Изучение Д-глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы при помощи катионного флуоресцентного зонда - аурамина О Кличко, Владимир Иванович

Короткий опис

Кличко,ВладимирИванович.ИзучениеД-глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназыприпомощикатионногофлуоресцентногозонда-аураминаО: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04. - Москва, 1984. - 179 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
М.В.ЛОМОНОСОВА На правах рукописиКЛИЧКОВЛАДИМИРИВАНОВИЧУДК 577. 158. 342ИЗУЧЕНИЕД-ГЛЙЦЕРАЛЬДЕГЙД-З-ФОСШАТДЕГВДРОГЕНАЗЫПРИпомощиКАТИОННОГОФЛУОРЕСЦЕНТНОГОЗОНДА-АУРАМИНАО / 03.00.04 - Биохимия / Диссертация на соискание учёной степени . кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических

стр. 2
2.1. Значение конформационных проб для исследования ферментов ния ферментов " . . Г.* '" • . 30 31 37 38 39 43 46 47 51 52 2.2. Применениефлуоресцентныхзондовдля исследова­ 2.3. Природафлуоресцентныхзондов2.4. Участки белков, свяяывающиезонды2.5. Поляриметрические методы в исследованиях, связан­ ных с применением конформационныхзондов. . . . 2.6.ФлуоресцентныесвойствааураминаО 2.7.АураминО как...

стр. 69
отдельном опыте определяли интенсивность флуоресценции полностью связанного с белкомзонда/^,приконцентрациизондаС. Эти данные использовали для расчета интенсивности (1и1уоресценции г' I полностью связанногозондагприконцентрациях С ,используемыхпрититровании,Расчеты проводили по формуле: 'о

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Кличко, Владимир Иванович
ВВЕДЕНИЕ.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. Структура и свойства Д-глицеральдегид-З-фосфатде-гидрогеназы.
1.1. Строение молекулы ГАФД
1.2. Структура активного центра ГАФД.
1.3. Кооперативные свойства ГАФД.
1.4. "Полуцентровые" свойства ГАФД.
1.5. Модели, объясняющие строение ГАФД.
1.6. Значение димер-димерной организации ГАФД в процессе катализа.
2. Применение конформационных зондов.
2.1. Значение конформационных проб для исследования ферментов." ГТ.
2.2. Применение флуоресцентных зондов для исследования ферментов.•.
2.3. Природа флуоресцентных зондов.
2.4. Участки белков, связывающие зонды.
2.5. Поляриметрические методы в исследованиях, связанных с применением конформационных зондов
2.6. Флуоресцентные свойства аурамина
2.7. Аурамин 0 как конформационный зонд.
2.8. Применение аурамина 0 для исследования алкоголь-дегидрогеназы /АДГ/ из печени
2.9. Применение аурамина 0 для исследования алкого'ль-дегидрогеназы /АДГ/ из дрожжей
2.10.Взаимодействие алкогольдегидрогеназы с другими катионными зондами
2.11. Применение производных зтеноцитозина для исследования ГАЩЦ.
МАТЕРИМЫ И МЕТОДЫ.
1. Использованные реактивы.
2. Определение концентраций и приготовление растворов реактивов
3. Выделение ГАЩЦ из пекарских дрожжей
4. Выделение ГАЩЦ из скелетных мышц кролика
5. Получение алофермента ГАЗЩ из мышц кролика.
6. Определение концентрации белка в препаратах ГАЩЦ
7. Определение энзиматической активности ГАЩЦ
8. Избирательная модификация ЗН-групп активных центров: фермента иодацетатом и иодацетамидом.
9. Флуориметрические исследования.
10. Титрование белка красителем
11. Титрование комплекса ГАЩЦ-аурамин 0 лигандами
12. Спектрофотометрические измерения.
13. Поляриметрические исследования.
14. Исследования методом равновесного диализа
15. Седиментационный анализ.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Флуоресценция аурамина 0, связанного с ГАЗЩ.
2. Влияние рН среды на флуоресценцию связанного аурамина
3. Влияние ионов на связывание аурамина 0 с ГАЗЩ
4. Флуоримиетрическое титрование препаратов фермента аурамином 0.
5. Исследование связывания флуоресцентного зонда дегидрогеназой методом равновесного диализа
6. Связывание акридинового оранжевого с ГАЩ из пекарских дрожжей
7. Влияние НАД на флуоресценцию и связывание аурамина 0 с ГАФД.
8. Влияние НДЦН на флуоресценцию и связывание аурамина 0 с ГАЩ
9. Исследование связывания аурамина 0 с ГАЩЦ методом кругового дихроизма
10. Взаимодействие с ГЛЩЦ никотинамидмононуклеотида . . III
11. Влияние аденинсодержащих фрагментов. НАЦ на связывание аурамина 0 с ГАЩЦ и на флуоресцентные характеристики зонда.
12. Влияние субстрата и его аналогов на связывание аурамина 0 с ГАЩЦ и флуоресцентные характеристики зонда
13. Изучение модифицированного фермента.
13.1. Модификация фермента Д1НБ.
13.2. Модификация фермента алкилирующими агентами
14. Влияние аурамина 0 на реакцию, катализируемую ГАФД
15. Изучение способности аурамина 0 связываться с субъединицами ГАЩЦ в различных функциональных состояниях.
ЗдаюЧЕНИЕ. вывода.i6i