Формирование изомеров металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27a при про-зависимом фолдинге Сафина, Дина Рашидовна

Краткое описание

Сафина,ДинаРашидовна.ФормированиеизомеровметаллопротеиназыThermoactinomycessp.27aприпро-зависимомфолдинге: диссертация ... кандидата химических наук : 03.00.23. - Москва, 2005. - 104 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
(^\ 0Ъ~%^^1 ИНСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК На правах рукописиСАФИНАДинаРашидовнаФОРМИРОВАНИЕИЗОМЕРОВМЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫTHERMOACTINOMYCESSP. 27АПРИПРО-ЗАВИСИМОМФОЛДИНГЕ03.00.23 - биотехнология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук C^f Научный

стр. 4
клетках Е. coli BL-21 3.7. Очистка изолированных частейметаллопротеиназThermoactinomycessp. 27 и В. amyloliquefaciens 3.8. 3.9.ФолдингметаллопротеиназыThermoactinomycessp. 27аФолдингметаллопротеиназыThermoactinomycessp. 27а в присутствии чужероднойпро-последовательности _ 85 80 83 79 3.10.

стр. 71
металлопротеиназу, 6.про-последовательностьметаллопротеиназыThermoactinomycessp., 7.про-последовательностьметаллопротеиназыThermoactinomycessp. без дополнительного гистидинового якоря, 8.про-последовательностьметаллопротеиназыBacillus amyloliquefaciens, 9.про-последовательностьметаллопротеиназыBacillus brevis. ^Ш - область генаметаллопротеиназыThermoactinomycessp., кодирующая...

Оглавление диссертациикандидат химических наук Сафина, Дина Рашидовна
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Про-зависимый фолдинг белков
1.1.1. Про-зависимы фолдинг протеолитических ферментов.
1.2. Термолизин-подобные металлопротеиназы
1.2.1. Структурно-функциональная организация термолизин-подобных металлопротеиназ бацилл
1.2.2. Организация активного центра молекулы термолизина
1.2.3. Организация субстрат-связывающего кармана
1.2.4. Организация сайтов связывания ионов кальция.
1.2.5. Про-последователыюсти термолизин-подобных металлопротеиназ
1.3. Термолизин-подобная металлопротеиназа
Thermoactinomyces sp. 27а
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЕДОВАНИЯ
2.1. Микробные штаммы и плазмиды
2.2. Культивирование микроорганизмов
2.3. Выделение плазмидной ДНК
2.4. Электрофоретический анализ нуклеиновых кислот
2.5. Ферментативный гидролиз.
2.6. Полимеразная цепная реакция.
2.7. Получение конструкций, обеспечивающих экспрессию модифицированных генов металлопротеиназ в клетках штамма Bacillus subtilis AJ73.
2.8. Обработка амплификационных фрагментов полинуклеотидкиназой.
2.9. Трансформация клеток Bacillus subtilis AJ73.
2.10. Трансформация клеток Escherichia coli штаммы XL-1 (Blue) и
BL-21 (DE3-A.).
2.11. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
2.12. Анализ динамики накопления протеолитических ферментов в культуральной жидкости штаммов-продуцентов В. subtilis AJ73.
2.13. Анализ динамики накопления целевых белков в клетках Е. coli BL-21, несущих экспрессионные плазмиды.
2.14. Экстракция нерастворимых целевых белков из мембранных фракций рекомбинантных штаммов-продуцентов, несущих экспрессионные плазмиды.
2.15. Очистка целевых белков из биомассы штаммов-продуцентов, несущих экспрессионные плазмиды.
2.16. Очистка металлопротеиназы на аффинном сорбенте.
2.17. Электрофоретический анализ белков.
2.18. Количественное определение белка.
2.19. Фолдинг в системе in cis.
2.20. Фолдинг в системе in trans.
2.21. Определение протеолитической активности ферментов.
2.22. Влияние температуры на стабильность фермента.
2.23. Статистическая обработка данных.
2.24. Представление молекул.
2.25. Компьютерный анализ результатов электрофорезов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Характеристика металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а.
3.2. Конструирование мутантных вариантов металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а, с делетированной дополнительной С-концевой последовательностью.
3.3. Характеристика модифицированных вариантов металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а.
3.4. Конструирование изолированных фрагментов металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а.
3.5. Биосинтез мутантных вариантов металлопротеиназ Thermoactinomyces sp. 27а, В. brevis, В. amyloliquefaciens в клетках Е. coli BL-21.
3.6. Анализ внутриклеточной локализации модифицированных вариантов металлопротеиназ в клетках Е. coll BL-21.
3.7. Очистка изолированных частей металлопротеиназ Thermoactinomyces sp. 27 и В. amyloliquefaciens.
3.8. Фолдинг металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а.
3.9. Фолдинг металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а в присутствии чужеродной про-последовательности.
3.10. Очистка вариантов металлопротеиназы Thermoactinomyces sp. 27а, полученных при проведении фолдинга в системах in cis и in trans
3.11. Характеристика металлопротеиназ Thermoactinomyces sp. 27а, реактивированных в системах in cis и in trans—.
ВЫВОДЫ.
БЛАГОДАРНОСТИ.