ГТФ-связывающий белковый комплекс наружных сегментов палочек сетчатки лягушки Тищенков, Владимир Григорьевич

Короткий опис

Тищенков,ВладимирГригорьевич.ГТФ-связывающийбелковыйкомплекснаружныхсегментовпалочексетчаткилягушки: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.02. - Москва, 1983. - 201 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
и МИНИСТЕРСТВЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР На правах рукописи УДК 577.354.2:577.152.254ТищенковВладимирГригорьевичГТФ-СВЯЗЫВАЮЩИЙБЕЛКОВЫЙКОМПЛЕКСНАРУЖНЫХСЕГМЕНТОВПАЛОЧЕКСЕТЧАТКИЛЯГУШКИ(03.00.02 - биологическая физика) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук 1^^^ I Научные

стр. 7
(КШ 3.6.1.15) АЦ Щд N С - аденилатциклаза (КШ.4.6.1.1) - фосфодиэстераза циклических нуклеотидов {Ш 3.1.4.17) -ГТФсвязывающийбелок гормональной рецепции - каталитическая субъединица аденилатциклазы SDS - додецилсульфат натрия 8 ВВЕДЕНИЕ Данная работа посвящена характеристике ГТ$-связывающегобелковогокомплексанаружныхсегментовпалочек(НСП)сетчаткилягушки, в частности, выяснению механизма образования активного ( =...

стр. 10
al. , I98I/ пред­ ложили обозначать Т^, т^ ,Т^ соответственно. Ряд данных, изло­ женных ниже, позволяет утверждать, tiro НСПсетчаткилягушкии быка имеют аналогичныйкомплексбелков, представленный близкими по молекулярному весу полипептидами, поэтому, следуя введенным обозначениям,ГТФ-связывающийбелковыйкомплексНСПсетчаткиля­ гушкимы будем называть трансдуциномлягушки. Представленные нами результаты...

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Тищенков, Владимир Григорьевич
Принятые сокращения.
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
ГЛАВА I. СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ НАРУЖНОГО СЕГМЕНТА
ПАЛОЧКИ СЕТЧАТКИ ПОЗВОНОЧНОГО.
1. Морфология фоторецепторной клетки. Электрический ответ фоторецептора.
2. Медиаторный механизм передачи сигнала в НСП. Требования к медиатору.
3. Попытки экспериментального подтверждения кальций--медиаторной гипотезы Хагинса.
4. Циклические нуклеотиды могут являться медиатором в передаче возбуждения в фоторецепторе.
ГЛАВА 2. ФУНКЦИИ ГТФ-СВЯЗЫВАЩИХ БЕЛКОВ.
1. N -белки в механизмах гормональной рецепции.
2. Участие ГТФ-связывающих белков в процессе элонгации трансляции прокариот.
3. Участие ГТФ-связываялцего белка в механизме активации светозависимой ЩЦЭ в НСП.
4. Постановка задачи исследования.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Материалы.
2. Получение препаратов наружных сегментов палочек сетчатки лягушки.
3. Получение мембран дисков наружных сегментов (ЦДНС).
4. Получение препарата,обогащенного водорастворимыми белками НСП.
5. Центрифугирование НСП в градиенте плотности сахарозы,
6. Очистка комплекса белков НСП, обладающих светоза-висимой сорбцией на фоторецепторные мембраны.
7. Термоденатурация препаратов и супернатанта НСП.
8. Электрофоретическое разделение белков в полиакрил-амидном геле ( ббб -электрофорез).
9. Электрофорез белков в неденатурирующих условиях.
10. Разделение водорастворимых белков методом гель-фильтрации на Сефакриле Б-200.
11. Изоэлектрофокусирование белков в амфолинах.
12. Связывание гуаниловых нуклеотидов с препаратами НСП.
13. Измерение Са -связывающей способности фракций, полученных после гель-фильтрации белков супернатанта НСП.
14. Тонкослойная хроматография нуклеотидов.
15. Приготовление растворов с заданной концентрацией свободного Са
16. Фосфорилирование ГДФ, связанного с нуклеотид-связывающими центрами НСП.
17. Определение аденилаткиназной активности.
18. Измерение гуанозиндифосфактиназной КФ 2.7.4.6 активности.
19. Методы измерения нуклеозидтрифосфатазных активностей.
20. Определение концентрации белка.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ГЛАВА I. ГТФ-связывающий белковый комплекс НСП сетчатки лягушки.
1. Зависимость связывания /^Н/ГЦЦФ препаратами НСП от количества обесцвеченного родопсина.
2. sds -электрофорез в ПААГе белков супернатанта НСП. so
3. Изоэлектрофокусирование белков супернатанта НСП.
4. "Комплекс Кюна" из НСП сетчатки лягушки.
5. Гель-фильтрация белков супернатанта и идентификация ГТФ-связывающего белка.
6. Термоинактивация ГТФ-связывающей способности супернатанта НСП.
ГЛАВА 2. Обменный механизм формирования активного состояния трансдуцина НСП сетчатки лягушки.
1. Кинетические характеристики процессов связывания /3Н/ГВДФ и /14С/ГДФ препаратами НСП.
2. Характеристика процессов диссоциации комплексов гуаниловых нуклеотидов с препаратами НСП.
3. Оценки констант диссоциации гуаниловых нуклеотидов с нуклеотидсвязываюгцими центрами НСП.
ГЛАВА 3. Фосфорилирование ГДФ, связанного препаратами НСП сетчатки лягушки, как возможный механизм формирования активного состояния трансдуцина.
1. Фосфорилирование связанного ГДФ.
2. Влияние АТФ на связывание ГДФ препаратами НСП.
ГЛАВА 4. Фосфотрансферазные активности, катализируемые трансдуцином НСП сетчатки лягушки.
1. Аденилаткиназная активность препаратов НСП.
2. Аденилаткиназная активность водорастворимой фракции НСП.
3. ГДФкиназная активность различных типов препаратов
НСП и водорастворимой фракции НСП.
4. Термоинактивация АК, ГДФкиназной активностей и ЩЦФ--связывающей способности препаратов супернатанта НСП.
5. Светозависимость ГДФкиназной активности.
ГЛАВА. 5. Нуклеозидтрифосфатазные активности препаратов НСП.
1. Гидролиз ГТФ при низких (менее I мкМ) концентрациях.
2. Сопряженные ферментативные реакции в НСП.
3. Нуклеозидтрифосфатазные активности препаратов НСП.
4. Распределение ГТФазной активности во фракциях, полученных при гель-фильтрации белков супернатанта
5. Термоинактивация НТФазных активностей.
ГЛАВА 6. Модуляция ферментативных активностей трансдуцина ионами кальция. Возможная функциональная роль субъединицы трансдуцина.
1. Регуляция ионами кальция гидролиза , связанного ГТФ.
2. Зависимость ГДФкиназной активности от концентрации ионов кальция.
3. Модуляция нуклеозидтрифосфатазных активностей.
4. Са*"+-связывающая способность фракций, полученных при гель-фильтрации препарата супернатанта НСП.
5. Термостабильность фактора, обеспечивающего Са^+ регуляцию ГТФазной активности Т^ и т^ субъединиц трансдуцина.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОД*.