Эффективность генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток-"упаковщиц" Волкова, Людмила Александровна

Краткое описание

Волкова,ЛюдмилаАлександровна.ЭФФЕКТИВНОСТЬГЕНЕТИЧЕСКОЙТРАНСФОРМАЦИИСОМАТИЧЕСКИХИЭМБРИОНАЛЬНЫХКЛЕТОКЖИВОТНЫХСИСПОЛЬЗОВАНИЕМРАЗЛИЧНЫХТИПОВКЛЕТОК-«УПАКОВЩИЦ» : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 03.00.23 /ВолковаЛюдмилаАлександровна; [Место защиты: Всероссийский государственный научно-исследовательский институт животноводства]. - Дубровицы, 2005. - 24 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
A-SS320На правах рукописиВОЛКОВАЛюдмилаАлександровнаЭФФЕКТИВНОСТЬГЕНЕТИЧЕСКОЙТРАНСФОРМАЦИИСОМАТИЧЕСКИХИЭМБРИОНАЛЬНЫХКЛЕТОКЖИВОТНЫХСИСПОЛЬЗОВАНИЕМРАЗЛИЧНЫХТИПОВКЛЕТОК-«УПАКОВЩИЦ» 03.00.23 - Биотехнология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Дубровины

стр. 3
для этих целей малоэффективным. Однакоэффективностьтрансформацииклеток-мишеней ретровирусными векторами во многом определяется используемой линиейклеток, упаковывающих рекомбинантный ретровирус. В этой связи, возникает необходимость в оценкеразличныхлинийклеток-«упаковщиц» дляиспользованияв трансгенезесоматическихиэмбриональныхклетокживотныхin vitro и in vivo. Цель и задачи исследования. Исходя из...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Волкова, Людмила Александровна
ВВЕДЕНИЕ.
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Ретровирусные векторы как эффективная система переноса чужеродных генов в клетки эукариот.
1.1.1. Биологические особенности ретровирусов.
1.1.2. Создание ретровирусных векторов.
1.1.3. Пакующие линии клеток.
1.1.4. Свойства ретровирусных векторных систем и их использование для переноса чужеродной ДНК.
1.2. Трансгенные животные биореакторы.
1.2.1. Преимущества использование трансгенных животных для производства рекомбинантных белков.
1.2.2 Продукция рекомбинантных белков в молоко трансгенных животных.
Ф 1.2.3. Использование ретровирусных векторов для получения трансгенных животных биореакторов.
1.3. Получение трансгенной сельскохозяйственной птицы.
1.3.1. Использование вирусных векторов для переноса экзогенной ДНК в эмбриональные клетки птицы.
1.3.2. Микроинъекция ДНК в цитоплазму зиготы.
1.3.3. Использование эмбриональных стволовых клеток.
1.3.4. Использование примордиальных зародышевых клеток. щ 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Реактивы и оборудование.
2.2. Используемые генные конструкции и пакующие линии клеток.
2.3. Культивирование клеток.
2.4. Получение первичной культуры клеток-мишеней.
2.4.1. Получение первичной культуры клеток молочной железы. 45 2.4.2 Получение первичной культуры клеток эмбриона курицы.
2.5 Трансформация клеток-мишеней in vitro.
2.5.1. Совместное культивирование с клетками-«упаковщицами».
2.5.2. Инфицирование культуральной жидкостью, содержащей рекомбинантный ретровирус.
2.6. Введение генных конструкций в клетки-мишени in vivo.
2.6.1. Введение генных конструкций в молочную железу сельскохозяйственных животных.
2.6.2. Введение генных конструкций в эмбрионы кур.
2.7. Анализ на наличие генной конструкции (ПЦР).
2.8 Анализ экспрессии рекомбинантных белков.
2.8.1. Иммуноферментный анализ (ИФА).
2.8.2. Иммуногистохимия.
2.9. Получение и приготовление препаратов митотических хромосом кур.
Ф 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1 Трансформация клеток молочной железы сельскохозяйственных животных.
3.1.1. Трансфекция клеток молочной железы сельскохозяйственных животных in vitro.
3.1.2. Введение экзогенной ДНК в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных in vivo.
3.1.3. Иммуногистохимический анализ экспрессии рекомбинантного ЭПО в молочной железе опытных животных.
3.1.4. Факторы, влияющие на эффективность трансформации клеток молочной железы in vivo.
3.2. Трансформация клеток эмбрионов кур.
3.2.1. Трансфекция эмбриональных клеток кур in vitro.
3.2.2. Введение генных конструкций в эмбрионы кур in vivo.
3.2.2.1 Трансформация клеток эмбрионов кур культуральной жидкостью.
3.2.2.2 Трансформация клеток эмбрионов кур суспензией клеток-«упаковщиц».
3.2.3. Влияние различных факторов на эффективность трансформации клеток эмбрионов кур.
3.3. Сравнительный анализ эффективности использования пакующих линий клеток AMI2 и pgl3 для трансформации *■ клеток-мишеней in vitro и in vivo.
4 ОБСУЖДЕНИЕ.
5 ВЫВОДЫ.
6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.