Определение пространственной структуры человеческого цистеинил-лейкотриенового рецептора 1 класса GPCR Лугинина Александра Павловна

Краткое описание

Лугинина,АлександраПавловна.Определениепространственнойструктурычеловеческогоцистеинил-лейкотриеновогорецептора1классаGPCR: диссертация ... кандидата физико-математических наук : 03.01.02 /ЛугининаАлександраПавловна; [Место защиты: Московский физико-технический институт (национальный исследовательский университет)]. - Москва, 2019. - 137 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
исследовательский университет)» На правах рукописиЛугининаАлександраПавловнаОпределениепространственнойструктурычеловеческогоцистеиниллейкотриеновогорецептора1классаGPCRСпециальность: 03.01.02 Биофизика Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Научный руководитель:

стр. 2
апробация результатов Объем иструктурадиссертации ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ РАБОТЫ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 1.ОпределениепространственнойструктурырекомбинантныхGPCR12 12 15 18 22 25 26Рецепторы, сопряженные с G-белком Консервативные мотивыGPCRрецепторовклассаА Генетические конструкции для кристаллизации

стр. 11
методологию по получениюпространственнойструктурыGPCRрецепторов, а также результаты предыдущих исследованийцистеинил-лейкотриеновогорецептора1 человека, материалов

Оглавление диссертациикандидат наук Лугинина Александра Павловна
Оглавление
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования
Цели и задачи работы
Научная новизна
Теоретическая и практическая значимость
Методология и методы исследования
Положения, выносимые на защиту
Степень достоверности и апробация результатов
Объем и структура диссертации
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ РАБОТЫ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Определение пространственной структуры рекомбинантных СРСЯ методом рентгеноструктурного анализа
1.1 Рецепторы, сопряженные с О-белком
1.2 Консервативные мотивы GPCR рецепторов класса А
1.3 Генетические конструкции для кристаллизации GPCR
1.4 Экспрессия GPCR
1.5 Очистка GPCR
1.6 Кристаллизация GPCR в липидной кубической фазе
1.7 Источники рентгеновского излучения для исследования пространственной структуры белков
2. Цистеинил-лейкотриеновый рецептор человека
2.1 Биосинтез лейкотриенов
2.2 Су8ЬТ^: характеризация, распределение в тканях, механизм передачи сигнала
2
2
2
Физиологическая роль в организме и связанные с рецептором патологии Лиганды CysLTlR
Анализ первичной последовательности и полиморфизмы CysLTlR
36
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Материалы
1.1 Получение генетических конструкций и бакмиды
1.2 Экспрессия CysLTlR
1.3 Очистка и анализ CysLTlR
1.4 Кристаллизация CysLTlR
1.5 Плазмиды и штаммы клеток
2. Методы
2.1 Приготовление компетентных клеток
2.2 Получение генно-инженерных конструкций CysLTlR
2.3 Ведение клеточной культуры Б/9
2.4 Экспрессия СУБЬТШ в клетках насекомых
2.5 Выделение и очистка CysLTlR
2.6 Методы анализа белка
2.7 Кристаллизация CysLTlR
2.8 Получение дифракционных данных и решение структуры
2.9 Докинг лейкотриена и симуляция различных состояний кармана
2.10 Функциональные тесты
2.11 Исследование натриевого сайта CysLTlR
РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ
1. Генно-инженерные конструкции Су8ЬТ1Я
1.1 Используемые методы клонирования
1.2 Оптимизация конструкций
1.3 Кристаллизационная конструкция
3
2. Оптимизация условий экспрессии
3. Оптимизация протокола очистки Су8ЬТ1Я
4. Кристаллизация СувЬТ^
4.1 Диффузия в липидной кубической фазе
4.2 Кристаллизация конструкций с К-концевым BRIL
4.3 Получение кристаллов CysLTlR
5. Анализ структуры Су8ЬТ^
5.1 Анализ кристаллографических данных
5.2 Проверка функциональности мутантных форм CysLTlR
5.3 Особенности архитектуры рецептора
5.4 Необычная конформация мотивов
5.5 Сайт связывания натрия
5.6 Лиганд-связывающий карман
5.7 Латеральный вход лиганда в карман
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ РАБОТЫ
ОПУБЛИКОВАННЫЕ РАБОТЫ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ