Изучение факторов, влияющих на амилоидную трансформацию и агрегацию белков Заняткин, Иван Андреевич

Краткое описание

Заняткин,ИванАндреевич.Изучениефакторов,влияющихнаамилоиднуютрансформациюиагрегациюбелков: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.08 /ЗаняткинИванАндреевич; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова]. - Москва; Нант, 2018. - 182 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописи ЗаняткинИванАндреевичИзучениефакторов,влияющихнаамилоиднуютрансформациюиагрегациюбелков03.01.08 - Биоинженерия ДИССЕРТАЦИЯ на

стр. 2
......................................................................................... 14 Неорганизованная иамилоиднаяагрегациябелков........................................................... 17 Гликированиебелковв природе .................................................................................... 18 Последствия неэнзиматического гликированиябелков..................................................... 21 Влияние гликирования на казеины...

стр. 3
............................................................................................. 79 Часть 1. Коагрегация амилоидогенных и пищевыхбелков.............................................. 79Агрегацияприонногобелкав присутствии низкомолекулярных потенциальных ингибиторовамилоиднойконверсии ............................................................................................... 79 Коагрегация прионногобелкаи некоторых пищевыхбелков...

Оглавление диссертациикандидат наук Заняткин, Иван Андреевич
Содержание
Использованные сокращения:
Введение
Актуальность проблемы
Цель и задачи работы
Научная новизна и практическая значимость работы
Положения, выносимые на защиту
Апробация работы
Личный вклад автора
Обзор литературы
Пищевые и молочные белки
Неорганизованная и амилоидная агрегация белков
Гликирование белков в природе
Последствия неэнзиматического гликирования белков
Влияние гликирования на казеины
Прионные белки как известные источники амилоидных структур
Амилоидная конверсия прионного белка
Гликирование прионного белка
Шапероны и их взаимодействие с неправильно свернутыми белками
Объекты экспериментов
Амилоидогенные белки
Шаперонины и белки с шапероноподобной активностью
Низкомолекулярные ингибиторы амилоидной конверсии и агрегации
Альтернативные потенциальные лиганды
Материалы и методы
Использованные реактивы
Препаративные техники
Приготовление компетентных клеток Е.еоН
Трансформация компетентных штаммов Е.еоН
Получение бактериального лизата, содержащего РгР
Выделение и очистка овечьего приона из бактериального лизата
Разделение жировой и водяной фракций белкового раствора или суспензии
Осаждение белка в изоэлектрической точке
Ионно-обменная хроматография в больших объемах
Обратно-фазовая хроматография
Осаждение белка в присутствии сульфата аммония
Экспрессия и очистка белковых комплексов ОгоЕЬ/ОгоЕБ
Гликирование казеинов
Гликирование прионного белка
Термоиндуцированная агрегация белков
Денатурация и реактивация ГАФД
Аналитические методы
Измерение концентрации белка методом УФ-спектрофотометрии
Измерение концентрации белка с бицинхониновой кислотой
Измерение концентрации белка методом Бредфорд
Электрофорез в полиакриламидном геле
Фруктозаминовый анализ ранних продуктов гликирования
Орто-фталальдегидный анализ количества доступных аминогрупп
Флуоресцентная спектрометрия поздних продуктов гликирования
Динамическое светорассеивание
Оценка агрегации белка по мутности раствора (турбидиметрия)
Измерение кругового дихроизма раствора белка
Флуориметрический анализ с тиофлавином Т
Флуоресцентная микроскопия с тиофлавином Т
Спектроскопия поглощения с конго красным
Флуоресцентная микроскопия с иммунохимическим окрашиванием
Трансмиссионная электронная микроскопия белковых препаратов
Определение ферментативной активности глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы
Результаты экспериментов
Часть 1. Коагрегация амилоидогенных и пищевых белков
Агрегация прионного белка в присутствии низкомолекулярных потенциальных ингибиторов амилоидной конверсии
Коагрегация прионного белка и некоторых пищевых белков в присутствии низкомолекулярных потенциальных ингибиторов амилоидной конверсии
Взаимодействие прионного белка и шаперонинов
Часть 2. Влияние гликирования на свойства Р-казеина
Влияние температуры, кислотности среды и присутствия восстановительного агента на процесс гликирования [в-казеина
Влияние гликирования на антиагрегационные свойства [в-казеина
Влияние гликирования казеина на агрегацию ГАФД в присутствии шаперонинового комплекса ОгоЕЬ/ОгоЕБ
Часть 3. Особое взаимодействие гликированного Р-казеина и тиофлавина Т
Влияние гликирования на агрегацию [в-казеина
Агрегация гликированного ß-казеина с тиофлавином Т
Образование спиральных структур при добавлении тиофлавина Т к гликированному ß-казеину
Определение параметров специфических агрегатов ß-казеина с тиофлавином Т и процесса их формирования
Определение необходимых компонентов для формирования специфических агрегатов гликированного ß-казеина
Часть 4. Коагрегация гликированного ß-казеина и немодифицированного прионного белка
Коагрегация гликированного ß-казеина и прионного белка
Определение необходимых компонентов для образования специфических агрегатов гликированного ß-казеина, прионного белка и тиофлавина Т
Коагрегация прионного белка и гликированного ß-казеина в присутствии некоторых антиамилоидных лигандов
Часть 5. Влияние гликирования на свойства овечьего прионного белка
Определение степени гликирования прионного белка
Исследование агрегации гликированного прионного белка
Коагрегация гликированного прионного белка и ß-казеина
Часть 6. Влияние антиамилоидных лигандов на агрегацию гликированного прионного белка
Взаимодействие гликированного прионного белка и антиамилоидных лигандов
Влияние антиамилоидных лигандов на коагрегацию гликированного прионного белка и ß-казеина
Обсуждение результатов
Коагрегация амилоидогенных и пищевых белков
Влияние антиамилоидных лигандов на агрегацию прионного белка
Влияние шаперонинов на амилоидную агрегацию прионного белка
Влияние антиамилоидных лигандов на коагрегацию прионного и пищевых белков
Влияние гликирования на свойства ß-казеина
Влияние гликирования на антиагрегационную активность казеина
Специфическая агрегация гликированного ß-казеина с тиофлавином Т
Коагрегация прионного белка и гликированного ß-казеина
Влияние антиамилоидных лигандов на коагрегацию прионного белка и гликированного ß-казеина
Влияние гликирования на свойства прионного белка
Агрегация гликированного прионного белка
Коагрегация гликированного прионного белка и ß-казеина до и после гликирования
Влияние антиамилоидных лигандов на коагрегацию прионного белка и пищевых белков
Влияние антиамилоидных лигандов на коагрегацию немодифицированных белков
3
Влияние гликирования белков на эффективность антиамилоидных лигандов
Выводы
Список литературы
167