Экстрахромосомные ДНК дрожжей-сахаромицетов Аверьянов, Александр Владимирович

Короткий опис

Аверьянов,АлександрВладимирович.ЭкстрахромосомныеДНКдрожжей-сахаромицетов: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.23. - Ленинград, 1983. - 1983 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 7
неясными вопросы о фракционном составеэкстрахромосомныхДНКдрожжейи механизме их репликации. Кроме того, большая часть работ по исследованиюэкстрахромосомныхДНКдрожжейбыла выполнена в зарубежных лабораториях* Поэтоцу, штаммыдрожжей, имеющиеся в отечественных генетических коллекци­ ях, оставались мало

стр. 7
дующие задачи:ДНКиз ранных подобрать оптимальный метод экстракцииэкстрахромосомныхдрожжевых клеток; выделить и проанализироватьэкстрахромосомныеДНКиз выб­ дрожжевых штаммов; 8 ^ оценить содержаниеэкстрахромосомныхДНКв исследуемых штаммах и попытаться обнаружить факторы, определяющие содержа­

стр. 11
рибосоглальных генов или 3 мкмДНКи криптическая плазмидасахаромицетов- 2 мкмДНК, она же омикроннаяДНКили scp . 2.1. 2 мкмДНКдрожжей-сахаромицетов2.I.I.

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Аверьянов, Александр Владимирович
1. Введение
2. Обзор литературы.
2.1. 2neecm ДНК дрожжей-сахарошцетов . II
2.1.1. Структура и физико-химические свойства дрожжевой плазмиды ••••••.II
2.1.2. Внутриклеточная локализация 2мкм ДНК
2.1.3. Репликация 2шш ДНК.
2.1.4. функциональное значение 2мкм ДНК ••••••
2.2. Экстрахромосомная рДНК (Змкм ДНК) дрожжей
2.3. Митохондриалъная ДНК дрожжей-сахаромицетов.
2.4. Генетическая трансформация дрожжей.
3. Материалы и методы исследований.
3.1. Микробиологические методы . ;.
3.1.1. Бактериальные штаммы и условия культивирования бактерий.
3.1.2. Трансформация бактериальных клеток
3.1.3. Дрожжевые штаммы и условия культивирования дрожжей.
3.1.4. Трансформация дрожжей
3.2. Биохимические методы.
3.2.1. Выделение тотальной дрожжевой ДНК
3.2.2. Выделение суперспирализованной дрожжевой ^
3.2.3. Выделение бактериальной плазмпдной ДНК
3.2.4. Раскапывание градиентов и подготовка к определению радиоактивности исследуемого материала.
3.2.5. Фракционирование ДНК в градиентах нейтрального хлористого цезия.
3.2.6. Синтез комплементарной радиоактивной РНК
3.2.7. РНК-ДНК гибридизация
3.2.8. Рестрикция ДНК и лигирование рестрик-ционных фрагментов
3.2.9. Электрофорез ДНК в агарозном геле
3.2.10. Определение концентрации ДНК спектро-флюорометрическим методом
3.2. II. ^акционирование РНК электрофорезом ^
3.2.12. Фотографирование флюоресцирующей ДНК в УФ.
3.2.13. Определение радиоактивности препара
4. Результаты исследований.
4.1. Выделение ковалентно-замкнутых ДНК дрожжей.
4.2. Рестрикционный анализ «№лкм ДНК.
4.3. Исследование сравнительного содержания 2мкм
4.3.1. Очистка ДНКазы от РНКазных примесей.
4.3.2. Получение и очистка транскрипта 2шш
4.3.3. Определение зависимости уровня гибридизации от количества ДНК на фильтре
4.3.4. Определение влияния избытка гетерологи-чной ДНК на уровень гибридизации 3Н-кРНК.
4.3.5. Определение содержания 2мкм ДНК в различных штаммах дрожжей.
4.4. Определение природы минорной фракции ДНК в препаратах кольцевых ковалентно-замкнутых молекул
4.4.1. Очистка и определение плавучей плотности минорной фракции кз ДНК.
4.4.2. Гиб^цизация кзДНК с Н-транскриптом мтДНК.
4,4.3. Электронная микроскопия легкой Фракции кзДНК.I
4.5. Конструирование двухрепликонной дрожжевой плазмиды.
4.5.1. Конструирование плазмиды.
4.5.2. Селекция и идентификация рекомбинантной плазмиды.
4.5.3. Проверка трансформирующей активности и генетической стабильности плазмиды в дрожжевых клетках.
5. Обсуждение результатов.
Выводы.