕ - колониеобразующая единица КЭ - клещевой энцефалит ЛД - летальная доза
ЛД50 - летальная доза, вызывающая гибель 50% животных М3 — множественность заражения мкм - микрометр мм - миллиметр
ММАД - медиано-массовый аэродинамический диаметр МФА - метод флюоресцирующих антител МЭТ - меркаптоэтанол нм - нанометр
НМФА - непрямой метод флюоресцирующих антител
ОББ - отдел биологической безопасности
ОКИТС - отдел контроля инжнерно-технических систем
ООВИ - особоопасные вирусные инфекции
ООЕ - оспинообразующие единицы
ОП - оптическая плотность
ОСК - ограждающие строительные конструкции
ОФД - ортофенилендиамин
ПАФ - полный адъювант Фрейнда
pH - водородный показатель
ППР - планово- предупредительный ремонт
РКЭ - развивающиеся куриные эмбрионы
PH - реакция нейтрализации
РНК - рибонуклеиновая кислота
СИЗ - средства индивидуальной защиты
СИЗОД - средства индивидуальной защиты органов дыхания
ТИФА - твердофазный иммуноферментный анализ
ТМБ - тетраметилбензидин
ТЦПД50 - 50% тканевая цитопатогенная доза
ФТО - фильтр тонкой очистки
ФСБ-Т - фосфатно-солевой буфер с твином
ХАО РКЭ - хорион аллантоисная оболочка РКЭ
ЭТЦ - энерго-технологический цех
Введение
Проблема биологической безопасности вызывает все большую тревогу у населения, политиков и ученых в связи с реальным ростом биологических угроз. Биологическая безо¬пасность включает широкий круг вопросов, решение которых в современных условиях ста¬новится частью национальной безопасности как необходимого условия устойчивого разви¬тия страны. При этом согласно национальным нормативно-методическим документам под биологической безопасностью понимают систему медико-биологических, организационных и инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических аген¬тов [18, 26].
Среди биологических факторов дестабилизации биологической безопасности Россий¬ской Федерации и других стран мира определяющее значение имеет инфекционная патоло¬гия [106, 123, 156]. Поэтому на саммите "Группы восьми" в г. Санкт-Петербурге в 2006 г. данному аспекту биобезопасности было уделено значительное внимание. К началу XXI века около 70% всех регистрируемых болезней человека относились к инфекционным болезням и более 50 млн. человек на планете ежегодно погибали от инфекций [48, 49]. Среди инфекции- — онной патологии особую значимость приобрели особо опасные инфекции, новые [256, 257, 294, 386] и вновь возникающие инфекции [48, 72, 106, 123, 181, 381]. С 90-х г.г. отмечена активизация эндемичных очагов чумы с двукратным увеличением количества заболеваний чумой, с 1961 г. появились очаги нового биотипа холеры Эль-Тор, с 1992 г. холеры Бенгал. В последние десятилетия XX века впервые были выявлены такие заболевания, как легио¬неллез, геморрагические лихорадки Эбола, Марбург, JIacca [275, 291, 337, 354], геморраги¬ческой лихорадки с почечным синдромом, СПИД, прионовые заболевания и др. [49, 72, 120, 180, 181, 302, 349]. Произошла активизация туляремии, лихорадки Западного Нила [72, 132, 181]. Отмечены эпидемии атипичной пневмонии в Юго-восточной Азии, с 1997 г. заболева¬ния и гибель людей от заражения больной птицей при эпизоотии гриппа птиц типа А под¬типа H5N1 и др. [263, 264, 276, 306, 380]. Летом 2005 г. в Новосибирской области, а позднее в ряде других регионов России была зарегистрирована эпизоотия и массовая гибель птиц от вируса гриппа птиц типа А подтипа H5N1, занесенного перелетной птицей из Китая, но к счастью без вовлечения в эпидемический процесс человека [63, 72, 123, 132, 180, 155, 217]. В июле 2007 г. в городе Верхняя Пышма Свердловской области возникла эпидемическая вспы¬шка легионеллеза со смертельными исходами среди заболевших людей.
Кроме этого в мире в настоящее время сложилась крайне не благоприятная ситуация с заболеваемостью так называемыми социально-значимыми инфекциями (гепатиты В, С, ВИЧ/
СПИД, туберкулез). По некоторым оценкам в мире уже инфицировано вирусным гепатитом В около 2,0 миллиардов человек [14, 15, 28, 157, 316, 349]. В Российской Федерации число больных хроническим гепатитом В составляет 7-8 млн. человек [14, 15, 28, 73, 112]. К апре¬лю 1993 г. 1/3 населения планеты уже была инфицирована туберкулезом. Российская Феде¬рация с показателем заболеваемости 70,99 на 100 тыс. населения (2006 г.) относится к стра¬нам с относительно высоким уровнем заболеваемости. При этом 95,51% случаев заболеваний приходится на туберкулез органов дыхания (67,80 на 100 тыс. населения), в том числе, 42 % - на бациллярные формы [42, 105, 165, 269]. Глобальное ухудшение эпидемической ситуации по туберкулезу, в частности, на Африканском и Евро-Азийском материках, сопровождается широким распространением лекарственно-устойчивых микобактерий туберкулеза, в том чис¬ле, в Российской Федерации [42, 43, 195, 286, 336, 359, 381]. По данным ВОЗ заболеваемость СПИДом к началу XXI века приобрела масштабы пандемии (каждые 5 с на планете появлял¬ся новый случай ВИЧ-инфекции). По экспертным оценкам Объединенной Программы ООН по ВИЧ/СПИД и ВОЗ в мире в настоящее время насчитывается более 40 миллионов ВИЧ - инфицированных, из них только за последние 2 года заразилось ВИЧ 11,5 млн. человек, что составляет почти 30% от всех случаев, зарегистрированных с начала эпидемии. Более 22 млн. человек уже умерли от СПИДа. Россия с 2002 года находится в стадии генерализован¬ной эпидемии ВИЧ-инфекции и стоит в пятерке территорий мира после Африки, Индии, Ки¬тая и стран Юго-Восточной Азии по темпам прироста числа новых случаев ВИЧ - инфекции ежегодно [42, 194].
В условиях современного развития авиационного, железнодорожного, автомобильного и др. транспорта, возросших миграционных и туристических потоков в мире, роста числа бе¬женцев существуют реальные угрозы трансграничного переноса между странами различных вышеуказанных видов возбудителей инфекций, включая особо опасные. При этом как уже хорошо известных медицинским специалистам инфекций, так и ранее не известных, лекарст¬венно-устойчивых или с измененными патогенными свойствами. Кроме этого человечество относительно недавно столкнулось с новой угрозой - биотеррористическими атаками [71, 106, 154-157, 193]. За период с 1960 по 1999 г. в мире зарегистрировано 66 преступлений и 55 террористических актов, в которых использовались биологические агенты. Однако ни од¬на попытка их применения с целью массового поражения не оказалась успешной. Тем не ме¬нее, восемь преступлений привели к гибели среди гражданского населения 29 человек [313]. В результате случаев почтового биотерроризма в США этот список пополнился еще пятью жертвами. Эти события показали, что мировое сообщество пока не готово к адекватному ре¬агированию на случаи террористического применения инфекционных патогенов и обречено в связи с этим нести лодские, а также огромные экономические и политические потери [48, 49, 106, 156, 297, 315, 333]. В связи с этим рядом исследователей были предприняты шаги по оценке вероятности использования некоторых возбудителей инфекционных болезней в ка¬честве бактериологического оружия [47, 48, 154-156, 169, 241], а также попытки моделиро¬вания различных сценариев актов биотерроризма для прогнозирования и оценки масштабов их последствий в интересах разработки адекватных и достаточных мер предупреждения или ликвидации их последствий на местных, региональных и общегосударственных уровнях [342, 343]. В Российской Федерации также предпринимались попытки прогнозирования пос¬ледствий возможных чрезвычайных ситуаций биологического характера [71]. В интересах противодействия почтовому биотерроризму рядом исследователей оценивалась возможность использования пучка ускоренных электронов для обеззараживания образцов, зараженных бактериями [7]. В отношении образцов, зараженных вирусами, в известной литературе нет сведений.
Вышеизложенные факты обусловили признание проблемы противодействия биоло¬гической опасности и обеспечения биологической безопасности, в целом, в качестве важ¬нейшего направления укрепления национальной безопасности Российской Федерации, что нашло свое отражение в ряде федеральных документов. В_частности,-Федеральном Законе “О безопасности” (1992 г.); “Основы государственной политики в области обеспечения хи¬мической и биологической безопасности Российской Федерации на период до 2010 года и дальнейшую перспективу” (2003 г.); Постановление Правительства Российской Федерации № 64 “О правительственной комиссии по вопросам биологической и химической безопас¬ности Российской Федерации” (2005 г.); Постановление Правительства Российской Федера¬ции № 303 “О разграничении полномочий федеральных органов исполнительной власти в области обеспечения биологической и химической безопасности Российской Федерации” (2005 г.); Концепция федеральной целевой программы "Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013 годы)", утвержденной рас¬поряжением Правительства Российской Федерации от 28 января 2008 г. № 74-р. Кроме этого возникла необходимость разработки законодательных, нормативно-методических докумен¬тов, соответствующей рабочей инструктивно-методической документации, регламентирую¬щих проведение активных действий по изучению возбудителей инфекционных заболеваний в интересах создания средств профилактики, диагностики и лечения вызываемых ими ин¬фекционных заболеваний. Дальнейшего развития и совершенствования медико-биологичес- ких, организационных, инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на
защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических агентов, а также системы обучения персонала [158].
Как известно, техника безопасности при проведении исследований с высоко патоген¬ными микроорганизмами включает два основных фактора - технический и человеческий [70,186]. Технические элементы представляют собой систему первичных и вторичных за¬щитных барьеров [50, 51, 70, 186]. Человеческий фактор определяется уровнем подготовки и обучения безопасным методам работы с возбудителями инфекционных заболеваний персо¬нала лабораторий, знанием возможных источников заражения, и таким образом, тесно кор¬релирует с опытом проведения таких исследований [70, 186, 383, 384]. Важнейшей особен¬ностью исследований, проводимых в вирусологических лабораториях, является потенциаль¬ная опасность инфицирования персонала, контактирующих с персоналом лиц и окружающей среды объектами исследования [70, 265 - 268, 278]. При этом отличительной особенностью для вирусологических лабораторий является отсутствие универсальных средств терапии, ка¬ковыми являются антибиотики в случае бактериальных и риккетсиозных заболеваний, и средств специфической профилактики для большинства открытых в последние десятилетия возбудителей вирусных инфекций.
Накопление знаний о природе микроорганизмов привело к появлению специализиро-_ ванных по техническому оснащению лабораторий для изучения возбудителей инфекционных заболеваний различной природы [51, 70]. К вирусологии в последние десятилетия тесно при¬мыкают новые научные дисциплины молекулярная биология и генетическая инженерия, объ¬ектом исследований, которых служит генетический материал (РНК и ДНК) микроорганиз¬мов. Работы по выделению генетического материала и его использованию, особенно высоко патогенных возбудителей, получению генетически модифицированных микроорганизмов (ГММ) также требуют обеспечения надежной биологической безопасности [20-22, 106, 210, 211].
К моменту начала активных работ по изучению биологии вирусов 1-Й групп патоген¬ности российские научно-исследовательские учреждения различных ведомств столкнулись с проблемой практически полного отсутствия или устаревших нормативных и инструктивно¬методических документов, в которых были бы четко изложены вопросы организации и безо¬пасного проведения работ с этими вирусами в лабораториях. В частности, с вирусом нату¬ральной оспы (1994-1995 г.г.). В этот период времени вирусологи могли использовать только федеральные инструкции по лабораторной диагностике натуральной оспы, по организации и проведению дезинфекционных мероприятий при натуральной оспе, по проведению обяза¬тельных прививок против натуральной оспы, по проведению мероприятий в случае заноса
натуральной оспы, разработанные в 1972-1976 г.г. [83-88, 172]. Однако, указанные докумен¬ты к этому времени безнадежно устарели и также не содержали никаких указаний и реко¬мендаций по вопросам организации и безопасного проведения работ в лабораторных усло¬виях. В том числе по таким важным аспектам, как работам с животными, по методам подго¬товки и контроля использования средств индивидуальной защиты персонала, по проведе¬нию дезинфекции и контролю ее эффективности, по контролю работоспособности инженер¬но-технических систем биобезопасности, по предупреждению аварий, аварийных ситуаций и ликвидации их последствий при работах с вирусами и т.п. На основе известных литератур¬ных источников не было возможным произвести выбор наиболее безопасного и рутинного для вирусологической практики способа заражения хорион-аллантоисной оболочки (ХАО) РКЭ. Были известны два способа заражения ХЛО РКЭ [134, 204]. При первом способе при подготовке РКЭ и инфицировании использовали ножницы, пинцеты, шприцы, стеклянные колпачки или крышечки от стеклянного бюкса [134, 204]. При втором способе - копья, спе¬циальные пилочки, фрезы (диски) бормашины и саму бормашину, иглы, стеклянные шпри¬цы, покровные стекла [134, 204]. Применение этих средств в условиях “заразной” зоны было травмоопасным для персонала и повышало процент отбраковки РКЭ. Необходимо было от¬работать менее травмоопасный для персонала и РКЭ-метод. Действующие-на тот период времени Санитарные правила [16] содержали, к сожалению, только ограниченный набор об¬щих принципов и требований, необходимых для организации и проведения работ с ПБА І-ІІ групп патогенности.
В учреждениях, работающих с патогенными микроорганизмами, для высокоэффекти¬вной очистки воздуха в вентиляционных и технологических системах, являющихся одними из основных инженерно-технических систем биобезопасности, применяют различные типы фильтров тонкой очистки воздуха [52, 54, 166, 284, 285]. Контроль задерживающей способ¬ности этих фильтров осуществляют с помощью различных методов и тест-аэрозолей [52, 69]. При этом в разных государствах предпочтение отдают какому-то одному из них. В Англии стандартным является метод проверки фильтров по аэрозолю красителя метиленого синего [255], в Германии - с применением аэрозоля турбинного масла [284, 285]. В США для оценки задерживающей способности фильтров тонкой очистки типа НЕРА (High Efficiency Particulate Air Filter), применяющихся в аналогичных учреждениях для тех же целей, исполь¬зуют аэрозоль диоктилфталата (ДОФ) в стационарных и мобильных установках [284, 285, 368, 369]. В России в качестве стандартных используют методики с применением бактери¬альных тест аэрозолей, масляного тумана или других тестов [16, 59]. При этом в качестве ос¬новного применяется до настоящего времени метод с использованием бактериального тест аэрозоля, который позволял испытывать фильтры, как на специальном стационарном стенде, так и после его монтажа в систему и испытания по месту установки без демонтажа из систе¬мы [17]. Применение масляного тумана для оценки фильтров тонкой очистки воздуха огра¬ничивалось, в том числе, и, в ГНЦ ВБ “Вектор”, рамками испытаний фильтров на специаль¬ных стационарных стендах в связи с отсутствием подобных мобильных отечественных уста¬новок. В связи с ростом с конца 90-х годов международного сотрудничества между ведущи¬ми биологическими отечественными и зарубежными центрами, а также приобретением Рос¬сийской Федерацией зарубежного защитного лабораторного оборудования (различных типов “ламинарных” шкафов, биокабинетов и т.п., оснащенных НЕРА-фильтрами) встал вопрос по проведению научных исследований и экспериментов в одинаковых или сопоставимых лабо¬раторных условиях. В том числе и по степени очистки подаваемого (в) или удаляемого из Ра¬бочей зоны лаборатории воздуха, адекватности и корректности получаемых результатов ат¬тестации различных фильтров тонкой очистки воздуха с помощью российских методов и тест аэрозолей показателям, получаемым с помощью международных методов и тест аэрозо¬лей. Однако в известной нам литературе эти вопросы не были освещены.
Имеющиеся в доступной литературе данные об устройстве, инженерно-технических системах биобезопасности, о методах организации и проведения работ с патогенами, средст¬вах индивидуальной защиты персонала в микробиологических лабораториях устарели [50, 51, 69]. Материалы о современном состоянии указанных вопросов в новейших зарубежных лабораториях с высшим уровнем биологической безопасности, а также данные о тенденциях в области обеспечения биологической безопасности в этих лабораториях мало доступны, но¬сят разрозненный характер и мало информативны. Однако они необходимы для организации и проведения работ с патогенами в российских лабораториях согласно современным требо¬ваниям. В частности, проведения комплекса инженерных мероприятий по снижению риска воздействия опасных биологических факторов на население, производственную и социаль¬ную инфраструктуру и экологическую систему при эксплуатации опасных объектов. Совер¬шенствованию систем контроля, управления, в том числе автоматической противоаварийной защиты технологических процессов, обеспечению эффективного функционирования дежур¬но-диспетчерской службы предприятий. Разработке для опасных объектов экономически приемлемых технологий, исключающих или в максимальной степени снижающих использо¬вание в технологическом цикле патогенных микроорганизмов или минимизирующих их не¬гативное воздействие на население, производственную и социальную инфраструктуру и эко¬логическую систему; по гармонизации нормативно-правовой базы Российской Федерации в области обеспечения биологической безопасности с нормами международного права, между-
народными договорами и соглашениями, участницей которых является Российская Федера¬ция, в области обеспечения биологической безопасности.
В Российской Федерации известны различные виды защитной одежды для работы с микроорганизмами I-IV групп патогенности (противочумный костюм, “Биотехнолог”, “СКБ”, “Кварц” и др.), изготовленные из натуральных, искусственных или смешанных тка¬ней [17, 35-37, 69, 205]. Указанные СИЗ являются многоразового применения и после каж¬дого использования в работе требуют проведения соответствующих циклов их обеззаражи¬вания и стирки [38, 69,200]. В настоящее время на основе нетканых материалов типа “Melt - Blown”, “Spanbond” и др. за рубежом и в нашей стране изготавливают защитную одежду медицинского назначения разового применения [4]. Однако в доступной литературе отсут¬ствуют сведения, как о защитной эффективности нетканых материалов, так и самой защит¬ной спецодежды медицинского назначения, изготовленной на их основе.
Безопасные условия проведения работ с высоко патогенными вирусами в лаборато¬риях безусловно обеспечиваются не только использованием инженерно-технических средств и наличием хорошо подготовленного, обученного персонала к выполнению обычных работ и к ликвидации последствий аварий, но и осуществлением ряда контрольных мероприятий. В частности,-контроль соблюдения персоналом-требований биологической безопасности, кон¬троль за эффективностью работы инженерных систем защиты, контроль полноты инактива¬ции передаваемых из “заразной” части лаборатории материалов, выявление потенциально опасных лабораторных операций, контроль специфической загрязненности лабораторных помещений и т.п. При этом вопросы разработки методов экстренной диагностики и контроля специфической загрязненности нуждаются в специальной разработке для каждого конкрет¬ного вирусного возбудителя. В связи с относительной сложностью и длительностью индика¬ции и идентификации вирусных патогенов в ряде случаев целесообразно оценивать эффек¬тивность текущих и заключительных дезинфекционных мероприятий по санитарно-показа¬тельной микрофлоре или специально подобранным тест бактериям, обладающим заведомо большей устойчивостью к инактивирующему воздействию, чем возбудитель, против которо¬го направлены мероприятия.
Таким образом, высокий общественный и индивидуальный уровень опасности виру¬сов I-II групп патогенности и вызываемых ими инфекций, способных к эпидемическому и пандемическому распространению, риск высвобождения из лабораторий искорененных, искореняемых или редких особо опасных инфекций (вирусы оспы, полиомиелита, Марбург, Эбола, бактерии чумы и т.п.), интенсификация и рост объемов трансграничных людских и материальных потоков, недостаточный уровень разработки или отсутствие нормативной и
инструктивно-методической документации, регламентирующей работы с вирусами I-II групп патогенности, необходимость гармонизации и унификации национальных руководств по биобезопасности с международными, необходимость совершенствования средств защиты персонала и технического устройства российских медико-биологических лабораторий до современного уровня зарубежных, отсутствие программ обучения персонала, работающего с особо опасными вирусами, угрозы биотерроризма с применением указанных вирусов яви¬лись актуальным основанием для проведения данной исследовательской работы.
Целью настоящем работы явилось оценка современного состояния биологической безопасности в микробиологических лабораториях и совершенствование национальной сис¬темы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности. В связи с этим задачами исследований являлись:
1. Сравнительный анализ современных тенденций в развитии теории и практики совершен-ствования систем обеспечения биологической безопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности на примере микробиологических лабораторий с высшим уровнем био¬безопасности Швеции, США, Франции, Швейцарии и России.
2. Разработка нормативных документов федерального уровня, регламентирующих требова- - ния биологической безопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности. _ •
3. Разработка инструктивно-методической документации внутри объектового уровня, деталь-но регламентирующей обеспечение требований биобезопасности при работах с вирусами I-II групп патогенности.
4. Разработка методов безопасного проведения работ с вирусами І-П групп патогенности, средств защиты и контроля систем обеспечения биобезопасности этих работ.
6. Разработка мер предупреждения и защиты персонала крупного национального вирусоло¬гического и биотехнологического опасного биологического объекта (ФГУН ГНЦ ВБ “Век¬тор”), населения прилегающей к нему территории (р. п. Кольцо во, г. Новосибирска) от при¬родных, техногенных угроз биологического характера и актов биотерроризма:
- организация и проведение комплекса экстренных карантинных и обсервационных меро¬приятий в ГНЦ ВБ “Вектор” при случае подозрительном на завозную легочную чуму;
- анализ аварий и аварийных ситуаций при работах вирусами I-II групп патогенности;
- разработка комплекса противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий по преду¬преждению и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций и аварий при выполнении работ с возбудителями I-II групп патогенности, санитарной охране территории, прилегаю¬щей к ГНЦ ВБ “Вектор” от завоза, возникновения и распространения карантинных инфек¬ций, а также последствий актов биотерроризма;
- экспериментальная оценка обеззараживания ускоренными электронами образцов и пред¬метов внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных виру¬сами.
7. Оценка перспектив применения математического моделирования некоторых сценариев возможных биологических терактов в интересах прогнозирования, разработки мер противо¬действия и ликвидации их последствий.
8. Разработка программ обучения персонала, привлекаемого к работам с вирусами I-II групп патогенности.
Научная новизна, полученные результаты.
1. Проведено сравнительное изучение Российских Санитарных Правил с Руководствами по биобезопасности США и ВОЗ, регламентирующими работу с патогенами в медико-биологи¬ческих лабораториях. Проведен анализ практики применения основных положений указан¬ных руководств в современных и новейших лабораториях с высшим уровнем биобезопасно¬сти США, Швеции, Франции, Швейцарии и России. Создана информационная база сравне¬ния национальных и международных руководств по биобезопасности, а также устройства, оснащения, организации и проведения работ с патогенами в отечественных и зарубежных
— лабораториях. На ее основе выявлено более 20 возможных.направлений гармонизации и уни¬фикации национальных и международных правил по биобезопасности, а также определены тенденции совершенствования устройства лабораторий и биологической безопасности в них.
2. Получены экспериментальные данные, позволившие сформулировать требования и прави¬ла, регламентирующие работу с вирусами I-II групп патогенности:
- впервые показана адекватность примеиения аэрозолей ДОФ и турбинного масла для оценки эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с помощью разработанной мобильной ус¬тановки;
- установлено негативное воздействие на деятельность сердечно-сосудистой системы, орга¬нов дыхания и температурный статус у персонала, работающего в ИСИЗ, что привело к необ¬ходимости нормирования продолжительности работы в них, а также совершенствованию си¬стемы подбора кадров и оценки их пригодности к работам в ИСИЗ;
- продемонстрирована обеззараживающая активность дезинфицирующих и лизирующих рас¬творов, использующихся для получения препаратов особо опасных вирусов с целью их вы¬носа из “заразной” зоны.
- определена динамика инактивации вируса натуральной оспы растворами перекиси водоро¬да и едкого натра;
- определен уровень обсеменённости крови, слюны и экскретов экспериментально инфици¬рованных филовирусами животных. Установлено, что наибольший титр вируса Марбург наблюдался в крови (7,0-9,5 lg ЛД50). В слюне, моче и кале концентрация вируса была су¬щественно ниже - на уровне 2,3 - 3,5 lg ЛД50, при этом титр вируса в моче и кале был оди¬наков и достоверно превышал содержание вируса в слюне. Показано, что наибольшую уг¬розу заражения для персонала, работающего с филовирусами, представляет кровь инфи¬цированных ими животных.
3. Разработай комплект инструктивно-методических документов, регламентирующих безо¬пасное проведение работ с вирусами I-II групп патогенности в крупном национальном виру¬сологическом и биотехнологическом опасном биологическом объекте (ГНЦ ВБ “Вектор”), а также усовершенствованы внутри объектовые системы контроля обеспечения биобезопасно¬сти указанных работ:
- система контроля над организацией и проведением работ с вирусами I-II групп патогенно¬сти;
- система контроля качества текущих и заключительных дезинфекционных мероприятий в “заразной” зоне;
система контроля соблюдения требований биобезопасности при получении.различных пре¬паратов вирусов ООИ и оценки остаточной их инфекционности при выносе из “заразной” зоны;
- усовершенствована система контроля и оценки эффективности функционирования инже¬нерно-технических систем биобезопасности;
- система организации и контроля эксплуатации ИСИЗ персонала, работающего с высоко па¬тогенными вирусами;
- система предупреждения и ликвидации последствий аварий и аварийных ситуаций.
4. Экспериментально в статических и динамических условиях, впервые оценена проницае¬мость нетканых материалов Спанбонда, СМС, Сонтары, типа “Tyvek” с использованием фи¬зических и биологических тест аэрозолей. Показано, что повышение плотности и ламиниро¬вание материалов повышает их защитные бар

Список літератури

выводы
I .Выявлено более 20 основных различий между российскими, американскими и руковод¬ствами ВОЗ по биологической безопасности и определены приоритетные направления гар¬монизации и унификации национальных и международных правил биобезопасности. Уста¬новлены основные тенденции совершенствования устройства лабораторий с высшим уров¬нем биобезопасности, а также организации и проведения в них работ с патогенными для человека микроорганизмами.
2. Усовершенствованы с использованием полученных теоретических и экспериментальных данных и существенным образом адаптированы к современным требованиям биобезопасно¬сти нормативно-методические документы федерального уровня по работе с ПБА I-II групп патогенности.
3. Разработан комплект инструктивно-методической документации, детально регламентиру¬ющей безопасное проведение работ с вирусами I-II групп патогенности и обеспечение необ¬ходимых требований биобезопасности на конкретном вирусологическом и биотехнологичес¬ком опасном биологическом объекте.
4. Оптимизирован комплекс элементов системы обеспечения безопасности работ с вирусами I-II групп патогенности:
- порядок организации и осуществления контроля соблюдения требований биобезопасности при работах с нативными вирусами и зараженными ими биологическими моделями (культу¬ры клеток, РКЭ, лабораторные животные);
- порядок проведения контроля и оценки эффективности функционирования инженерно-тех-нических систем биобезопасности;
- организация контроля соблюдения требований биобезопасности при получении различных вирусных препаратов возбудителей ООП и оценки остаточной их инфекционности при выно¬се из “заразной” зоны;
- оценка эффективности дезинфекционных мероприятий, проводимых в “заразной” зоне;
- порядок организации и контроля эксплуатации СИЗ, ИСИЗ персонала.
5. Разработан комплекс организационных, противоэпидемических и дезинфекционных меро¬приятий, направленных на предупреждение и ликвидацию последствий чрезвычайных ситу¬аций и аварий при выполнении работ с возбудителями I-II групп патогенности, предупреж¬дение вирусных заболеваний населения территорий, расположенных вблизи опасного биоло¬гического объекта, завоза карантинных инфекций, а также возможных актов биотерроризма.
5. Усовершенствован метод определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с использованием в качестве тест аэрозоля тумана турбинного масла с помощью раз¬работанной ГНЦ ВБ “Вектор” мобильной установки. Впервые в реальных условиях без де¬монтажа из технологических систем проведен сравнительный анализ методов определения защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха с применением аэрозолей тур¬бинного масла и диоктилфталата (ДОФ). Фракционно-дисперсные характеристики указан¬ных аэрозолей идентичны (ММАД аэрозольных частиц ДОФ составил 0,19 - 0,36 мкм, а турбинного масла - 0,17 - 0,34 мкм; количество частиц данных размеров составило 97,7 ± 2,3% и 98,6±1,6%, соответственно), что позволяет получать равные показатели коэффициен¬тов проницаемости фильтров тонкой очистки воздуха для указанных тест аэрозолей. Данные экспериментов продемонстрировали равнозначность применения тест аэрозолей ДОФ и тур¬бинного масла для оценки защитной эффективности фильтров тонкой очистки воздуха.
6. Впервые экспериментально в статических и динамических условиях определена проница¬емость нетканых материалов (Спанбонда, СМС, Сонтары, Тайвек с плотностью 15-64 г-м’2) с использованием физических и биологических тест аэрозолей. Установлена различная сте¬пень их проницаемости. Увеличение плотности исследуемых материалов, их ламинирование повышают защитные барьерные свойства тканей по сравнению с обычными тканями защит¬ной медицинской одежды многоразового применения. Материалы СМС, Тайвек, Сонтара в динамическом режиме продемонстрировали более высокие барьерные свойства (Кп <1,0 %), чем хлопчатобумажная ткань (К„ - 61,4%), или вискозно-полиэфирная ткань (Кп - 10 - 12%). Показана перспективность-применения-нетканых материалов для изготовления трех-пяти- слойных защитных медицинских масок (К„ биологического аэрозоля для всех испытанных нетканых материалов масок составили менее 1,0 % и приближались к аналогичным показа-телям материала ФПП-15-1,5 респиратора “Лепесток-200”).
7. Разработан на основе нетканых материалов костюм “Вектор” для защиты от патогенных биологических агентов (Патент РФ RU на полезную модель 54519, Россия, 2005).
8. Установлено, что в процессе трудовой нагрузки у сотрудников, использующих от 2-х до 5-ти лет ИСИЗ, изменялось функциональное состояние сердечно-сосудистой системы по ги- пертензивному или гипотензивному типу (33,2% и 2,4%, соответственно). Систематическое перегревание при работе в ИСИЗ приводило к усилению у них легочной вентиляции и сни¬жению на 18% величины коэффициента утилизации кислорода в легких. Повышение сред¬невзвешенной температуры кожи и температуры “ядра” тела у сотрудников свидетельство¬вало об изменении в сторону перегрева терморегуляторного статуса их организма.
9. Показано, что основное количество аварий, аварийных ситуаций и технических неисправ¬ностей на инженерно-технических системах биобезопасности корпусов с высшим уровнем биобезопасности было связано с повреждением ограждающих строительных конструкций, приточно-вытяжной вентиляции, системы спецканализации, сбора и обработки стоков и си¬стемы передаточных устройств. Наиболее травмоопасной зоной работы персонала, связан¬ной с повреждением целостности пневмокостюмов и кожных покровов сотрудников явля¬ется виварий (84,9% и 85%, соответственно).
10. Экспериментально установлено, что при вскрытии конверта, содержащего 0,5 г порошка спор, в радиусе одного метра образуется аэрозоль с концентрацией 7,0-104 клеток-дм'3, а на руках человека, вскрывавшего конверт, остается 1,5-108 бактериальных клеток. На основе по¬лученных данных разработана математическая модель распространения аэрозоля в закрытом помещении. На примере возможных сценариев актов биотерроризма с применением вируса натуральной оспы на территории опасного объекта и крупного города методами математи¬ческого моделирования определены количественные характеристики зон поражения, дина¬мика эпидемического распространения натуральной оспы за пределы очага заражения.
11. Экспериментально впервые показана возможность использования пучка ускоренных электронов для обеззараживания образцов, зараженных вирусами, а также бактериями, в ин¬тересах противодействия почтовому биотерроризму. Полная стерилизация жидких и сухих бактериальных образцов достигалась при поглощенных дозах 15 - 20 кГр, сухих и жидких вирусных образцов - при дозе не менее 40 кГр. Определен диапазон рабочих доз облучения, не приводящих к нарушению функциональных или потребительских свойств облучаемых предметов и образцов (50 — не более 200 кГр). Показана стерилизующая эффективность отра¬ботанного и внедренного в практикурежима облучения одноразовой-медицинской одежды пучком ускоренных электронов на установке ИЛУ-б (средняя поглощенная доза составила 18 ± 3,0 кГр).
12. Разработаны на основе полученных теоретических и экспериментальных данных учебные программы, используемые в сертифицированном обучении персонала вирусологических ла¬бораторий, осуществляющих работы с вирусами 1-IV групп патогенности.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Агафонов А.П. Изучение иммуногенных и протективных свойств препаратов вируса Мар¬бург: Дисс. канд. биол. наук. - Кольцово, 1996. - 216 с.
2. Аграновский И.Е., Сергеев А.Н., Пьянков О.Е., Петрищенко В.А., Агафонов А.ГІ., Игнать¬ев Г.М., Бородулин А.И., Сафатов А.С. Тестирование нового персонального пробоотборника для обнаружения жизнеспособных вирусов в аэрозоле // Оптика атмосферы и океана. - 2004. -Т.17,.№ 5-6. -С. 483-487.
3. Ажаев А.Н. Обоснование физиологических критериев оценки функционального состояния организма человека в условиях высоких температур окружающей среды // Физиология чело¬века. - 1986. - № 2. - С. 289-295.
4. Азейштейн Э.М. Производство химических волокон: новые скорости, новые возможно¬сти. // www.TextileClub.ru
5. Александров B.C., Беркутов А.В., Бачинский А.Г., Бородулин А.И., Криницын J1.A., Мар- тынюк Р.А., Нетесов С.В., Попов А.С., Сандахчиев Л.С., Сафатов А.С., Ставский Е.А. Проб¬лемы защиты населения Сибирского региона от природных и техногенных угроз биологи¬ческого характера // Материалы науч.- практич. конф. “Дальнейшее совершенствование при¬родной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий — устойчивое разви¬тие Сибирского региона” (15 сентября 2004 г.). - Новосибирск: Агентство “Сибпринт”. - С. 26-27.
6. Акинфеева Л. А., Аксёнова О. И., Василевич И. В. и др. Случай вирусной геморрагической лихорадки Эбола // Инфекционные болезни.-2005.-тЗ.- № 1.-С.85-88.
7. Ауслендср В.Л, Ведерников В.А., Грачев М.А. и др. Стерилизация почтовой корреспон¬денции промышленным ускорителем электронов // ДАН. - 2002. - Т.385, № 3. - С. 412-415.
8. Ауслендер В.Л, Горбунов В.А., Зайцев Б.Н., Кругляков Э.П., Культенко О.В., Нетесов С.В., Ренау И.В., Сербии В.И., Ставский Е.А., Ткаченко В.О., Черный Н.Б. Обеззараживание ускоренными электронами предметов, образцов и проб внешней среды, контаминированных или потенциально контаминированных бактериальными и вирусными микроорганизмами // Проблема инфекции в клинической медицине:Тез. докл. науч. конф. и VIII съезда Итало - Российского общества по инфекционным болезням (5-6 декабря ,2002 г.,). - С. 23.
9. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследова¬ниях. - Ленинград, 1962. - 180 с.
10. Бавро Г.В., Городинский С.М., Кузнец Е.И. Номограмма для определения оптимальных, допустимых и предельных тепловых состояний организма человека при выполнении физии- ческой работы // Медико-технические проблемы индивидуальной защиты человека: Сб. ста¬тей. - М., 1969. - № 6. - С. 1-14.
11. Бажутин Н.В., Беланов Е.Ф., Спиридонов В.А., Войтенко А.В., Кривенчук Н.А., Кротов С.А., Омельченко Н.И., Терещенко А.И., Хомичев В.В. Характеристики экспериментальной инфекции Марбург у зеленых мартышек // Вопросы вирусологии. - 1992 .- Т. 37, № 3. - С. 153-156.
12. Бакулов И.А., Кокурин В.А., Котляров В.М., Ермаков А.Ф. Установка ВНИИВВиМ для сточных вод // Ветеринария. - 1983. - № 3. - С. 28 - 30.
13. Батова Л.К., Мотина Г.Л. Корреляционный анализ методов определения эффективности фильтров для стерилизации воздуха. // Хим. — фарм. журн. - 1977. - № 9, С. 128 - 132.
14. Баяндин Р. Б., Шустов А. В., Кочнева Г. В., и др. Генотипическое разнообразие изолятов и факторы риска инфекции вирусом гепатита В у отдельных групп населения Новосибирской области// Инфекционные болезни. - 2004.- № 3. - С. 39-44.
15. Баяндин Р .Б., Шустов А. В., Кочнева Г. В.и др. Частота встречаемости маркеров, распре¬деление генотипов и факторы риска вирусного гепатита В среди пациентов инфекционного отделения гордской больницы г. Барнаула // Инфекционные болезни.- 2007,- T.5, № 1.- С. 5-
16. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности: Санитарные правила. СП 1.2.011—94,- М.: Госкомсанэпиднадзор России,1994 г.
17. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности): Санитар¬ные правила. СП 1,3.1285-03. - Москва: Министерство здравоохранения Российской Федера¬ции,2003, 152 с.
18. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами: СП
1. 2.731-99. - М.: Госкомсанэпиднадзор России,1999 г.
19. Беланов Е.Ф., Мунтянов В.П., Крюк В.Д., Соколов А.В., Бормотов Н.И., Пьянков О.В., Сергеев А.Н. Сохранение инфекционности вируса Марбург на поверхностях и в аэрозоли // Вопросы вирусологии. - 1996,-Т. 41, № 1,- С. 32-34.
20. Белявская В.А. Конструирование лечебно-профилактических препаратов на основе жи¬вых генетически модифицированных микрорганизмов.: Диссерт. Доктора биол. наук,- Кольцово, 2000. - 305с.
21. Белявская В.А., Кагаперова T.A., Бондаренко В.М., Ильичев А.А., Сорокулова И.Б., Ма¬лик Н.И. Экспериментальная оценка биобезопасности генно-инженерных бактерий на моде¬ли штамма Bacillus subtilis, продуцирующего интерферон // Журн. микробиологии, эпиде¬миологии и иммунобиологии. - 2001. - № 2. - С. 19-20.
22. Белявская В.А., Ромашева Н.Г., Сорокулова И.В., Ильичев А.А., Нестеров А.Н., Подкуйко В.В., Михайлов В.В. Разработка технологии получения таблеточной формы препарата Субалин // Биотехнология. - 2001 .- №2,- С. 10-15.
23. Березин В.В., Столбов Д.Н., Зимина Ю.В. Влияние естественных факторов на заболеваемость Крымской геморрагической лихорадкой // Арбовирусы: Материалы 16 научной сессии ИПВЭ АМН СССР. - М., 1969 г., вып. 2. - С. 118-120.
24. Березии В.В.. Чумаков М.П., Столбов Д.Н., Бутенко А.М. К вопросу о естественных хозяевах вируса Крымской геморрагической лихорадки в Астраханской области // Вирусные геморрагические лихорадки: Труды ИПВЭ АМН СССР.- М., 1971. - Т. 19. - С.210-220.
25. Бешенство (Rabies, Lyssa) (гидрофобия).
JIeKUHH.http://www.agroline.ru/otrasl/vet/chast/Beshen/lekc-besh.htm
26. Биологическая безопасность. Термины и определения. // Под ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева. - Саратов: «Приволжское книжное издательство», 2006. -112 с.
27. Бияшев К.Б. и др. Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы с болез¬нями животных. — Новосибирск, 1997.
28. Бондаренко А. Л. Исходы и лечение хронического гепатита В // Инфекционные болезни.- 2005,-Т. 3, №4,-С. 44-53.