Влияние регуляторных элементов и структуры кодонов на экспрессию бактериальной формиатдегидрогеназы в клетках E. coli Савицкий, Павел Александрович

Краткое описание

Савицкий,ПавелАлександрович.ВлияниерегуляторныхэлементовиструктурыкодоновнаэкспрессиюбактериальнойформиатдегидрогеназывклеткахE.coli: диссертация ... кандидата химических наук : 03.00.23. - Москва, 1999. - 136 с.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
московский ГОСУДАРСТВЕННЫЙ им. М.В. Л О М О Н О С О В А УНИВЕРСИТЕТ ХИМИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ На правах рукописиСАВИЦКИЙНавелАлександровичВЛИЯНИЕРЕГУЛЯТОРНЫХЭЛЕМЕНТОВИСТРУКТУРЫКОДОНОВНАЭКСПРЕССИЮБАКТЕРИАЛЬНОЙФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫВКЛЕТКАХЕ. СОЫ. 03.00.23 - БИОТЕХНОЛОГИЯ Диссертация на соискание

стр. 9
Таблица 1. Промоторы, использовавшиеся дляэкспрессиигенов вклетках£ .coli. Промотор 1ас {Е.coli) trp (Е.coli) Ipp (Е.coli) phoA {E.coli) recA (E.coli) araBAD (E.coli) proU (E.coli) est-] (E.coli) tetA {E.coli) cadA (E.coli) tac (ß.coli) trc (E.coli) Pl(^) Регуляция lad, lacf, lacI(Ts),

стр. 113
4°С. Однако, к сожалению, во всех трех случаях снизился 113 1200 - Время, ч Рис. 28.Влияниеструктурыпромотора и копийности вектора наэкспрессиюформиатдегидрогеназы. Таблица 25.Влияниекопийности вектора иструктурыпромотора наэкспрессиюформиатдегидрогеназыклетками£. со//ВЬ21(ВЕЗ)/р1у88. Время,

Оглавление диссертациикандидат химических наук Савицкий, Павел Александрович
I. ВВЕДЕНИЕ.
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
Глава 1. ЭКСПРЕССИЯ ЧУЖЕРОДНЫХ ГЕНОВ В КЛЕТКАХ Е. coli.
1.1. Структура векторов Е. coli, обеспечивающих эффективную экспрессию.
1.2. Регуляция транскрипции.
1.2.1. Промоторы.
1.2.2. Терминаторы транскрипции.
1.2.3. Антитерминаторы транскрипции.
1.2.4. Системы экспрессии со строгой регуляцией промотора.
1.3. Регуляция трансляции.
1.3.1. Инициация трансляции мРНК.
1.3.2. Усилители трансляции.
1.3.3. Стабильность мРНК.
1.3.4. Терминация трансляции.
1.4. Внутриклеточная локализация экспрессируемых белков.
1.4.1. Цитоплазматическая локализация.
1.4.2. Секреция в периплазму.
1.4.3. Секреция в среду культивирования.
1.5. Частота использования ко донов в чужеродном гене и в клетках Е. coli.
1.6. Протеолиз экспрессируемых белков.
1.7. Условия культивирования бактерий.
Глава 2. СТРУКТУРА ГЕНА ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ И
ПРИЛЕГАЮЩИХ К НЕМУ ОБЛАСТЕЙ.
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1. Материалы.
3.2. Методы исследования.
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Глава 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА
ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ.
4.1. Оптимизация экспрессии в системе TGl/pFDH6.
4.2. Оптимизация структуры ко донов в гене формиатдегидрогеназы.
4.3. Оптимизация рибосомсвязывающего участка.
4.4. Оптимизация промоторного участка гена формиатдегидрогеназы.
4.5. Оптимизация условий культивирования клеток Е. coli BL21(DE3)/plysS/pFDH8.
4.6. Увеличение стабильности суперэкспрессирующих формиатдегидрогеназу векторов.
4.7. Объединение в одном векторе оптимизированных регуляторных элементов и оптимизированной структуры гена.
V. ВЫВОДЫ.