Трансгенные растения табака и картофеля, экспрессирующие гены гетерологичных секреторных нуклеаз, как модель для изучения вирусоустойчивости Трифонова, Екатерина Александровна

Краткое описание

Трифонова,ЕкатеринаАлександровна.Трансгенныерастениятабакаикартофеля,экспрессирующиегеныгетерологичныхсекреторныхнуклеаз,какмодельдляизучениявирусоустойчивости: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Новосибирск, 2006. - 111 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
61:06-3/738 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ И ГЕНЕТИКИ На правах рукописиТрифоноваЕкатеринаАлександровнаТрансгенныерастеннятабакаикартофеля, экснресснрующиегеныгетерологичныхсекреторныхнуклеаз,какмодельдляизучениявирусоустоичивости Генетика-03.00.15 Диссертация

стр. 2
вирусоустойчивыхрастенийпутем трансгенеза. 1.4. Другие подходы создания вирусоустойчивыхрастенийпутем трансгенеза. 1.4.1.Трансгенныерастения,экспрессирующиеN-генытабака. 1.4.2.Трансгенныерастения,экспрессирующиегеныа- и р-интерферона человека и 2'-5'-олигоаденилатную противовирусную систему млекопитающих. 1.4.3.Трансгенныерастения,экспрессирующиеантитела. 1.4.4....

стр. 7
секреторныхнуклеаз, позволяющие новыщать уровень нуклеазной активности втрансгенныхрастениях. 2. Получитьтрансгенныерастениятабакаикартофеля, экснрессирующиегенысекреторныхнуклеаз. 3. Оценить уровень нуклеазной активности в полученныхтрансгенныхрастенияхи ее локализацию. 4. Определить степеньвирусоустойчивоститрансгенныхрастенийтабакас повыще1нюй...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Трифонова, Екатерина Александровна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Неспецифические системы устойчивости высших растений к вирусным патогенам.
1.1.1. Системная приобретенная устойчивость.
1.1.2. Использование генов PR-белков в генетической инженерии.
1.1.3. Системная устойчивость, индуцируемая непатогенными почвенными бактериями.
1.1.4. Устойчивость, индуцируемая насекомыми-фитофагами.
1.2. Специфические системы защиты растений от вирусных патогенов.
1.2.1. Перекрестная защита.
1.2.2. Использование механизмов перекрестной защиты для создания вирусоустойчивых растений путем трансгенеза: трансгенные растения, экспрессирующие гены капсидных белков вирусов.
1.2.3. Индуцируемый вирусами генетический сайленсинг.
1.2.4. Использование механизмов генетического сайленсинга для создания вирусоустойчивых растений путем трансгенеза.
1.3. Использование неструктурных генов вирусного происхождения для создания вирусоустойчивых растений путем трансгенеза.
1.4. Другие подходы создания вирусоустойчивых растений путем трансгенеза.
1.4.1. Трансгенные растения, экспрессирующие N-гены табака.
1.4.2. Трансгенные растения, экспрессирующие гены а- и p-интерферона человека и 2'-5'-олигоаденилатную противовирусную систему млекопитающих.
1.4.3. Трансгенные растения, экспрессирующие антитела.
1.4.4. Трансгенные растения, экспрессирующие гены белков, инактивирующих рибосомы.
1.4.5. Трансгенные растения, экспрессирующие гены рибозимов.
1.5. Роль нуклеаз в физиологических процессах высших растений.
1.5.1. Роль нуклеаз в генерации индуцируемой устойчивости растений к патогенам.
1.5.2. Трансгенные растения, экспрессирующие гены нуклеаз.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы.
2.2.Методы.
2.2.1. Конструирование и анализ векторов.
2.2.2. Приготовление и трансформация компетентных клеток E.coli.
2.2.3. Выделение и анализ плазмидной ДНК.
2.2.4. Полимеразная цепная реакция.
2.2.5. Приготовление и прямая трансформация компетентных клеток Agrobacterium tumefaciens.
2.2.6. Получение трансгенных растений табака и картофеля.
2.2.7. Определение активности неомицинфосфотрансферазы II в трансгенных растениях.
2.2.8. Выделение и анализ геномной ДНК растений методом блот-гибридизации.
2.2.9. Определение нуклеазной активности грубых экстрактов растений табака и картофеля.
2.2.10. Анализ спектра белков с нуклеазной активностью в экстрактах трансгенных и контрольных растений в SDS-полиакриламидном геле с добавлением РНК в матрикс разделяющего геля.
2.2.11. Линии вирусов и инфицирование растений.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Создание модельных конструкций, экспрессирующих гены гетерологичных секреторных нуклеаз.
3.1.1. Клонирование гена нуклеазы Serratia marcescens.
3.1.2. Клонирование гена панкреатической рибонуклеазы быка.
3.2. Получение трансгенных растений табака.
3.3. Анализ полученных трансформантов на экспрессию маркерного гена, наличие полноразмерной вставки и инсерции в геномной ДНК.
3.4. Анализ полученных трансгенных растений табака на наличие повышенного уровня нуклеазной активности.
3.5. Локализация панкреатической рибонуклеазы в тканях трансгенных растений табака и количественная оценка содержания трансгенного белка.
3.6. Получение трансгенных растений картофеля.
3.7. Анализ полученных трансформантов картофеля на экспрессию маркерного гена и наличие инсерции в геномной ДНК.
3.8. Анализ полученных трансгенных растений картофеля на наличие повышенного уровня нуклеазной активности.
3.9. Анализ спектра белков с нуклеазной активностью с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидном activity-геле.
3.10. Анализ полученных трансгенных растений табака на устойчивость к вирусу табачной мозаики (TMV).
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.