Кодирующая некодирующая теломеразная РНК человека Нарайкина Юлия Валерьевна

Краткое описание

Нарайкина, Юлия Валерьевна.
Кодирующая некодирующая теломеразная РНК человека : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10; 03.01.03 / Нарайкина Юлия Валерьевна; [Место защиты: Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова]. - Москва, 2018. - 149 с. : ил.
Оглавление диссертациикандидат наук Нарайкина Юлия Валерьевна
Список сокращений
Введение
Обзор литературы
1.1.Теломер ы
1.2.Теломераз а
1.2.1. Общие сведения
1.2.2. Каталитический цикл теломеразы
1.2.3. Основные компоненты теломеразного комплекса
1.2.3.1. Обратная транскриптаза
1.2.3.2. Вспомогательные белки
1.2.3.3. Теломеразная РНК
1.2.3.4. Пространственная структура теломеразы
1.2.3.5. Процессинг ИТЯ и сборка теломеразного комплекса человека
1.3. Альтернативные функции компонентов теломеразы
1.4.1. Нуклеазная активность теломеразы
1.4.2. Трансферазная активность теломеразы
1.4.3. Теломераза и метаболизм
1.4.4. Обратная транскриптаза
1.4.4.1. ТБЯТ и митохондрии
1.4.4.2. ТБЯТ и регуляция экспрессии генов
1.4.4.3. ТБЯТ и повреждения ДНК
1.4.4.4. ТБЯТ и апоптоз
1.4.5. Теломеразная РНК
1.4.5.1. ИТЯ и повреждения ДНК
1.4.5.2. ИТЯ и апоптоз
1.4.5.3. ИТЯ как длинная некодирующая РНК
1.5. Заключение по обзору литературы
Результаты и их обсуждение
1. Постановка задачи
2. Биоинформатический анализ первичной структуры продукта трансляции теломеразной РНК человека
3. Исследование локализации теломеразной РНК человека в клетках
4. Идентификация ^ШЯР в клетках человека
4.1. Получение первичных поликлональных антител к белку ^ШЯР
4.2. Иммунофлуоресцентный анализ белка ^ШЯР в клетках
4.3. Идентификация белка ^ШЯР в клетках методом иммуноблоттинга
4.4. Идентификация белка ^ШЯР в клетках с помощью масс-спектрометрии
5. Исследование биологической роли белка ^ШЯР
5.1. Изучение роли ^ШЯР в апоптозе с помощью подхода «gam-of-fimctюn»
5.2. Изучение роли ^ГОЯР с помощью подхода «loss-of-function»
5.3. Исследование биологической роли белка ^ШЯР с помощью поиска
клеточных партнеров
Заключение
Выводы
Материалы и методы
1. Используемые реактивы и биоматериалы
2. Методики, использованные в работе
2.1. ПЦР
2.2. Приготовление вектора и вставки
2.3. Лигирование
2.4. Разделение фрагментов ДНК в агарозном геле
2.5. Приготовление компетентных клеток Е.свИ
2.6. Трансформация компетентных клеток Е.свИ плазмидной ДНК
2.7. Выделение плазмидной ДНК
2.8. Рестриктный анализ плазмидной ДНК
2.9. Секвенирование плазмид и ПЦР-продуктов
2.10. Создание конструкций, содержащих мутации в гене теломеразной РНК человека
2.11. Создание конструкций для выключения экспрессии гена теломеразной РНК человека
2.12. Культивирование эукариотических клеток
2.13. Тест на токсичность MTT
2.14. Ингибирование аутофагии
2.15. Приготовление экстрактов культуральных клеток
2.16. Выделение суммарной РНК
2.17. Проведение ПЦР в реальном времени
2.18. Определение относительной активности теломеразы
2.19. Трансфекция клеток кальций-фосфатным методом
2.20. Инфекция клеток
2.21. Электропорация
2.22. Иммуноцитохимия
2.23. Белковый электрофорез в ПААГ-ДСН
2.24. Окраска ПААГ серебром
2.25. Вестерн-блоттинг
2.26. Коиммунопреципитация с помощью наборов Pierce Direct IP Kit и
Dynabeads Co-Immunoprecipitation Kit
Приложение
Приложение