Создание рекомбинантного аденовируса птиц CELO, экспрессирующего ген фибера вируса ССЯ-76 Капитонов, Андрей Владимирович

Краткое описание

Капитонов, Андрей Владимирович.
Создание рекомбинантного аденовируса птиц CELO, экспрессирующего ген фибера вируса ССЯ-76 : диссертация ... кандидата ветеринарных наук : 16.00.03. - Москва, 2004. - 121 с. : ил.
ОГЛАВЛЕНИЕ ДИССЕРТАЦИИкандидат ветеринарных наук Капитонов, Андрей Владимирович
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ б
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Синдром снижения яйценоскости кур (ССЯ-76)
1.1.1. Описание заболевания и история открытия ССЯ
1.1.2. Эпизоотологические особенности
1.1.3. Экспериментальная инфекция
1.1.3.1. Патогенез
1.1.3.2. Передача возбудителя
1.1.3.3. Вирусоносительство и вирусовыделение
1.1.3.4. Симптомы
1.1.3.5. Патологоанатомические изменения
1.1.4. Антигенная активность вируса ССЯ
1.1.5. Профилактика синдрома снижения яйценоскости
1.2. Структурно-функциональная организация аденовирусов
1.2.1. Гексон
1.2.2. Пентон
1.2.3. Другие структурные белки (Ilia, V,
VII, VIII, IX, X-XII)
1.3. Аденовирус птиц CELO
1.3.1. Общая характеристика аденовируса
1.3.2. Структурно-функциональная организация генома аденовируса CELO
1.3.3. Эукариотические векторы на основе генома аденовируса птиц CELO
2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Вирусы и бактериальные штаммы
2.1.2. Клеточные линии
2.1.3. Плазмидные векторы
2.1.4. Ферменты и другие реактивы
2.1.5. Животные
2.2. Методы
2.2.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК
2.2.2. Выделение аналитических количеств плазмидной ДНК
2.2.3. Гидролиз ДНК специфическими эндодезоксирибонуклеазам
2.2.4. Фракционирование фрагментов ДНК методом электрофореза в агарозном
2.2.5. Препаративное разделение фрагментов ДНК и элюция их из геля
2.2.6. Лигирование фрагментов ДНК 52 & 2.2.7. Трансформация клеток Е. Coli
2.2.8. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.2.9. Полимеразная цепная реакция
2.2.10. Синтез дезоксиолигонуклеотидов 55 'Ь 2.2.11. Трансфекция клеток линии LMH для получения рекомбинантных аденовирусов
2.2.12. Накопление вирусов
2.2.13. Очистка и концентрирование аденовирусов
2.2.14. Титрование вирусов
2.2.15. Выделение вирионной ДНК
2.2.16. Выделение ДНК из клеток, зараженных аденовирусом
2.2.17. Гидрофобная хроматография
2.2.18. Реакция гемагглютинации
2.2.19. Реакция торможения гемагглютинации
2.2.20. Получение гипериммунной сыворотки
2.2.21. Электрофорез белков в ПААГ-ДСН
PAGE -SDS)
2.2.22. Иммуноблоттинг (WESTERN BLOT IMMUNOASSAY)
2.2.23. Непрямой иммуноферментный анализ (Indirect ELISA)
3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 65 3.1. Конструирование рекомбинантного аденовируса на основе генома СЕЮ
3.1.1. Получение гена фибера
3.1.2. Получение экспрессирующей кассеты, содержащей ген фибера
3.1.3. Получение и очистка рекомбинантного вируса CELO, несущего экспрессирующую кассету, содержащую ф ген фибера
3.1.4. Наращивание вируса CELO-Фибер в препаративных количествах
3.2. Разработка иммуноферментной системы детекции фибера ССЯ
3.2.1. Получение очищенного белка фибера ССЯ-7 6 методом ионообменной хроматографии
3.2.2. Анализ полученной фракции очищенного белка фибера ССЯ
3.2.3. Получение гипериммунной сыворотки и проверка ее специфичности
Щ 3.3. Экспрессия фибера ССЯ-7 6 рекомбинантным аденовирусом CELO-Фибер
3.4. Исследование гуморального иммунного ответа в организме лабораторных животных при инъекции им рекомбинантного вируса CELO-Фибер
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ