Кондакова Ирина Викторовна. Регуляция пролиферации и апоптоза опухолевых клеток свободными радикалами

Краткое описание

Кондакова Ирина Викторовна. Регуляция пролиферации и апоптоза опухолевых клеток свободными радикалами : диссертация ... доктора медицинских наук : 14.00.14 / Кондакова Ирина Викторовна; [Место защиты: Научно-исследовательский институт онкологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН].- Томск, 2005.- 248 с.: ил.

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ТОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ
На правах рукописи
0520.0 50 2 3 ^8
КОНДАКОВА Ирина Викторовна ^ Ал?
РЕГУЛЯЦИЯ ПРОЛИФЕРАЦИИ И АПОПТОЗА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК СВОБОДНЫМИ РАДИКАЛАМИ
14.00.14 - онкология 14.00.16 - патологическая физиология
ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор
чойнзонов
Евгений Лхамацыренович,
доктор медицинских наук, профессор,
член-корреспондент РАМН, КУ1ШІИНСКИЙ Николай Евгеньевич
ТОМСК - 2005
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА 1. Обзор литературы 17
1.1. Регуляция пролиферации опухолевых клеток 17
1.1.1. Основные регуляторные механизмы пролиферативной активности в клетках млекопитающих 17
1.1.2. Особенности регуляции пролиферативных процессов
в опухолевых клетках 21
1.2. Регуляция апоптоза в опухолевых клетках 23
1.2.1. Характеристика процесса апоптоза, его основные этапы
и механизмы регуляции 23
1.2.2. Нарушение регуляции апоптоза в опухолевых клетках 28
1.3. Регуляция пролиферации и апоптоза клеток свободными радикалами 31
1.3.1. Характеристика основных форм свободных радикалов
в живых системах 31
1.3.2. Свободные радикалы и канцерогенез 36
1.3.3. Свободно-радикальные механизмы противоопухолевого действия антрациклиновых антибиотиков 39
1.3.4. Антиоксидантные ферменты как регуляторы концентрации свободных радикалов в клетках 42
1.3.5. Антиоксидантные ферменты в различных типах опухолевых клеток 46
1.3.6. Роль свободных радикалов и антиоксидантных ферментов
в регуляции пролиферативной активности клеток 48
1.3.7. Механизмы индукции апоптоза свободными радикалами 55
1.4. Роль оксида азота в регуляции пролиферативной активности
и апоптоза клеток 59
з
1.4.1. Характеристика и основные пути образования оксида азота
в опухолевых клетках 59
1.4.2. Участие оксида азота в регуляции пролиферативных процессов 63
1.4.3. Двойственная роль оксида азота в регуляции апоптоза 67
1.4.4. Сочетанное действие оксида азота и свободно-радикальных агентов на пролиферацию и индукцию апоптоза опухолевых клеток 70
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 76
2.1. Материал и объекты исследования 76
2.2. Методы исследования 78 ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 95
3.1. Исследование влияния активированных кислородных метаболитов и оксида азота на пролиферативную активность опухолевых клеток in vitro 95
Влияние активированных кислородных метаболитов на пролиферативную активность опухолевых клеток 95
Влияние доноров оксида азота на пролиферативную активность опухолевых клеток 102
3.2. Исследование влияния активированных кислородных метаболитов и оксида азота на индукцию апоптоза в опухолевых клетках 106 Исследование влияния активированных кислородных метаболитов
на индукцию апоптоза в опухолевых клетках 105
Исследование влияния доноров оксида азота на индукцию апоптоза в опухолевых клетках 111
3.3. Исследование кинетики взаимодействия экзогенных свободно¬радикальных агентов с опухолевыми клетками 113 Исследование кинетики распада гидроперекиси третичного бутила в
клеточных суспензиях 113
Исследование антирадикальной активности супернатантов опухолевых клеток 116
3.4. Изучение роли арахидоновой кислоты в регуляции пролиферации опухолевых клеток 119
Включение [1-14С]-арахидоновой кислоты в фосфолипиды при переходе опухолевых клеток от состояния пролиферации в состояние покоя 119
Влияние свободных радикалов и оксида азота на выход арахидоновой кислоты и её включение в опухолевые клетки и в отдельные фосфолипиды 122
Регуляция активности ферментов метаболизма фосфолипидов свободными радикалами 134
3.5. Исследование зависимости активности антиоксидантных ферментов от выраженности пролиферативных процессов в опухолях в эксперименте 142
Активность антиоксидантных ферментов в карциномах Эрлиха с различной степенью выраженности пролиферативных процессов 147 Активность антиоксидантных ферментов в зависимости от митотического индекса доброкачественных и злокачественных опухолей молочной железы 150
3.6. Исследование комбинироанного влияния свободных радикалов и оксида азота на пролиферацию и апоптоз опухолевых клеток 157 Сочетанное действие оксида азота и свободно-радикальных агентов на пролиферацию опухолевых клеток 157
Роль оксида азота в регуляции апоптоза опухолевых клеток, индуцированного свободными радикалами 169
Модулирующее действие оксида азота на противоопухолевую активность доксорубицина 165
5
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 175
ВЫВОДЫ 198
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 201
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АБАП - 2,2’азо-бис(2-амидинопропан)
АКМ - активированные кислородные метаболиты
АОФ - антиоксидантные ферменты
АТФ - аденозинтрифосфорная кислота
Г1ТГБ - гидропероксид третичного бутила
ГП - глутатионпероксидаза
ГТ - глутатионтрансфераза
ГР - глутатионредуктаза
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДНК-РК - ДНК-зависимая протеинкиназа
МДА - малоновый диальдегид
НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный
ПОЛ - перекисное окисление липидов
РМЖ - рак молочной железы
СОД - супероксиддисмутаза
ФЛА2 - фосфолипаза А2
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
GSH - восстановленный глутатион
L-NAME - метиловый эфир нитроаргинина
MNNG - 1Ч-метил-М’-нитро-їт-нитрозогуанидин
NO - оксид азота
SNP - нитропруссид натрия
ВВЕДЕНИЕ
Злокачественные новообразования являются одной из главных причин смертности в большинстве промышленно развитых стран. О глобальной величине проблемы онкологической заболеваемости и смертности можно судить на основе экспертных оценок, проводимых Международным агентством по изучению рака. Так, в 2000 г. в мире количество вновь заболевших раком оценивалось более чем в 10 млн. человек, а количество умерших — в 6,2 млн. [39, 314]. Прогнозируется увеличение заболеваемости злокачественными опухолями до 15 млн. к 2020 г., одновременно смертность возрастёт до 9 млн. в год [314]. Важнейшим условием успеха противораковой борьбы является знание механизмов патогенеза злокачественного роста, необходимое для формирования адекватной терапевтической стратегии. Современное понимание этиологии и механизмов возникновения рака, достигнутое благодаря прогрессу в фундаментальной медицине и биологии, даёт представление о ряде принципиальных свойств, которыми обладают злокачественные опухоли. Ключевыми параметрами опухолевого роста являются повышенная способность к пролиферации, утрата способности к полной дифференцировке и апоптотической гибели, инвазивный рост и метастазирование [17, 25, 31, 34, 53, 257]. Благодаря этим свойствам опухолевые клетки имеют преимущество перед клетками нормальных тканей во время роста и выживания в одинаковых условиях. Однако несмотря на огромные усилия, прилагаемые во всём мире, и успехи, достигнутые в области изучения рака, проблема этиопатогенеза злокачественных опухолей остаётся в целом пока нерешённой.
Исследование клеточных и молекулярных механизмов регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток является одной из приоритетных направлений современной онкологии и патологической
физиологии. В здоровых тканях устанавливается баланс между процессами пролиферации и гибели клеток [54, 56, 257]. В противоположность этому, злокачественный рост основан на автономной и неограниченной пролиферации клеток, составляющих ткань опухоли [17, 31]. Вместе с тем, в трансформированных клетках возникает резистентность к индукции апоптоза, что также является одним из ключевых механизмов их выживания [34, 45, 54]. Клеточные механизмы запуска и активации апоптоза нарушаются в результате генетических мутаций, что приводит к снижению способности трансформированных клеток активировать программу клеточной смерти и определяет прогрессирование опухолевого процесса, а также может являться одной из причин множественной лекарственной резистентности [31, 34, 42, 54]. Изучение механизмов регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток важно не только с точки зрения понимания патогенетических особенностей развития и функционирования опухолей, оно также позволяет определить новые направления терапии злокачественных новообразований. >
В последнее время достигнуты значительные успехи в исследовании роли молекул различных классов в регуляции роста клеток. Регуляторные молекулы, прежде всего гормоны и факторы роста, вступают во взаимодействие с клеточными структурами, также к ростмодулирующим факторам относят и события, происходящие внутри клеток при передаче сигнала с участием медиаторных систем. В понимании механизмов, контролирующих размножение клеток, важную роль играет выяснение природы внутриклеточных сигналов ответственных за переключение метаболизма на новый уровень при смене состояния пролиферации и покоя.
Активированные кислородные метаболиты (АКМ), такие как супероксидный анион-радикал, гидроксильный, алкоксильный и пероксидный радикалы, оксид азота (N0) и др. являются обязательными компонентами нормального функционирования клеток [13, 37, 47, 134]. Они играют важную роль в регуляции активности ферментов, поддержании стабильности мембран, транскрипции некоторых генов, являются необходимыми элементами функционирования ряда медиаторных систем и выступают в качестве посредников в формировании клеточного ответа. Это стимулирует большой интерес к изучению роли свободных радикалов в регуляции пролиферации опухолевых клеток [49, 101, 172, 186].
Накапливающиеся в литературе данные о молекулярных механизмах действия различных свободно-радикальных молекул свидетельствуют об их участии в регуляции роста и дифференцировки клеток [96, 101]. Известно, что супероксидный радикал и перекись водорода в низких концентрациях стимулируют деление клеток [11, 96]. Оксид азота также участвует в регуляции пролиферации различных клеток, в том числе и опухолевых [63, 158].
Антиоксидантные ферменты (АОФ), контролируя концентрацию радикалов, могут выступать в качестве регуляторов пролиферации [304]. Подтверждением данного предположения является факт обратной корреляции между скоростью роста гепатомы и содержанием в ней Си, Zn - супероксиддисмутазы [80]. Таким образом, высокая активность АОФ является не только фактором устойчивости опухолей к свободно¬радикальным воздействиям, но и может тормозить неограниченное деление клеток неоплазмы.
В патогенезе онкологических заболеваний исключительно важное значение имеет нарушение программируемой клеточной гибели (апоптоза). Данные многих исследований свидетельствуют о том, что, в силу своей высокой химической активности, АКМ могут повреждать внутриклеточные структуры и быть индукторами и медиаторами апоптоза [49, 134, 157,171, 242]. Факторы химической и физической природы, которые при действии на клетки вызывают окислительный стресс, также индуцируют апоптоз. К таким факторам относятся ионизирующее излучение и некоторые противоопухолевые препараты (например, антрациклиновые антибиотики и цисплатин), которые, проникая в клетку, приводят к образованию свободных радикалов [6, 82]. Предполагается, что характер действия АКМ на клетки связан с их внутри- и внеклеточным уровнем [222], однако при этом не выявлено определенных закономерностей, что делает актуальным изучение влияния кислородных радикалов на пролиферацию и на апоптоз опухолевых клеток в зависимости от концентрации.
Оксид азота, являясь регулятором внутри- и межклеточных процессов, принимает непосредственное участие в реализации апоптотической программы. Считается, что оксид азота может усиливать цитотоксичность свободных радикалов, причем NO-генерирующие соединения, вступая в реакцию свободно-радикального окисления, могут образовывать еще более токсическое соединение - пероксинитрит, который повреждает ДНК и вызывает ковалентные модификации белков в клетке, инициируя тем самым апоптоз [71, 318, 324]. Однако во многих исследованиях N0 рассматривается, скорее, как антиоксидант, который тормозит развитие радикальных окислительных реакций [205, 212, 308]. При этом нет однозначного ответа на вопрос, является NO активатором или ингибитором апоптоза.
Ряд принципиальных вопросов, важных для понимания закономерностей взаимодействия свободно-радикальных молекул с опухолевыми клетками и регуляторных механизмов пролиферации опухолевых клеток остаётся неизученным. К ним относится, в частности, выяснение того, какие события являются первоначальными и определяющими во взаимодействии опухолевых клеток с органическими гидропероксидами. В настоящее время только в единичных исследованиях учитывается возможность и важность модуляции активированными кислородными метаболитами различных этапов регуляции клеточного деления: лиганд-рецепторных взаимодействий, функционирования системы «вторичных посредников», активации и/или ингибирования эффекторных молекул клеток. Недостаточно исследованы механизмы влияния АКМ на ключевые компоненты внутриклеточной сигнальной системы опухолевых клеток. Остается не изученным вопрос о совместном влиянии кислородных радикалов и N0 на пролиферативный потенциал опухолевых клеток. Решение этих вопросов могло бы послужить основой для понимания патогенетических механизмов необластомогенеза, а это в свою очередь - разработать более эффективные подходы к комплексной патогенетической терапии злокачественных новообразований.
Цель и задачи исследования.
Целыо настоящего исследования явилось изучение роли свободных радикалов, оксида азота и антиоксидантных ферментов в механизмах регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток.
Для дос тижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить влияние активированных кислородных метаболитов, органических пероксидов и доноров оксида азота на пролиферативную активность опухолевых клеток.
2. Исследовать влияние активированных кислородных метаболитов и оксида азота на индукцию апоптоза в опухолевых клетках.
3. Изучить кинетику взаимодействия экзогенных пероксидов с опухолевыми клетками и выяснить роль ферментативных и неферментативных антиоксидантов в этом процессе.
4. Изучить роль арахидоновой кислоты в механизмах регуляции пролиферации и апоптоза опухолевых клеток. Оценить эффект свободно-радикальных агентов на выход арахидоновой кислоты из фосфолипидов мембран опухолевых клеток и показать роль ферментов метаболизма фосфолипидов в этом процессе.
5. Исследовать зависимость активности антиоксидантных ферментов от скорости пролиферации и структурной организации опухолей в эксперименте.
6. Оценить связь активности антиоксидантных ферментов с пролиферацией клеток доброкачественных и злокачественных опухолей молочной железы.
7. Исследовать совместное влияние свободно-радикальных агентов и NO- генерирующих соединений на пролиферацию и апоптоз опухолевых клеток.
8. Исследовать влияние доноров оксида азота на опухолетоксическое действие доксорубицина in vitro.
9. Оценить возможность применения доноров оксида азота для повышения терапевтической эффективности антибиотиков антрациклинового ряда.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное исследование влияния веществ, генерирующих свободные радикалы, и доноров оксида азота в широком спектре концентраций на активность пролиферативных процессов в клетках экспериментальных опухолевых линий и индукцию в них апоптоза. Выявлено, что направленность действия исследованных соединений меняется в зависимости от концентрации, а именно, с уменьшением дозы снижается ингибиующее влияние на пролиферацию и индукцию апоптоза и при достижении концентраций 10‘6 М и менее наблюдается стимуляция клеточного размножения.
Впервые исследована кинетика взаимодействия органических пероксидов с опухолевыми клетками и обнаружена экстраклеточная продукция глугатионпероксидазы и низкомолекулярных компонентов, обладающих антирадикальной активностью.
Впервые показана концентрационная зависимость влияния свободных радикалов на освобождение арахидоновой кислоты из фосфолипидов мембран и связь этого процесса с пролиферацией и апоптозом опухолевых клеток. Установлено, что под действием АКМ в высоких концентрациях, ингибирующих пролиферативные процессы и индуцирующих апоптоз, наблюдается значительный выход арахидоновой кислоты из фосфолипидов мембран и ингибирование ее включения в них. В противоположность этому, АКМ в низких дозах, стимулирующих пролиферацию, приводят к менее выраженному выходу жирной кислоты с сохранением репарации фосфолипидов. При этом показано, что выход арахидоновой кислоты из фосфолипидов мембран опосредован активацией фосфолипазы А.Влияние оксида азота на данные процессы носило ту же направленность, но выражено в меньшей степени.
Получены новые данные о зависимости активности антиоксидантных ферментов от выраженности пролиферативных процессов в клетках экспериментальной опухоли, доброкачественных и злокачественных опухолях молочной железы человека. Быстрорастущие опухоли характеризуются низкой активностью антиоксидантных ферментов, тогда как при уменьшении степени выраженности пролиферативных процессов происходит увеличение активности антиоксидантных ферментов.
Впервые показана способность доноров оксида азота (нитрит натрия, нитропруссид натрия и L-аргинин) защищать опухолевые клетки от токсического действия пероксирадикалов и доксорубицина. Экспериментально доказана возможность использования донора N0 - нитрозогуанидина для увеличения противоопухолевой эффективности доксорубицина.
Теорерическая и практическая значимость
Результаты исследования существенно расширяют фундаментальные представления о механизмах регуляции пролиферативной активности и апоптотической гибели опухолевых клеток. Показано, что вещества, генерирующие свободные радикалы, и доноры оксида азота в зависимости от концентрации могут активировать как пролиферативную активность, так и апоптоз опухолевых клеток, что подтверждает существование общей для этих процессов внутриклеточной регуляторной системы, частью которой являются радикалы кислорода и азота.
Полученные результаты формируют новые представления о биохимических закономерностях взаимодействия опухолевых клеток с активированными кислородными метаболитами, доказывая возможность экстраклеточной регуляции уровня свободно-радикального окисления и взаимодействия пероксидов с внутриклеточной сигнальной системой.
Данные о взаимосвязи активности антиоксидантных ферментов с интенсивностью пролиферативных процессов могут послужить основой для выбора дополнительных информативных критериев при оценке биологических характеристик опухолей, в частности, их пролиферативной активности, которые, в свою очередь, можно использовать в качестве факторов прогноза. Полученные данные свидетельствуют о том, что доноры оксида азота могут защищать опухолевые клетки от свободно¬радикального повреждения и выступать в качестве факторов развития лекарственной разистентности. Все это должно способствовать при назначении химиотерапии более тщательному отбору препаратов, которые могут стимулировать образование оксида азота и пероксидов в организме пациентов со злокачественными заболеваниями. Кроме того, в работе экспериментально обоснована возможность использования доноров оксида азота для увеличения противоопухолевой эффективности антибиотиков антрациклинового ряда.
Положения, выносимые на защиту
1. Супероксидный радикал, органические пероксиды и доноры оксида азота в зависимости от концентрации могут проявлять как цитотоксическую активность по отношению к опухолевым клеткам и индуцировать их апоптоз, так и стимулировать их пролиферацию.
2. Влияние пероксидов и доноров оксида азота на пролиферацию и апоптоз опосредуется взаимодействием с сигнал-передающей системой липидной природы, включающей арахидоновую кислоту.
3. Активность антиоксидантных ферментов снижена в фазу быстрого логарифмического роста экспериментальных опухолей по сравнению с фазой медленного стационарного роста и в злокачественных опухолях молочной железы с наивысшим митотическим индексом.
4. Доноры оксида азота (нитрит натрия, нитропруссид натрия и L- аргинин) снижают ингибирующий эффект пероксирадикалов на пролиферацию опухолевых клеток и тормозят индукцию апоптоза in vitro.
Апробация работы
Основные результаты работы доложены на Симпозиуме стран СНГ «Клинические и экспериментальные аспекты клеточной сигнализации» (Москва, 28-29 сентября 1993 г.), на V Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 29-30 ноября 1993 г.), на VI симпозиуме по биохимии липидов (Санкт-Петербург, 3-6 октября 1994 г.), на Second International Conference on Clinical Chemiluminescence (Berlin, Germany, April 27-30, 1996), на Втором съезде биохимического общества РАН (Москва, 19-32 мая 1997 г.), на International Conference ’’Regulation of biological processes by free radicals: role of antioxidants, free radical scavengers, and chelators” (Москва-Ярославль, 10-13 мая 1998 г.), на региональной научной конференции «Актуальные вопросы кардиологии» (Томск, 14-15 сентября 2000 г.), на 7th ESACP Congress (Caen, France, April 1-5 2001), на 7th International Conference “Eicosanoids & other bioactive lipids in cancer, inflammation and related diseases” (Nashville, USA, October 14-17, 2001), на VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 16-19 апреля 2002 г.), на 3 съезде онкологов и радиологов стран СНГ (Минск, 25-28 мая 2004 г.).
Публикации
Основные результаты диссертации опубликованы в 57 печатных работах, в том числе 13 в центральных отечественных -и зарубежных реферируемых журналах. Получен патент РФ на изобретение № 2199749 от 27.02.2003.
Структура и объём диссертации
Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 248 страницах и иллюстрирована 29 рисунками и 19 таблицами. Библиография включает 410 литературных источников, из которых 58 отечественных и 352 иностранных.

Список литературы

ВЫВОДЫ
1. Влияние свободных радикалов на пролиферацию опухолевых клеток носит дозозависимый характер. Радикалы кислорода (супероксидный радикал, органические пероксиды) и доноры оксида азота в высоких концентрациях (10'3-105 М) ингибируют пролиферацию, а в низких (10'б-10"9 М) проявляют ростстимулируюгцую активность по отношению к асцитным опухолевым клеткам. Исключение составляет нитрозогуанидин, который в спектре исследованных концентраций не активирует пролиферативные процессы в опухолевых клетках.
2. Степень индукции апоптоза опухолевых клеток органическими пероксидами и донорами оксида азота более выражена при увеличении концентрации используемых соединений. Усиление программируемой гибели клеток сопровождается ингибированием их пролиферативной активности.
3. Кинетика взаимодействия экзогенных пероксидов с асцитными опухолевыми клетками характеризуется более медленным распадом по сравнению с нормальными клетками (лимфоцитами и эритроцитами).
4. Опухолевые клетки секретируют экстраклеточно
глутатионпероксидазу и низкомолекулярные соединения небелковой природы, обладающие антирадикальной активностью.
5. Состояние пролиферативной активности трансформированных клеток характеризуется усилением метаболизма фосфолипидов, которое выражается в увеличении включения арахидоновой кислоты в фосфолипиды мембран, главным образом в фосфатидилхолин и кардиолипин, по сравнению с покоящимися клетками.
6. При действии свободных радикалов в концентрациях, стимулирующих пролиферацию, наблюдается трехкратное увеличение выхода арахидоновой кислоты из фосфолипидов опухолевых клеток при сохранении репаративных процессов в мембранах, а при действии токсических доз — семикратное увеличение, которое сопровождается полным ингибированием процессов репарации мембран. Эффект доноров оксида азота носит ту же направленность, но выражен в меньшей степени. Главную роль в выходе арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов играет фосфолипаза А2.
7. В асцитных и солидных опухолях карциномы Эрлиха в фазу быстрого логарифмического роста наблюдается снижение активности антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и глутатионтрансферазы) по сравнению с фазой медленного стационарного роста.
8. В фиброаденомах молочной железы активность антиоксидантных ферментов возрастает при увеличении митотического индекса опухоли. В противоположность этому, в тканях рака молочной железы наблюдается снижение активности антиоксидантных ферментов при наиболее высоких значениях митотического индекса.
9. Доноры оксида азота (нитропруссид натрия, нитрит натрия, L- аргинин) уменьшают степень ингибирования пролиферации опухолевых клеток, вызванную веществами, генерирующими пероксирадикалы, и ингибируют апоптоз, индуцированный свободными радикалами.
10. Комбинация доноров оксида азота (нитропруссид натрия, нитрит натрия, L-аргинин) в концентрации 10"4-10"5 М и доксорубицина приводит к снижению опухолетоксичности антибиотика (10"s - 10'7 М). Нитропруссид натрия, нитрит натрия в концентрации 10"3 М и
нитрозогуанидин в концентрации 10'4 М усиливают
опухолетоксичное действие доксорубицина.
11. Нитрозогуанидин повышает терапевтическую эффективность
доксорубицина в эксперименте, уменьшая размер карциномы Эрлиха в 3 раза и увеличивая уровень индукции апоптоза и некроза опухолевых клеток.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аббасова С.Г. Система Fas- FasL в норме и патологии. / С.Г. Аббасова, В.М.Липкин, Н.Н. Трапезников, Н.Е. Кушлинский // Вопр. Биол. Мед. Фарм. Химии. - 1999. - № 3. - С. 3-17.
2. Авдеева О.С. Изучение методом ЭПР молекулярных механизмов действия радиации и метилнитрозомочевины на ткани здоровых животных и животных-опухоленосителей. / О.С.Авдеева // Автореф. дисс. канд. физ-мат. наук.- Москва. - 1980.- 20 с.
3. Амосов И.С. Кислородный статус и ангиоархитектоника опухолей разного типа и их изменение при лучевой терапии / И.С. Амосов, Р.К. Караулов, Н.А. Сазонова // Радиобиология. - 1984. - № 24. - С. 630- 635.
4. Арутюнян А. В. Свободно-радикальные процессы в сыворотке крови, печени, и толстой кишке при канцерогенезе, индуцируемом 1,2- диметилгидразином у крыс. / А.В. Арутюнян, В.М.Прокопенко, С.О. Бурмистров и др. // Вопросы онкологии,- 1997,- Т. 43.- № 6.- С. 618- 622.
5. Аскарова Э.Л. Генрация супероксидного радикала и текучесть мембранных липидов Acholeplasma Laidlawii при старении культуры клеток / Э.Л. Аскарова, А.Б. Капитанов, В. Кольтовер, О.С. Татищев // Биофизика. - 1987. - Т. ХХХИ, вып. 1. - С. 95-99.
6. Афанасьев И.Б. Исследование механизма взаимодействия противоракового антибиотика адриамицина с анион-радикалом 02./ И.Б. Афанасьев, Н.И. Полозова // Антибиотики и мед. биотехнология. - 1986.- Т. 31.- № 4,- С.261-264.
7. Белушкина Н.Н. Молекулярные основы апоптоза./ Н.Н. Белушкина.,
А. Хасан Хамад, С.Е. Северин // Вопр. Биол. Мед. Фарм. Химии. - 1998. -№ 4. -С. 15-24.
8. Блохин Н.Н. Химиотерапия опухолевых заболеваний. / Н.Н. Блохин, Н.И. Переводчикова// М.: Медицина, 1984. - 304 с.
9. Ванин А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях. /
А.Ф.Ванин // Вестник РАМН,- 2000.- №4,- С. 3 -5.
10. Вартанян JI.C. Исследование определения СОД активности в тканях животных с гетранитротетразоливым синим / JI.C. Вартанян, С.М. Гуревич // Вопросы мед. химии. - 1982. — № 5. - С.23-56.
11. Вартанян JI.C. Образование супероксидных радикалов в мембранах субклеточных органелл регенерирующей печени / Л.С. Вартанян, И.П. Садовникова, С.М. Гуревич, И.С. Соколова // Биохимия. - 1992. — Т. 57, вып.5. - С. 671 -678.
12. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга. / И.В. Викторов // Вестник РАМН.- 2000.-№4,- С. 5- 10.
13. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А. И. Деев, А.В. Козлов, А.Н. Осипов, Д.И. Рощупкин // Итоги науки и техники. - 1991. - Т. 29. - С. 241-250.
14. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты. / Ю.А. Владимиров // Вестник Рос. Акад. Мед. Наук. -1998.- № 7,- С.43-51.
15. Воскресенский О.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение / О.Н. Вокресенский, И.А. Жутаев // Вопросы мед. химии.-1994.-№3- С. 53-56.
16. Гаузе Г.Ф. Исследование молекулярных механизмов действия и применение противоопухолевых антибиотиков. / Г.Ф Гаузе, Ю.В. Дудник// Антибиотики. - 1982.- Т. 27. - № 2.- С. 9-18.