Роль AB домена в функционировании парвальбумина Вологжанникова Алиса Андреевна

Краткое описание

Вологжанникова,АлисаАндреевна.РольABдоменавфункционированиипарвальбумина: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.02 /ВологжанниковаАлисаАндреевна; [Место защиты: ФГАОУ ВО «Московский физико-технический институт (национальный исследовательский университет)»]. - Пущино, 2020. - 184 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ВологжанниковаАлисаАндреевнаРОЛЬABДОМЕНАВФУНКЦИОНИРОВАНИИПАРВАЛЬБУМИНАСпециальность: 03.01.02 Биофизика Диссертация на соискание ученой степени

стр. 8
обусловливающие конформационную стабильность апо-белка, остаются невыясненными.РольABдоменавфункционированииПА в основном изучали с использованием фрагментов белка, соответствующих ABдоменуи остальной части белка. Отметим, что такое фрагментирование белка сопряжено с глубокими структурными изменениями.

стр. 34
семейства «EF-руки» Кальмодулин Скелетный тропонин С S100P Онкомодулин (rWT)ПарвальбуминРековерин Металлсвязывающий центр EF1 EF2 EF3 EF4 N-домен(EF1, EF2) С-домен(EF3, EF4) N-доменС-доменCD-доменEF-домен1 2 EF2 EF3 Ка (Са2+), М-1 1×107 4×107 3,2×106 2,5×106 1×104 1×106 1×106 1×108 1×104 2,5×107 2,3×106

Оглавление диссертациикандидат наук Вологжанникова Алиса Андреевна
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель и задачи исследования
Научная новизна
Практическая значимость
Положения, выносимые на защиту
Вклад автора
Апробация диссертации
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Конформационные состояния белков
Свернутые и развернутые состояния
Расплавленная глобула и близкие к ней состояния
Белки с внутренней неупорядоченностью
Функции белков с внутренней неупорядоченностью
Посттрансляционные модификации
Общая характеристика посттрансляционных модификаций
Ы-концевое ацетилирование в прокариотах
Ы-концевое ацетилирование в эукариотах
Са2+-связывающие белки
Общая характеристика Са2+-связывающих белков
Белки семейства «EF-руки»
Парвальбумины
Локализация в различных организмах
Функциональная роль
Структурные свойства
Металлсвязывающие свойства и изменения, вызываемые связыванием ионов металлов
Редокс-потенциал и его поддержание в клетке
Окислительно-восстановительные реакции в клетке иредокс-пары
Редокс-потенциал
Сульфгидрильные группы белков и их роль в клетке
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалы
Выделение интактного и рекомбинантного а-ПА щуки
Выделение интактного и рекомбинантного а-ПА крысы
Выделение рекомбинантного в-ПА крысы и его мутанта
Выделение интактного и рекомбинантного в-ПА кижуча
Методы
Приготовление стандартного раствора калиевой соли ЭДТА/ЭГТА
Масс-спектрометрия
Тест Эллмана
Восстановление тиольных групп в-ПА
Очистка белка от катионов металлов
Дифференциальная сканирующая калориметрия
Круговой дихроизм
Ограниченный протеолиз
Метод химического сшивания глутаровым альдегидом
Динамическое светорассеяние
Флуоресцентные измерения
Оценка равновесных констант связывания Са2+М^+ белком
Определение сродства к Са2+ методом Са2+-буферов
Оценка сродства к Mg2+ методом равновесного диализа
Оценка кинетических констант ассоциации/диссоциации Са2+М^+ белком
Спектрофотометрическое рН титрование
Приготовление дисульфидного димерарекомбинантного в-ПА крысы
Определение редокс-зависимости дисульфидной димеризации в-ПА крысы
Расчет идентичности аминокислотных последовательностей
Предсказание внутренней неупорядоченности белка
Анализ аминокислотного состава белка
Статистическая обработка экспериментальных данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Влияние ^концевого ацетилирования на структурно-функциональные свойства
парвальбумина
Выделение и масс-спектрометрическая характеризация интактной и рекомбинантной
форм а-ПА
Особенности тепловой денатурации а-ПА
Сравнение вторичных структур интактной и рекомбинантной форм а-ПА
Ограниченный протеолиз а-ПА
Металлсвязывающие свойства а-ПА
Структурное объяснение эффектов, обусловленных Ш-ацетилированием а-ПА
Консервативный цистеин Р-ПА в качестве возможного редокс-сенсора
Получение и масс-спектрометрическая характеризация в-ПА
Оценка рКа для тиольной группы рекомбинантного в-ПА
Редокс-потенциал тиольной группы в-ПА
Влияние замены C18S на структурно-функциональные свойства в-ПА
Структурная стабильность апо-парвальбуминов и ее предсказание
Получение в-парвальбумина кижуча
Структурная стабильность в-ПА кижуча
Четвертичная структура в-ПА кижуча
Металлсвязывающие свойства в-ПА кижуча
Особенности физико-химических свойств интактногов-ПА кижуча
Предсказание относительной стабильности апо-ПА
Взаимосвязь между стабильностью апо-ПА и сродством белка к Са2+
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ А
ПРИЛОЖЕНИЕ Б