CpG-островки как инструмент поиска новых генов: Клонирование, анализ экспрессии, экзон-интронная структура и хромосомная локализация гена LKLF человека Козырев, Сергей Владимирович

Краткое описание

Козырев,СергейВладимирович.CpG-островкикакинструментпоискановыхгенов:Клонирование,анализэкспрессии,экзон-интроннаяструктураихромосомнаялокализациягенаLKLFчеловека: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1999. - 118 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
/ РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ им. В А . ЭНГЕЛЬГАРДТА На правах рукописи УДК 577.21КОЗЫРЕВСергейВладимировичCpG-ОСТРОВКИКАКИНСТРУМЕНТПОИСКАНОВЫХГЕНОВ:КЛОНИРОВАНИЕ,АНАЛИЗЭКСПРЕССИИ,ЭКЗОН-ИНТРОННАЯСТРУКТУРАИХРОМОСОМНАЯЛОКАЛИЗАЦИЯГЕНАLKLFЧЕЛОВЕКАСпециальность

стр. 8
определение нуклеотидной последовательности полученных Notl — клонов и их последующийанализ, —клонированиетранскрипционный кДНК факторновогоLKLFгена(lungчеловека, кодирующе1'о factor) и Krüppel —like определение тканеспецифичности егоэкспрессии, —клонированиегеномного фрагмента ДНК, содержащегогенL K L F ,анализегоэкзон—интроннойорганизации и установлениехромосомной...

стр. 72
свидетельствует о п р о я в л е н и и п о л и м о р ф и з м а в этой области в п о п у л я ц и и ч е л о в е к а . 72 3.2.КЛОНИРОВАНИЕ,АНАЛИЗЭКСПРЕССИИИ ОПРЕДЕЛЕНИЕ Э К З О Н - И Н Т Р О Н Н О ЙСТРУКТУРЫГЕНАЕКГРЧЕЛОВЕКА. 3.2.1.КлонированиекДНКгенаLKLFчеловекаианализего тканевойэкспрессии. Полагают, факторов пальцы", что около 15% всехгеновтканеспецифичн1.гх "цинковые В геномах...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Козырев, Сергей Владимирович
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. ОРГАНИЗАЦИЯ И ФУНКЦИИ CpG - ОСТРОВКОВ В ГЕНОМАХ ВЫСШИХ ЭУКАРИОТ.
1.1.1.CpG —островки: строение, происхождение и функциональная роль.
1.1.2. Инициация репликации ДНК в CpG — островках.
1.1.3. Метилирование CpG — островков de novo.
1.2. ОСОБЕННОСТИ CpG - ОСТРОВКОВ В ГЕНОМАХ ПОЗВОНОЧНЫХ.
1.2.1. CpG —островки в геномах холоднокровных.
1.2.2. CpG —островки в геномах млекопитающих.
1.2.3. CpG —островки в геномах птиц.
1.3. ПОИСК НОВЫХ ГЕНОВ И КАРТИРОВАНИЕ
ГЕНОМА ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ CpG - ОСТРОВКОВ.
1.3.1. Выделение фрагментов ДНК, содержащих CpG —островки.
1.3.2. Notl— картирование генома человека.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы.
2.1.1. Бактериальные штаммы и плазмидные векторы.
2.1.2. Реактивы.
2.2. Методы исследования.
2.2.1. Выделение геномной ДНК человека.
2.2.2. Пульс — электрофорез ДНК.
2.2.3. Трансформация клеток Е. coli плазмидной ДНК.
2.2.4. Выделение и очистка плазмидной ДНК.
2.2.5. Электрофорез ДНК в агарозном геле и элюция фрагментов ДНК из геля.
2.2.6. Электрофорез ДНК в ПААГ.
2.2.7. Получение Noil — "связующей" клонотеки.
2.2.8. Отбор индивидуальных рекомбинантных клонов.
2.2.9. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
2.2.10. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей.
2.2.11. Клонирование кДНК гена LKLF человека.
2.2.12. Определение экзон — интронной структуры гена LKLF человека и клонирование 5' — промоторной зоны гена.
2.2.13. Получение радиоактивно меченного ДНК —зонда.
2.2.14. Блот- гибридизация РНК (Northern-blotting).
2.2.15. Определение хромосомной локализации гена
LKLF человека.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. КОНСТРУИРОВАНИЕ "СВЯЗУЮЩЕЙ" Noil - КЛОНОТЕКИ И ПЕРВИЧНЫЙ АНАЛИЗ КЛОНОВ.
3.1.1. Разработка нового варианта метода получения
Noil—"связующих" клонотек.
3.1.2. Составление банка индивидуальных Noil —клонов.
3.1.3. Анализ первичной структуры Noil —клонов.
3.1.4. Определение Noil — полиморфизма генов рибосомных
РНК человека.
3.2. КЛОНИРОВАНИЕ, АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ЭКЗОН-ИНТРОННОЙ СТРУКТУРЫ
ГЕНА ЬКЬЕ ЧЕЛОВЕКА.
3.2.1. Клонирование кДНК гена ЬКЬБ человека и анализ его тканевой экспрессии.
3.2.2. Анализ аминокислотной последовательности транскрипционного фактора ЬКЬБ человека.
3.2.3. Определение экзон — интронной организации и клонирование промоторного района гена ЬКи человека.
3.2.4. Хромосомное картирование гена ЬКЬБ человека.