Изучение влияния антимикробных пептидов на клетки млекопитающих Емельянова Анна Андреевна

Краткое описание

Емельянова, Анна Андреевна.
Изучение влияния антимикробных пептидов на клетки млекопитающих : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10 / Емельянова Анна Андреевна; [Место защиты: МИРЭА - Российский технологический университет]. - Москва, 2019. - 110 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат наук Емельянова Анна Андреевна
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Действие антимикробных пептидов на опухолевые клетки
2.2. Структура и разнообразие биологических функций кателицидинов
2.2.1. Р-Структурные кателицидины
2.2.2. Кателицидины, богатые остатками пролина и триптофана
2.2.3. а-Спиральные кателицидины
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Оборудование и реактивы
3.2. Культуры клеток
3.3. Среды для культивирования эукариотических клеток
3.4. Гетерологичная экспрессия антимикробных пептидов в составе гибридных белков
3.4.1. Препаративная экспрессия антимикробного пептида ^МАР-28
3.4.2. Выделение рекомбинантного белка
3.4.3. Расщепление гибридного белка
3.4.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография
3.4.5. Определение концентрации и чистоты пептидов
3.5. МТТ-тест
3.6. Гемолитический тест
3.7. Окрашивание трипановым синим
3.8. Лактатдегидрогеназный тест
3.9. Двойное окрашивание FITC-Аннексином V и иодидом пропидия. Проточная цитофлуориметрия
3.10. Статистический анализ
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Объект исследования - кателицидин козы СИМАР-28
4.2. Гетерологическая экспрессия и очистка пептида СИМАР-28
4.3. Цитотоксический эффект СИМАР-28
4.3.1. Сравнение цитотоксического эффекта ^МАР-28 и мелиттина
4.3.2. Влияние pH среды и наличия остатков гистидина на цитотоксические свойства пептида ChMAP-28
4.3.3. Определение неспецифической токсичности ChMAP-28 в отношении нормальных клеток крови
4.4. Анализ механизма индукции клеточной гибели с помощью проточной цитофлуориметрии
4.4.1. Изучение временной и концентрационной зависимости действия ChMAP-28 c окрашиванием FITC-аннексин V/PI на клетках HL-60
4.4.2. Изучение влияние общего ингибитора каспаз Z-VAD-FMK на цитотоксический эффект ChMAP-28 на клетках HL-60
4.4.3. Изучение механизма действия пептида ChMAP-28 на адгезионные клетки HEK293T
4.5. Лактатдегидрогеназный тест
4.6. Окрашивание трипановым синим
4.7. Биоинформатический анализ активации сигнальных путей при действии пептида ChMAP-28
4.8. Преимущество ChMAP-28 по сравнению с АМП разных классов
4.8.1. Cравнение свойств ChMAP-28 и а-спиральных пептидов
4.8.2. Cравнение свойств ChMAP-28 и ß-шпилечных пептидов
5. ВЫВОДЫ
6. БИБЛИОГРАФИЧЕЖИЙ СТИШК