Фенотип генетически модифицированных звёздчатых клеток печени in vitro и их влияние на регенерацию печени после трансплантации крысам, перенёсшим частичную гепатэктомию Заикина Эльвира Ильдаровна

Краткое описание

Заикина,ЭльвираИльдаровна.Фенотипгенетическимодифицированныхзвёздчатыхклетокпеченипри культивированииinvitroиихвлияниенарегенерациюпеченипослетрансплантациикрысам,перенёсшимчастичнуюгепатэктомию: диссертация ... кандидата медицинских наук : 03.03.04 /ЗаикинаЭльвираИльдаровна; [Место защиты: Казанский (Приволжский) федеральный университет]. - Казань, 2019. - 143 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» Институт фундаментальной медицины и биологии На правах рукописиЗаикинаЭльвираИльдаровнаФенотипгенетическимодифицированныхзвёздчатыхклетокпеченипри культивировании invitroи ихвлияниенарегенерациюпеченипослетрансплантациикрысам,перенёсшимчастичнуюгепатэктомию03.03.04 Клеточная...

стр. 8
генетическимодифицированныхс помощью рекомбинантного аденовируса Ad5-optHGF-optFGF4-RFPзвёздчатыхклетокпеченимигрировать и встраиваться в паренхимупеченипослетрансплантациикрысам,перенёсшимчастичнуюгепатэктомию; 4. Изучитьвлияниетрансдукциизвёздчатыхклетокпеченирекомбинантным аденовирусом Ad5-optHGF-optFGF4-RFP на ихфенотипи пути дифференцировки в условиях...

Оглавление диссертациикандидат наук Заикина Эльвира Ильдаровна
Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Звёздчатые клетки печени, их фенотип и свойства
1.2. Факторы роста, вырабатываемые звёздчатыми клетками печени
1.2.1. Фактор роста гепатоцитов
1.2.2. Фактор роста фибробластов
1.3. Методы генетической модификации клеток
1.3.1. Невирусные системы доставки генетического материала
1.3.2. Вирусные системы доставки генетического материала
1.3.2.1. Аденовирусные векторы
1.3.2.2. Аденоассоциированные вирусы
1.3.2.3. Герпесвирусы
1.3.2.4. Ретровирусы
1.3.2.5. Лентивирусы
1.4. Красный флуоресцентный белок (Red fluorescent protein, RFP)
1.5. Модели регенерации печени
1.5.1. Частичная гепатэктомия
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты исследования
2.2. Выделение звёздчатых клеток печени методом коллагеназно-про-назной перфузии печени с последующим разделением клеток в градиенте плотности гистоденза
2.2.1. Подсчёт количества и определение жизнеспособности клеток
2.3. Культивирование звёздчатых клеток печени в стандартных условиях
2.4. Генетическая модификация звёздчатых клеток печени крысы
2.4.1. Создание рекомбинантного аденовируса
2.4.2. Трансдукция клеточной культуры рекомбинантными аденовирусами Ad5-optHGF-optFGF4-RFP и Ad5-RFP
2.4.2.1. Получение генетически модифицированных звёздчатых клеток печени для дальнейшего изучения их свойств в культуре
2.4.2.2. Получение генетически модифицированных звёздчатых клеток печени для дальнейшей трансплантации крысам, перенёсшим частичную гепатэктомию
2.5. Операция частичная гепатэктомия по Хиггенсу и Андерсену
2.6. Приготовление гистологических образцов
2.7. Методы исследования
2.7.1. Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов
2.7.2. Окрашивание гематоксилином и эозином
2.7.3. Гистологические, иммуногистохимические, иммуноцитохими-ческие и иммунофлуоресцентные методы исследования
2.7.3.1. Метод меченых полимеров с демаскировкой антигенов в цитратном буфере
2.7.3.2. Стрептавидин-биотиновый метод
2.7.3.3. Стрептавидин-биотиновый метод с демаскировкой антигенов в цитратном буфере и использованием амплифици-рующей системы CSA
2.7.3.4. Методика иммунофлуоресцентного окрашивания
2.7.3.5. Окраска по Маллори
2.7.3.6. Методика иммуноцитохимического окрашивания культуры клеток
2.7.4. Молекулярно-биологические методы исследования
2.7.4.1. Выделение тотальной РНК из культуры звёздчатых клеток печени набором Yellow Solve (Силекс)
2.7.4.2. Синтез кДНК (ОТ-ПЦР) на РНК-матрице
2.7.4.3. Количественная оценка экспрессии мРНК генов с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ)
2.8. Морфометрия
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Фенотип звёздчатых клеток печени
3.2. Генетическая модификация культуры звёздчатых клеток печени ре-комбинантным аденовирусом Ad5-optHGF-optFGF4-RFP
3.3. Оценка эффективности трансдукции культуры звёздчатых клеток печени рекомбинантным аденовирусом Ad5-optHGF-optFGF4-RFP
3.4. Фенотип звёздчатых клеток печени in vitro после трансдукции рекомбинантными аденовирусами Ad5-optHGF-optFGF4-RFP и Ad5-RFP
3.5. Генетически модифицированные звёздчатые клетки печени при трансплантации крысам, перенёсшим частичную гепатэктомию
Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Список сокращений и условных обозначений
Литература
Введение