Изучение стабильности экспрессии чужеродных генов у трансгенных растений табака (Nicotiana tabacum L.) Маренкова, Татьяна Владиславовна

Краткое описание

Маренкова,ТатьянаВладиславовна.Изучениестабильностиэкспрессиичужеродныхгеновутрансгенныхрастенийтабака(NicotianatabacumL.) : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Новосибирск, 2005. - 172 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
V •, 0 5 - Ь 1 M^oiv РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ И ГЕНЕТИКИ СО РАН На правах рукописи iМаренковаТатьянаВладиславовнаИзучениестабильностиэкспрессиичужеродныхгеновутрансгенныхрастенийтабака(NicotianatabacumL.) Генетика - 03.00.15 Диссертация на соискание

стр. 2
ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 1.2 1.3 1.4 1.4.1 1.4.2 1.4.3 1.5 • 1.6 1.7 Получениетрансгенныхрастений: общие сведения Наследованиечужеродныхгенови вариабельность ихэкспрессиитрансгенныхрастенийИнактивациячужеродныхгеновв растительном геноме ядерном генометрансгенныхрастенийСтруктура

стр. 12
(№96-04-51075) «Наследование истабильностьэкспрессиичужеродныхгеновв генометрансгенныхрастений: молекулярно-генетический анализгенаnptll утрансгенныхрастенийтабака» (исполнитель); РФФИ (№97-04-48763) «Инактивированиечужеродныхгеновв генометрансгенныхрастений: молекулярногенетические

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Маренкова, Татьяна Владиславовна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1 Получение трансгенных растений: общие сведения.
1.2 Наследование чужеродных генов и вариабельность их экспрессии у трансгенных растений.
1.3 Инактивация чужеродных генов в растительном геноме.
1.4 Молекулярно-генетические механизмы инактивации чужеродной ДНК в ядерном геноме трансгенных растений.
1.4.1 Структура и местоположение экзогенной ДНК в растительном геноме.
1.4.2 Замолкание экспрессии трансгена и модификация ДНК.
1.4.3 Мутации растительных генов, влияющих на процесс инактивации экспрессии чужеродной ДНК.
1.5 Примеры инактивации экспрессии множественных копий собственных растительных генов.
1.6 Инактивация экспрессии множественных копий генов у грибов-аскомицетов.
1.7 Использование феномена инактивации экспрессии множественных копий генов для целенаправленного выключения экспрессии растительных генов.
1.8 Стратегия предотвращения инактивации целевых генов в трансформированных растениях.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Получение транс генных растений табака.
2.2 Типы генетических конструкций.
2.3 Гибридологический анализ трансгенных растений табака.
2.4 Определение активности неомицинфосфотрансферазы II in situ.
2.5 Флуориметрическое определение активности p-глюкуронидазы в листьях трансгенных растений табака.
2.6 Выделение геномной ДНК из листьев табака.
2.7 Саузерн блот гибридизация геномной ДНК трансгенных растений табака.
2.8 Выделение РНК из растительной ткани и точечный Нозерн блотгинг.
2.9 Подтверждение наличия дупликаций в области инсерции Т-ДНК с помощью метода ПЦР.
2.10 Проверка исходных трансформантов на присутствие в растительном геноме векторных последовательностей с помощью метода ПЦР.
2.11 Электрофоретический анализ ДНК.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1 Стабильность экспрессии маркерного гена nptll у гибридов от скрещивания трансгенных растений табака с одной инсерцией Т-ДНК.
3.2 Анализ стабильности наследования гена nptll у трансгенных растений табака со множественными инсерциями Т-ДНК.
3.3 Моделирование влияния дупликации в структуре Т-ДНК на стабильность экспрессии маркерных генов nptll и uidA в трансгенных растениях табака.
3.3.1 Сравнительный анализ стабильности экспрессии гена nptll в первом и втором поколениях от самоопыления трансгенных растений табака (с одной копией гена uidA и с дупликациями данного гена в составе Т-области).
3.3.2 Анализ активности ферментов (З-глюкуронидазы и NPTII в двух группах трансгенных растений табака (с одной копией гена uidA и прямой дупликацией данного гена).
3.3.3 Анализ стабильности экспрессии гена nptll у гибридов Fj от различных типов скрещиваний.
3.3.4 Встраивание векторных последовательностей в растительный геном исходных трансгенных растений табака.
3.4 Мозаичный характер проявления экспрессии гена nptll в трансгенных растениях табака модельной линии Nu 21.