Получение и исследование свойств рекомбинантных антител к гликопротеину вируса бешенства для постэкспозиционной профилактики заболевания Ильина Екатерина Николаевна

Краткое описание

Ильина,ЕкатеринаНиколаевна.Получениеиисследованиесвойстврекомбинантныхантителкгликопротеинувирусабешенствадляпостэкспозиционнойпрофилактикизаболевания: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.08 /ИльинаЕкатеринаНиколаевна; [Место защиты: Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова]. - Москва, 2019. - 115 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М.В. ЛОМОНОСОВА БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ На правах рукописиИльинаЕкатеринаНиколаевнаПолучениеиисследованиесвойстврекомбинантныхантителкгликопротеинувирусабешенствадляпостэкспозиционнойпрофилактикизаболевания03.01.08 Биоинженерия ДИССЕРТАЦИЯ

стр. 2
ПАТОГЕНЕЗАБЕШЕНСТВА....................................... 13Вирусбешенства............................................................................................................... 13 Патогенезбешенства. ....................................................................................................... 14 Уход от распознавания иммунной системой. ................................................................ 18ПРОФИЛАКТИКАРАЗВИТИЯ...

стр. 9
активностью противвирусабешенства. Цель данной работы заключалась вполучениирекомбинантныхмоноклональныхантителс высокой вируснейтрализующей активностьюдлясоздания иммунотерапевтического средства пост-экспозиционнойпрофилактикизаболеваниябешенствому людей.Длядостижения данной цели были поставлены

Оглавление диссертациикандидат наук Ильина Екатерина Николаевна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ПАТОГЕНЕЗА БЕШЕНСТВА
Вирус бешенства
Патогенез бешенства
Уход от распознавания иммунной системой
ПРОФИЛАКТИКА РАЗВИТИЯ БЕШЕНСТВА У ЛЮДЕЙ: ДО И ПОСЛЕ ЗАРАЖЕНИЯ
Антирабические вакцины для человека
Постэкспозиционная профилактика
Поликлональные антирабические иммуноглобулины (RIG)
мАТ против RABV
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ И СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ мАТ ПРОТИВ RABV
Антигенная специфичность мАТ RABV
Способы получения терапевтических мАТ против RABV
Обеспечение эффективной наработки антител
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕАКТИВЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Буферные растворы
Многокомпонентные растворы:
Микробиологические среды
Эукариотические среды и реактивы
Приготовление полной ростовой среды с ГАТ
МЕТОДЫ
Синтез генов вариабельных доменов с помощью перекрывающихся праймеров и
ПЦР
Получение В-лимфоцитов человека, продуцирующих мАТ к ГПВБ
Соматическая гибридизация иммунных В-лимфоцитов человека с клетками миеломы
Гликопротеин вируса бешенства
Выделение РНК
Обратная транскрипция и получение специфических нуклеотидных последовательностей, кодирующих целевые белки
Амплификация и сборка нуклеотидных последовательностей с помощью ПЦР
Электрофорез ДНК в агарозном геле
Секвенирование нуклеотидных последовательностей
Анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей
Получение генноинженерных конструкций
Приготовление химически компетентных клеток
Приготовление компетентных клеток для электропорации
Получение плазмидных конструкций для транзиентной экспрессии новых рекомбинантных мАТ 6В2, 1С5 и ЯаЪБ4, а также контрольных мАТ СЯ57 и СЯ4098
Экспрессия генов
Выделение и очистка белков
Электрофорез белков в 8Б8-ПААГ
Иммунохимическая характеризация мАТ против ГПВБ
Масс-спектрометрический анализ мАТ
Определение участка связывания ГПВБ мАТ 1С5 и мАТ ЯаЪБ4 с помощью конкурентного ИФА
Оценка антирабической вируснейтрализующей активности мАТ
Определение вируснейтрализующей активности в интрацеребральном тесте на мышах Ба1Ъ/е с использованием вируса бешенства штамм СУ8-11
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ПОЛУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИОННОЙ КОНСТРУКЦИИ, КОДИРУЮЩЕЙ ПОЛНОРАЗМЕРНОЕ ГУМАНИЗИРОВАННОЕ мАТ 1С5
ПОЛУЧЕНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ мАТ К ГПВБ
МЛЬБ1 АНАЛИЗ ДЛЯ мАТ 6Б2 И ЯЛББ4
ПОЛУЧЕНИЕ ПЛАЗМИДНЫХ КОНСТРУКЦИЙ ДЛЯ ТРАНЗИЕНТНОЙ ЭКСПРЕССИИ НОВЫХ РЕКОМБИНАНТНЫХ мАТ 6В2, ЯЛББ4 И 1С5, А ТАКЖЕ КОНТРОЛЬНЫХ мАТ СЯ57 И СЯ4098
БИОСИНТЕЗ И ВЫДЕЛЕНИЕ
ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ мАТ
ПРОВЕРКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ мАТ В НЕПРЯМОМ ИФА
АФФИННОСТЬ мАТ
ВЫДЕЛЕНИЕ ГПВБ С ПОМОЩЬЮ МЕТАЛЛ-АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ мАТ ПРОТИВ ВИРУСА БЕШЕНСТВА ПО ОТНОШЕНИЮ К РЕКОМБИНАНТНОМУ ГПВБ МЕТОДОМ НЕПРЯМОГО ИФА
ИММУНОБЛОТТИНГ мАТ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ В ИНТРАЦЕРЕБРАЛЬНОМ ТЕСТЕ НА МЫШАХ Ба1Ъ/с С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВИРУСА БЕШЕНСТВА ШТАММ СУ8-11
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭПИТОПНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ мАТ 1С5 и ЯаЪБ4 С ПОМОЩЬЮ КОНКУРЕНТНОГО ИФА
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
115