Разработка технологии производства антигена Coxiella burnetii для реакции связывания комплемента, метода флуоресцирующих антител и иммунофлуориметрического анализа Соснина, Оксана Юрьевна

brief description

Соснина,ОксанаЮрьевна.РазработкатехнологиипроизводстваантигенаCoxiellaburnetiiдляреакциисвязываниякомплемента,методафлуоресцирующихантителииммунофлуориметрическогоанализа: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.07. - Пермь, 1999. - 149 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
«Биомед» На правах рукописиСоснинаОксанаЮрьевнаРАЗРАБОТКАТЕХНОЛОГИИПРОИЗВОДСТВААНТИГЕНАCoxiellaburnetiiДЛЯРЕАКЦИИСВЯЗЫВАНИЯКОМПЛЕМЕНТА,МЕТОДАФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХАНТИТЕЛИИММУНОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГОАНАЛИЗА03.00.07 - микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидита биологических

стр. 2
40 40 41 41 41 42 42 • . 2.2.Методыисследования ; • 2.2.1.Реакциясвязываниякомплемента2.2.2.Реакцияугнетениясвязываниякомплемента2.2.3.Реакциянепрямой гемагглютинации (РИГА) 2.2.4.Реакциянейтрализацииантигена(РНАг) 2.2.5.Методфлуоресцирующихантител(МФА) 2.2.6.Иммунофлуориметрическийанализ(ИФМА) 2.2.7. Электрофорез в полиакриламидном геле 2.2.8. Колоночная гель...

стр. 4
ЗФР ИФРМА ИФА ИФМА нИФМА ИФМ ИЭД КАП КЭ ЛАТ - забуференный физиологический раствор - иммунофлуоресцентнаяреакциямикроагглютинации иммуноферментныйанализ-иммунофлуориметрическийанализ- непрямойиммунофлуориметрическийанализ- иммунофлуоресцентныйметодиммуноглобулиновый эритроцитарный диагностикум - кожная аллергическая проба куриные эмбрионы • люминесцируюп];иеантитела• липополисахарид • нормальная кроличья сыворотка - непрямой...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Соснина, Оксана Юрьевна
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНОВ Coxiella
burnetii И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования
2.1.1. Микроорганизмы
2.1.2. Антигены •
2.1.3. Сыворотки
2.2. Методы исследования
2.2.1. Реакция связывания комплемента
2.2.2. Реакция угнетения связывания комплемента
2.2.3. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
2.2.4. Реакция нейтрализации антигена (РНАг)
2.2.5. Метод флуоресцирующих антител (МФА)
2.2.6. Иммунофлуориметрический анализ (ИФМА)
2.2.7. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.2.8. Колоночная гель хроматография антигена
2.2.9. Люминесцентная микроскопия
2.2.10. Электронная микроскопия
2.2.11. Определение белка
2.2.12. Стандартизация C.burnetii
2.2.13. Расчет необходимой площади поверхности мембран
2.2.14. Статистическая обработка
Глава 3. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ВЫДЕЛЕНИЯ КОРПУСКУЛЯРНОГО АНТИГЕНА Coxiella burnetii ШТАММА «М-44», ПРИГОДНОГО ДЛЯ
РАЗЛИЧНЫХ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ (РСК, нМФА)
3.1. Апробация различных способов препаративного выделения
корпускулярного антигена C.burnetii и выбор оптимального метода
3.1.1. Получение антигена методом эфирной обработки по М.Ю.Морозовой и его оценка в различных серологических тестах
3.1.2. Выделение антигена по способу В.АЛблонской и его серологическая характеристика
3.1.3. Очистка C.burnetii методом дифференциального центрифугирования и оценка пригодности полученного антигена для РСК, нМФА
3.1.4. Сравнительная оценка апробированных способов очистки
54
3.2. Разработка способа очистки C.burnetii с использованием дифференциального центрифугирования, ферментолиза и микрофильтрации
3.2.1. Стабилизация основных антигенных структур на C.burnetii, штамма «М-44»
3.2.2. Максимальная изоляция C.burnetii из клеток желточной оболочки: гомогенизация и протеолиз трипсином
3.2.3. Изучение возможности использования микрофильтрации для очистки антигена. Выбор мембран
3.2.4. Отработка оптимальных параметров микрофильтрации субстрата C.burnetii
3.2.5. Определение характеристик препарата с помощью метода электронной микроскопии и колоночной гель-хроматографии
3.2.6. Получение антигенов C.burnetii и изучение специфической активности приготовленных антигенов С. burnetii в нескольких серологических реакциях и их стандартизация
3.2.7. Стабилизация антигенов C.burnetii
Глава 4. ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ДАЛЬНЕЙШЕГО ПРИМЕНЕНИЯ РАЗРАБОТАННОГО АНТИГЕНА С burnetii
4.1. Исследования в области применения антигена C.burnetii для получения диагностических сывороток
4.2. Изучение возможности использования антигенов C.burnetii для выявления антител в ИФМА
4.2.1.Приготовление для оценки антигенов Eu-конъюгатов для прямого и непрямого вариантов ИФМА
4.2.2. Изучение сорбционной способности антигенов на твердофазном носителе
4.2.3. Выявление специфических антител в непрямом ИФМА
57
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
119