Оптимизация биотехнологического производства субстанций рекомбинантных интерферонов человека для создания на их основе препаратов ветеринарного назначения Гавриков, Алексей Валерьевич

Краткое описание

Гавриков,АлексейВалерьевич.Оптимизациябиотехнологическогопроизводствасубстанцийрекомбинантныхинтерфероновчеловекадлясозданиянаихосновепрепаратовветеринарногоназначения: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.23. - Москва, 2006. - 102 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
61:07-3/360 На правах рукописиГАВРИКОВАЛЕКСЕЙВАЛЕРЬЕВИЧОптимизациябиотехиологического ироизводствасубстанцийрекомбииантных иитерфероновчеловекадлясозданияна ихосновеиренаратовветеринарногоназначения03.00.23. - биотехнология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени кандидата биологаческих

стр. 93
человеческогоинтерферонаа11ьфа-2Ь с использованием одной хроматографической стадии очистки на катионите SP-Toyopearl, успешно применяется последние два года в ЗАО «Мосагроген», и Москва,дляее полученияосновеветеринарнойветеринарныхсубстанциипрепаратовинтерферонасозданияна не культивирования,

стр. 94
себестоимость. 4. Разработаны варианты технологии выделения и очисткиинтерферонаа2Ь, с общим выходом 50 - 60 %, позволяющие получатьсубстанциюинтерферонаветеринарногои фармакопийного качества. Препаративный уровень соответствует получению порядка 150 тысветеринарныхтерапевтических доз и 3 млн. медицинских терапевтических доз. 5. Созданные в работе новые штаммы-продуцентырекомбинантныхинтерфероновчеловекаи промышленных способов...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Гавриков, Алексей Валерьевич
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Оптимизация экспрессии гетерологичных белков в Escherichia coli
1.2. Создание штаммов-продуцентов интерферона альфа-2Ь на основе Escherichia coli и их ферментационное культивирование.
1.3. Выделение и очистка интерферона альфа-2Ь.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы.
2.2. Методы.
2.2.1. Генноинженерные методики.
2.2.2. Ферментационное культивирование в 2-х л ферментере.
2.2.3. Ферментационное культивирование в 30-и л ферментере.
2.2.4. Получение телец включения.
2.2.5. Получение грубого экстракта интерферона.
2.2.6. Очистка интерферона на катионите SP-Toyopearl.
2.2.7. Очистка интерферона с использованием ОФ-ВЭЖХ.
2.2.8. Аналитические методы.
2.2.8.1. Измерение концентрации белка.
2.2.8.2. Постановка белкового SDS электрофореза.
2.2.8.3. ВЭЖХ.
2.2.8.4. Метод молекулярной гибридизации на остаточную ДНК штамма-хозяина и вектора.
2.2.8.5. Метод ИФА на остаточные белки штамма-продуцента.
2.2.8.6. Метод биологического тестирования активности интерферона.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследования влияния различных факторов на уровень экспрессии альфа-F интерферона под контролем регуляторных элементов Т7-экспрессионной системы.
3.1.1. Создание вариантов гена человеческого альфа-F интерферона с различными заменами редко встречающихся кодонов и их клонирование в векторную плазмиду рЕТ22(Ь+).
3.1.2. Влияние тандема терминаторов транскрипции в 3'-нетранслируемой области гена.
3.2. Создание и ферментационное культивирование штаммапродуцента альфа-2Ь интерферона.
3.2.1. Создание штамма-продуцента человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2Ь.
3.2.2. Подбор условий культивирования на лабораторном 2-х л ферментере Multigen.
3.2.3. Масштабирование ферментационного процесса на промышленном 30-и л ферментере Marubishi.
3.3. Создание технологии выделения и очистки человеческого рекомбинантного интерферона альфа-2Ь.
3.3.1. Получение грубого экстракта нативного мономера интерферона.
3.3.2. Хроматография на катионите SP-Toyopearl 550-С.
3.3.3. Хроматография на полу препаративном ОФ-ВЭЖХ, ODS.