Экспрессия синтетических генов антибактериальных пептидов Мартемьянов, Кирилл Анатольевич

Краткое описание

Мартемьянов,КириллАнатольевич.Экспрессиясинтетическихгеновантибактериальныхпептидов: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Пущино, 1999. - 112 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
99' Ьj/gQ^РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ ИНСТИТУТ Б Е Ж А ^/ НАУК На правах рукописиМАРТЕМЬЯНОВКириллАнатольевичУДК: 577.213.7ЭКСПРЕССИЯСИНТЕТИЧЕСКИХГЕНОВАНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХПЕПТИДОВ03.00.03-молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: д.х.н.,

стр. 4
w'íroэкспрессиягеновантибактериальныхпептидовв бесклеточной системе трансляции 4Экспрессияхимерныхгеновантибактериальныхпептидов4.1. Разработка метода мультимеризациигенов4.2. Генетческие конструкции дляэкспрессиихимерныхгеновантибактериальныхпептидов4.3 In wVoэкспрессиягеновхимерных

стр. 63
клонированиегеновмагаинина, цекропина и бомбинина. 3. Прямаяэкспрессиягеновантибактериальныхпептидов3.1 Создание генетических конструкций Для изученияэкспрессииклонированныхгеновантибактериальныхпептидов, их необходимо снабдить регуляторными элементами и промоторной областью, находящимися в

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Мартемьянов, Кирилл Анатольевич
I. ВВЕДЕНИЕ.
И. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. Антибактериальные пептиды
1.1. Открытие и разнообразие антибактериальных пептидов.
1.2. Классификация антибактериальных пептидов.
1.3. Структура антибактериальных пептидов.
1.4. Механизм антибактериального действия.
1.5. Биосинтез антибактериальных пептидов и организация их генов.
2. Клонирование и экспрессия генов . ;
2.1. Подходы к конструированию синтетических генов.
2.2. Прокариотические системы экспрессии генов in vivo.
2.3. Прокариотические системы экспрессии генов in vitro.
2.4. Клонирование и экспрессия генов антибактериальных пептидов.
Резюме.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
III. МАТЕРИАЛЫ.
1. Оборудование.
2. Реактивы.
3. Буферные растворы и среды.
4. Бактериальные штаммы.
5. Олигонуклеотиды.
IV. МЕТОДЫ.
1. Синтез и очистка олигонуклеотидов.
2. РРЬС-хроматография.
3. Обессоливание и концентрирование ДНК.
4. Фосфорилирование олигонуклеотидов.
5. Электрофорез белков и пептидов в полиакриламидном геле.
6. Электрофорез нуклеиновых кислот.
7. Авторадиография и флюорография.
8. Приготовление компетентных клеток.
9. Трансформация компетентных клеток.
10. Выделение ДНК плазмид.
11. Рестрикция ДНК.
12. Дефосфорилирование 5' концов ДНК.
13. Отжиг олигонуклеотидов и лигирование.
14. Полимеразная цепная реакция.
15. Определение нуклеотидной последовательности.
16.1п укго транскрипция/трансляция в Б-ЗО экстракте.
17. Индукция т экспрессии генов.
18. Разрушение клеток и приготовление Б-100 экстракта.
19. Выделение гибридных белков.
20. Расщепление белка по метионину.
21. Обнаружение антибактериальной активности.
V. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Конструирование генов.
1.1. Выбор антибактериальных пептидов.
1.2. Экспериментальный подход к синтезу генов антибактериальных пептидов.
2. Синтез и клонирование генов антибактериальных пептидов.
2.1. Получение олигодезоксирибонуклеотидов.
2.2. Сборка и клонирование генов пептидов.
3 Прямая экспрепссия генов антибактериальных пептидов.
3.1. Создание генетических конструкций.
3.2. In vivo экспрессия генов пептидов в E.coli.
3.3. In vitro экспрессия генов антибактериальных пептидов в бесклеточной системе трансляции.
4 Экспрессия химерных генов антибактериальных пептидов.
4.1. Разработка метода мультимеризации генов.
4.2. Генетческие конструкции для экспрессии химерных генов антибактериальных пептидов.
4.3 In vivo экспрессия генов химерных белков.
4.4. In vitro экспрессия генов химерных белков.
4.4.1. Экспрессия тандемно повторенного гена цекропина.
4.4.2. Экспрессия химерного гена GFP-тандемно повторенный цекропин.
5. Биосинтез белка в полностью бесклеточной системе.