Молекулярно- генетические механизмы развития пузырчатки и подход к патогенетической терапии Абрамова Татьяна Валерьевна

Краткое описание

ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИдоктор наук Абрамова Татьяна Валерьевна
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ ВЗГЛЯДЫ НА ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ, КЛИНИЧЕСКОЕ ТЕЧЕНИЕ, ДИАГНОСТКУ И
МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ ПУЗЫРЧАТКИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1 Эпидемиология пузырчатки
1.2 Роль генетической предрасположенности в развитии пузырчатки
1.3 Роль толл-подобных рецепторов в развитии пузырчатки
1.4 Современная концепция патогенеза пузырчатки
1.4.1 Аутоантитела при пузырчатке
1.4.1.1 Антитела и клинический фенотип пузырчатки
1.4.2. Антигены при пузырчатке
1.4.2.1 Структурный компонент десмосом белок PERP и ген РЕЯР
1.4.3 Патофизиология акантолиза при пузырчатке
1.5 Клиническая картина пузырчатки
1.5.1 Клинические индексы в оценке тяжести пузырчатки
1.6 Методы диагностики пузырчатки
1.7 Современные методы терапии пузырчатки
1.8 Экспериментальное моделирование пузырчатки
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы исследования
2.2 Методы исследования
2.2.1 Клиническое обследование больных пузырчаткой
2.2.1.1 Оценка степени тяжести пузырчатки с использованием
клинических индексов
2.2.2 Цитологическое исследование мазков-отпечатков для определения
84
акантолитических клеток Тцанка
2.2.3 Первичная обработка биопсийного материала
2.2.4 Патоморфологическое исследование
2.2.5 Реакция непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием
ex vivo конфокального лазерного сканирующего микроскопа (КЛСМ) для выявления фиксированных антител (IgA, IgM, IgG) в коже............................ 0„
о/
2.2.6 Реакция иммунофлюоресценции с использованием ex vivo конфокального лазерного сканирующего микроскопа для изучения экспрессии структурного белка десмосом белка PERP
2.2.7 Метод ПЦР с детекцией продуктов в режиме реального времени для количественного определения экспрессии гена толл-подобного рецептора
7 типа (TLR7)
2.2.8 Иммуноферментный анализ (ИФА) для определения антител к десмоглеинам 1 и 3 типов
2.2.9 Метод секвенирования для определения нуклеотидной последовательности гена PERP
2.2.10 Методологии, использованные при получении экспериментальной модели пузырчатки на лабораторных животных (новорожденных мышах
100
линии BALB/C)
2.2.10.1 Выделение и очистка препаратов суммарных IgG из сывороток крови больных пузырчаткой и здоровых лиц методом аффинной хроматографии
2.2.10.2 Проведение экспериментальных работ с введением лабораторным животным (новорожденным мышам линии BALB/c) препаратов суммарных IgG человека
2.2.11 Технологии, использованные при создании иммуносорбента для селективного удаления аутоантител к Dsg3 из сыворотки крови больных пузырчаткой
2.2.11.1 Иммуносорбция антител к десмоглеину 3 типа из сыворотки крови человека
2.2.11.2 Применение иммуносорбента для удаления антител к Dsg3
112
из крови больных пузырчаткой
2.2. Статистическая обработка данных
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ БОЛЬНЫХ ПУЗЫРЧАТКОЙ
3.1 Клиническая характеристика больных пузырчаткой
3.2 Клинические индексы в оценке тяжести пузырчатки
3.2.1 Индекс площади поражения при пузырчатке (PDAI, Pemphigus Disease Area Index) в оценке тяжести клинического состояния больных пузырчаткой
3.2.2 Балльная оценка тяжести аутоиммунного буллезного заболевания кожи (ABSIS, Autoimmune Bullous Skin Disorder Intensity Score) в оценке тяжести клинического состояния больных пузырчаткой
3.2.3 Индекс активности вульгарной пузырчатки (PVAS, Pemphigus Vulgaris Activity Score) в оценке тяжести клинического состояния больных
134
пузырчаткой
3.2.4 Корреляция индексов PDAI, ABSIS, PVAS и DIDS у больных
136
пузырчаткой
Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ БОЛЬНЫХ ПУЗЫРЧАТКОЙ
4.1 Результаты цитологического, патоморфологического, иммунофлюоресцентного методов исследования при обследовании
140
больных пузырчаткой
4.2 Результаты изучения уровня циркулирующих антител к десмоглеинам
144
1 и 3 типов у больных пузырчаткой
4.3 Результаты изучения патогенетической роли гена PERP и кодируемого им структурного белка десмосом PERP в развитии
152
пузырчатки
4.3.1 Характеристика белок-кодирующей последовательности экзонов гена PERP у больных пузырчаткой и оценка возможной взаимосвязи полиморфизмов с клиническими особенностями заболевания
4.3.2 Результаты определения экспрессии белка PERP в коже больных пузырчаткой
4.4 Оценка роли толл-подобного рецептора 7 типа в патогенезе пузырчатки на основании изучения его экспрессии в коже больных
методом ПЦР с детекцией продуктов в режиме реального времени
Глава 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
5.1 Создание экспериментальной модели пузырчатки на лабораторных животных (неонатальных мышах инбредной линии BALB/c)
5.2 Разработка и оценка in vitro и in vivo эффективности экспериментального способа элиминации антител к десмоглеину 3 типа из крови больных пузырчаткой
5.2.1 Создание иммуносорбента для селективного связывания и удаления аутоантител - IgG к десмоглеину 3 типа из крови больных пузырчаткой
5.2.2 Оценка in vitro эффективности экспериментального способа элиминации антител к десмоглеину 3 типа из крови больных пузырчаткой
5.2.3 Оценка in vivo эффективности экспериментального способа
194
элиминации антител к десмоглеину 3 типа из крови больных пузырчаткой 5.2.4. Оценка in vitro эффективности экспериментального способа элиминации антител к десмоглеину 3 типа из крови больных
196
пузырчаткой
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ