Механизм интернализации апоптотической протеазы растений Трусова Светлана Владимировна

Краткое описание

Трусова,СветланаВладимировна.Механизминтернализацииапоптотическойпротеазырастений: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.08 /ТрусоваСветланаВладимировна; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 119 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
правах рукописиТрусоваСветланаВладимировнаМеханизминтернализацииапоптотическойпротеазырастений03.01.08 - Биоинженерия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание

стр. 10
работы являлось выяснениемеханизмаинтернализациифитаспазы. В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи: 1. Установить, является лиинтернализацияфитаспазы специфичным процессом. 2. Выяснить, сохраняет ли фитаспаза после вхождения в клетку протеолитическую активность, или же это путь

стр. 15
субстратными предпочтениями, а их активность точно регулироваться, как во времени, так и в пространстве; с помощьюпротеазрастениеможет осуществлять регуляцию и контролировать ответ на различные стимулы [15]. Огромное числопротеазрастенийотносится к группе сериновыхпротеаз. Среди сериновыхпротеазрастений

Оглавление диссертациикандидат наук Трусова Светлана Владимировна
Список сокращений и условных обозначений
Введение
1. Субтилазы растений, их участие в стрессах и ПКС (обзор литературы)
1.1. Общая характеристика субтилизин-подобных протеаз
1.2. Особенности строения растительных субтилаз
1.2.1. Продомен
1.2.2. РА домен и в-шпилька каталитического домена
1.2.3. Фибронектин Ш-подобный домен
1.3. Субтилазы и стрессы у растений
1.3.1. Солевой стресс и субтилазы
1.3.2. Участие субтилаз в ответе на заражение патогенами
1.4. Программированная клеточная смерть у растений
1.4.1. Отсутствие апоптоза у растений
1.4.2. Вакуолярная клеточная смерть
1.4.3. Некротическая клеточная смерть у растений
1.4.4. Смешанные формы программированной клеточной смерти у растений
1.5. Субтилазы в программированной клеточной смерти: фитаспазы
1.5.1. Структура фитаспазы
1.5.2. Участие фитаспаз в развитии ПКС
1.5.3. Динамическая локализация фитаспазы в растении
2. Материалы и методы
2.1. Используемые штаммы бактерий и линии растений
2.2. Реактивы
2.3. Буферы и растворы
2.4. Векторы и плазмиды
2.4.1. Готовые векторы и плазмиды
2.4.2. pLEX7000/A tPhyt-mRFP
2.4.3. pLEX7000/mRFP
2.4.4. pCambia/EGFP-Hub1
2.4.5. pCambia/EGFP-Hub2
2.5. Получение компетентных клеток E. coli
2.6. Трансформация клеток E. coli
2.7. Трансформация агробактерий
2.8. Выращивание растений
2.9. Транзиентная продукция белков в листьях растений
2.10. Транзиентная продукция белков в проростках
2.11. Обработка антимицином А
2.12. Обработка метилвиологеном и хлоридом натрия
2.13. Окрашивание реагентом Evans Blue
2.14. Флуоресцентная микроскопия
2.15. Фракционирование листовой массы
2.16. ПААГ и вестерн-блот
2.17. Флуориметрический анализ активности фитаспаз
3. Перемещение фитаспазы из апопласта во внутриклеточное пространство осуществляется по клатрин-зависимому пути (результаты и их обсуждение)
3.1. Фитаспаза табака в нормальных условиях экспортируется во внеклеточное пространство
3.2. При стрессе фитаспаза табака меняет свою локализацию на внутриклеточную
3.3. Обработка антимицином А вызывает признаки клеточной смерти
3.4. Повышение активности фитаспазы вызывает признаки нарушения проницаемости клеточной мембраны
3.5. После изменения локализации фитаспаза сохраняет целостность и функциональную активность
3.6. Фитаспаза арабидопсиса ведет себя аналогично в проростках арабидопсиса
3.7. Фитаспаза арабидопсиса в гетерологичной системе (в листьях бентамианы) спонтанно перемещается в клетку
3.8. Фитаспаза арабидопсиса в бентамиане входит в клетку без индукции клеточной смерти
3.9. Фитаспаза входит в клетку специфично
3.10. Фитаспаза входит в клетку в составе мембранных везикул
3.11. Ингибитор клатрин-зависимого эндоцитоза Hub препятствует интернализации фитаспазы
3.12. Ингибитор клатрин-зависимого эндоцитоза препятствует интернализации активности фитаспазы
3.13. Ингибитор клатрин-зависимого эндоцитоза препятствует развитию признаков клеточной смерти
4. Заключение
5. Выводы
6. Список литературы