Изучение взаимодействия белка VPR вируса иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1) с клеточными структурами и белками ВИЧ-1 в процессе формирования вирусоподобных частиц Чикова, Анна Константиновна

brief description

Чикова,АннаКонстантиновна.ИзучениевзаимодействиябелкаVPRвирусаиммунодефицитачеловекапервоготипа(ВИЧ-1)склеточнымиструктурамиибелкамиВИЧ-1впроцессеформированиявирусоподобныхчастиц: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1998. - 115 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВИРУСОЛОГИИ ИМЕНИ Д.И. ИВАНОВСКОГОЧИКОВААннаКонстантиновнаИЗУЧЕНИЕВЗАИМОДЕЙСТВИЯБЕЛКАУРКВИРУСАИММУНОДЕФИЦИТАЧЕЛОВЕКАПЕРВОГОТИПА(ВИЧ-1) СКЛЕТОЧНЫМИСТРУКТУРАМИИБЕЛКАМИВИЧ-1 ВПРОЦЕССЕФОРМИРОВАНИЯВИРУСОПОДОБНЫХЧАСТИЦСпециальность 03.00.03. - молекулярная биология...

стр. 5
3.5.4. ВыделениебелкаVprиз клеток насекомых 3.5.5. АнализвзаимодействияVprсоструктурамиклетки методом субклеточного фракционирования. 3.6.ИзучениевзаимодействиябелкаVprсо структурнымибелкамиВИЧ-1 3.5.1.ИзучениеинкорпорациибелкаVprввирусоподобныечастицы3.5.2.ИзучениевзаимодействияVprс полипротеином Gag впроцессеформирования...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Чикова, Анна Константиновна
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).
Общие сведения
1.2. Vpr - вспомогательный белок ВИЧ-1
1.3. Структура и свойства белка
1.4. 2 Взаимодействие Vpr с белками ВИЧ-1
1.5.2 Взаимодействие Vpr с клетками
1.5.1. Взаимодействие Vpr с клеточными мембранами
1.5.2. Особенности внутриклеточного транспорта белка Vpr. Взаимодействие с клеточными белками и нуклеиновыми кислотами
1.6. 2 Влияние Vpr на инфицированные клетки
1.6.1. Торможение клеточного цикла на
стадии G2/M
1.6.2. Активизация механизма апоптоза, индукция дифференциации клеток в присутствии Vpr
1.7. Функции белка Vpr в жизненном цикле ВИЧ-1
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Культивирование бактериальных штаммов
2.1.1. Использованные штаммы бактерий Escherichia coli
2.1.2. Питательные среды
2.2. Культивирование клеток насекомых и вируов
2.2.1. Культивирование клеток насекомых
1. Культуры клеток
2. Условия культивирования
2.2.2. Вирусы
2.3. Получение рекомбинантных штаммов
2.3.1. Полимеразная цепная реакция
1. Праймеры для амплификации vpr
2. Условия реакции
2.3.2. Получение рекомбинантных штаммов Escherichia coli
1. Выделение плазмидной ДНК из бактериальных клеток
а. Экспресс-метод
б. Препаративное выделение плазмидной
ДНК с помощью горячей щелочи
2. Рестрикция
3. Электрофоретическое разделение
препаратов ДНК
4. Выделение фрагментов ДНК из агарозного
геля
5. Лигирование
6. Приготовление компетентных клеток Е. coli и трансформация их препаратами плазмидной ДНК
7. Селекция рекомбинантных клонов
2.3.3. Получение рекомбинантных вирусных штаммов
1. Получение вирусной ДНК,
51
2. Трансфекция
3. Селекция рекомбинантных клонов
2.4. Получение белковых препаратов
2.4.1.Получение препаратов клеток
2.4.2. Фракционирование клеток
2.4.3. Выделение ВПЧ
2.4.4. Подготовка препаратов для анализа
2.5. Анализ белковых препаратов
2.5.1. Электрофорез
2.5.2. Иммуноблот
2.6. Синтез и очистка 1Ч-концевого пептида белка Ург
2.7. Получение иммунной сыворотки к белку Ург с использованием синтетического пептида
2.7.1. Иммунизация кроликов
2.7.2. Методика ИФА
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ
ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Конструирование рекомбинантных плазмид
3.1.1. Получение фрагмента ДНК гена ург и
конструирование рекомбинантной плазмиды риСург
3.1.3. Конструирование инсерционных плазмид
1. Конструирование инсерционной
плазмиды рУЬург
2. Конструирование инсерционной плазмиды рАСург
3.2. Получениеи анализ иммунной сыворотки к Vpr с использованием синтетического пептида
3.3. Экспрессия Vpr в Е. coli
3.3.1. Получение прокариотической системы экспрессии белка Vpr на основе плазмиды
pUC18
3.3.2. Анализ экспрессии белка Vpr в Е. coli
3.4. Изучение взаимодействия сывороток крови больных СПИД с рекомбинантным белком Vpr в иммуноблоте
3.5. Анализ продукции Vpr штаммов РБВ rBVACvpr
3.5.1. Получение штамма rBVACvpr
3.5.2. Изучение экспрессии белка Vpr
штаммом rBVACvpr
3.5.3. Изучение секреции Vpr в культуральную среду
3.5.4. Выделение белка Vpr из клеток
насекомых
3.5.5. Анализ взаимодействия Vpr со структурами клетки методом субклеточного фракционирования
3.6. Изучение взаимодействия белка Vpr со структурными белками ВИЧ-1
3.5.1. Изучение инкорпорации белка Vpr в вирусоподобные частицы
3.5.2. Изучение взаимодействия Vpr с полипротеином Gag в процессе формирования ВПЧ
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.
а.к. - аминокислотных остатков БОЕ - бляшкообразующая единица BSA - бычий сывороточный альбумин ВИЧ - вирус иммунодефицита человека ВПЧ - вирусоподобные частицы. ИФА - иммуноферментный анализ kb - тысяч пар оснований ПЦР - полимеразная цепная реакция PBS - фосфатно-буферный раствор РБВ, гВУ - рекомбинантные бакуловирусы. SIV - smian immunodeficiency virus (вирус иммунодефицита обезьян)
TBS - трис-буферный раствор