Изучение экспрессии гетерологичнын и собственнык генов у трансгеннык растений

Короткий опис

СодержаниеОГЛАВЛЕНИЕВведение... 5Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 151.1. Стабильность экспрессии и наследование чужеродных генов у трансгенных растений... 151.1.1. Клонирование генов для переноса их в геном растений... 151.1.2. Создание генетических конструкций... 161.1.3. Перенос созданных генетических конструкций в геном растений... 181.1.3.1. Агробактериальная трансформация: генетическая карта Ti-плазмиды и Т-ДНК... 191Л .3.2. Общая схема переноса Т-ДНК в клетки растений... 201.1.3.3. Перенос векторных последовательностей в процессеагробактериальной трансформации... 241.1.4. Оценка трансгенных растений по стабильности экспрессии перенесенных генов и отбор отдельных трансформантов для дальнейшей селекционной доработки... 26 -1.1.4.1. Наследование трансгенов у трансгенных растений... 2611.1.4.2. Вариабельность экспрессии перенесенных генов... 271.2. Изменение экспрессии перенесенных генов в новом окружении генома растений: эффект замолкания... 30*1.2.1. Частота инактивирования трансгенов у независимо полученных трансгенных растений... 301.2.2. Возможные причины инактивирования трансгенов... 311.2.3. Молекулярные механизмы инактивации трансгенов... 371.2.4. Генетический контроль инактивации/реактивации трансгенов 401.3. Изменение проявления1 собственных генов у трансгенных растений: Т-ДНК-индуцированные мутации... 421.3.1. Возможные причины возникновения Т-ДНК индуцированных мутаций... 421.3.2. Примеры Т-ДНК индуцированных мутаций у трансгенных растений... 451.3.3. Перспективы использования инсерционного мутагенеза... 53Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ... 552.1. Создание исходного материала... 552.2. Подтверждение трансгенной природы растений-трансформантов 592.3. Анализ стабильности экспрессии маркерного гена nptll на селективных средах с антибиотиком канамицином... 602.4. Анализ фрагментов векторной ДНК у трансгенных растений... 622.5. Создание коллекции трансгенных растений табака с мутантным фенотипом... 642.6. Анализ цитологического фенотипа трансгенных растений, характеризующихся измененной структурой цветка и пониженным уровнем мужской фертильности... 65Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ... 673.1. Анализ популяции трансгенных растений табака по стабильностиэкспрессии маркерного гена nptll... 673.1.1. Анализ трансгенных растений табака сорта «Gatersleben» по стабильности экспрессии nptll-гена... 673.1.2. Анализ трансгенных растений табака линии SR1 по стабильности экспрессии nptll-геш... 693.1.3. Анализ инактивированного состояния гена nptll у трансгенных растений То-10, Nu22 и 615... 723.1.4. Анализ стабильности экспрессии и наследование гена nptll у трансгенных растений табака (линия SR1) с одной инсер-цией Т-ДНК на геном... 733.1.5. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных растений табака (линия SR1) со множественными инсер-циями Т-ДНК на геном... 783.1.6. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных растений табака с отклонениями от менделевского расщепления... 813.2. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных растений табака при инбридинге... 893.2.1. Наследование гена nptll у трансгенных растений линий То-5 иТ0-6... 893.2.2. Анализ нестабильности экспрессии гена nptll у растений линий То-5 и То-6... 96*3.2.3. Анализ взаимодействия аллелей гена nptll у трансгенных растений линии То-5... 1083.3. Моделирование нестабильной экспрессии чужеродных генов у трансгенных растений... 1193.4. Т-ДНК-индуцированные мутации у трансгенных растений табака 1273.4.1. Создание и анализ коллекции трансгенных растений табакас мутантным фенотипом... 1273.4.2. Анализ цитологических нарушений мейоза у трансгенных растений табака линии Res79... 14443.4.3. Интеграция векторной ДНК в геном трансгенных растений табака... 1563.4.3.1. Анализ трансгенных растений табака с мутантным фенотипом на наличие в геноме векторной ДНК... 1563.4.3.2. Анализ трансгенных растений табака, не проявляющих мутантного фенотипа, на наличие в геноме векторной ДНК... 1593.4.4. Анализ районов встраивания Т-ДНК инсерций у трансгенных растений табака с мутантным фенотипом... 161Заключение... 165Выводы... 172Список литературы... 174Приложение... 192