Молекулярные основы взаимодействия нейротоксинов паукообразных с потенциал-чувствительными натриевыми каналами Беркут Антонина Анатольевна

Краткое описание

Беркут,АнтонинаАнатольевна.Молекулярныеосновывзаимодействиянейротоксиновпаукообразныхспотенциал-чувствительныминатриевымиканалами: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.02 /БеркутАнтонинаАнатольевна; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 120 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
академии наук На правах рукописиБеркутАнтонинаАнатольевнаМолекулярныеосновывзаимодействиянейротоксиновпаукообразныхспотенциал-чувствительныминатриевымиканалами03.01.02 биофизика ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.х.н. Василевский А.А.

стр. 7
особенностей токсиновпаукообразныхи механизма их действия напотенциал-чувствительныенатриевыеканалы. В соответствии с целью были поставлены следующие задачи: • Выявить структурные особенностинейротоксиновпаукообразных(α-токсинов скорпионов и ингибиторов активации Nav из пауков), определяющие их селективность

стр. 9
targets, sodium channels. J Biol Chem 288(26), pp19014 19027. IF 4.106 10 Глава 1. Обзор литературыПотенциал-чувствительныенатриевыеканалыПотенциал-чувствительныенатриевыеканалы(Nav) ‒ интегральные мембранные белки, ответственные за селективный перенос ионов натрия через клеточную мембрану в ответ

Оглавление диссертациикандидат наук Беркут Антонина Анатольевна
Общая характеристика работы
Актуальность работы
Объекты исследования
Цель и задачи исследования
Научная новизна и практическая значимость работы
Личный вклад автора
Апробация работы
Публикации...............................................................................................................Error! Bookmark not defined.
Глава 1. Обзор литературы
Потенциал-чувствительные натриевые каналы
Структурная организация Nav
а-Субъединица
Потенциал-чувствительный домен и инактивационная петля
Поровый домен и селективный фильтр
Р-Субъединица
Цикл работы Nav
Активация натриевого канала
Инактивация натриевого канала
Быстрая инактивация
Медленная инактивация
Заболевания, связанные с нарушением работы Nav
Болевые синдромы
Эпилепсия
Рак
Заболевания сердца
Нервно-мышечные расстройства
Миотонии
Периодические параличи
Лиганды Nav
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Гетероциклические молекулы
ц-Конотоксины
Другие пептидные блокаторы
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
а-Токсины скорпионов
Общая информация и классификация а-токсинов скорпионов
Структурные особенности, определяющие селективность а-токсинов скорпионов
О связывании а-токсинов скорпионов с N8*-
Токсины актиний
Другие лиганды
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Р-Токсины скорпионов
Токсины пауков, облегчающие активацию и/или ингибирующие инактивацию N8*-
Токсины, ингибирующие активацию
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Токсины, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Лиганды, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Лиганды, взаимодействующие с рецепторным сайтом
Недостатки существующей классификации рецепторных сайтов
Глава 2. Материалы и методы
Материалы
Оборудование и расходные материалы
Реактивы
Наборы реактивов
Бактериальные штаммы
Растворы
Программное обеспечение
Методы
Полимеразная цепная реакция
Выделение и очистка ДНК из ПЦР-смеси
Синтез гена, кодирующего целевой продукт
Рестрикция плазмиды рЕТ-32 и синтетического гена
Электрофорез в агарозном геле
Выделение ДНК из агарозного геля
Лигирование синтетического гена и линеаризованной плазмиды pET-32
Трансформация клеток E. coli методом теплового шока
Трансформация клеток E. coli методом электропорации
Отбор трансформантов, несущих целевой ген
Выделение плазмидной ДНК
Секвенирование ДНК
Контролируемая экспрессия гена химерного белка
Ультразвуковая дезинтеграция клеток
Аффинная хроматография
УФ-спектрометрия
Гидролиз гибридного белка BrCN
Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография
Масс-спектрометрия
Экспрессия генов ионных каналов
Электрофизиологические исследования
Построение моделей пространственной структуры токсинов
Расчеты молекулярной динамики для а-токсинов скорпионов
Расчеты молекулярного гидрофобного потенциала
Картирование гидрофобных свойств поверхности молекул а-токсинов
Оценка гидрофобных характеристик внеклеточных петель Nav
Связывание с липидными везикулами
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение
Изучение структурно-функциональных особенностей а-токсинов скорпионов
Анализ молекулярных поверхностей а-токсинов скорпионов для выявления основ их таксономической селективности
Модульное строение а-токсинов скорпионов
Создание базы данных последовательностей а-токсинов скорпионов
Различная подвижность модуля специфичности у разных групп а-токсинов скорпионов
Связь гидрофильности модуля специфичности с селективностью а-токсинов скорпионов
Использование анализа гидрофильности поверхности для предсказания селективности а-токсинов скорпионов
Создание инсекто- и млекоселективного а-токсинов на основе а-подобного токсина
Выбор объекта мутагенеза
Дизайн производных ВеМ9 с заданными свойствами
Получение ВеМ9 и его производных
Тестирование активности производных ВеМ9
Неудачные попытки изменения селективности ВеМ9
Изменение физико-химических свойств поверхности а-токсинов скорпионов
Пересадка модулей специфичности
Внесение точечных аминокислотных замен
Млекоселективное производное М9
Инсектоселективное производное М9
Уточнение сайта связывания а-токсинов скорпионов
Изучение структурно-функциональных особенностей ингибиторов активации N8*-
Изучение структурных и функциональных особенностей токсина Нт-3
Выбор объекта исследования
Получение рекомбинантного токсина Нт-3 и исследование его пространственной структуры
Электрофизиологическая характеристика Нт-3
Активность Нт-3 в отношении ионных каналов
Особенности действия Нт-3 на N8*-
Анализ взаимодействия Нт-3 с липидными мембранами
Анализ взаимодействия Нт-3 с
Ингибиторы активации N8*- - потенциальные лекарства от гипокалиемического периодического паралича
Промежуточное заключение
Выводы
Благодарности
Список сокращений
Список литературы