Изучение роли антикогена р53 в механизме устойчивости клеток к трансформации онкогеном ras Иванов, Алексей Валентинович

Короткий опис

Иванов,АлексейВалентинович.Изучениеролиантикогенар53вмеханизмеустойчивостиклетокктрансформациионкогеномras: диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03. - Москва, 1999. - 153 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 4
тетрациклин-регулируемой экспрессии трансгенов вклеткахмлекопитающих 3.6. Получение различных линийклетокс тетрациклин-регулируемой экспрессиейонкогенаrasиизучениекинетики активации белка р53 под действиемонкогенаrasвклеткахREF52 3.7.Изучениевлиянияонкогенаrasна частоту возникновения спонтанных генетических

стр. 7
[Franza, 1986]. До последнего временимеханизмустойчивостинормальныхклетокктрансформациипри введении одногоонкогенаrasтакже как ирольр53 в этоммеханизмеоставались невыясненными. 7 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 1.1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ АКТИВНОСТИ АНТИОНКОГЕНА Р53. 1.1.1. Структура белка р53. р53 представляет

стр. 80
экспрессии белка р53 вклеткахREF52 при введении кооперирующихонкогеновтуе иras. ЛинияклетокREF52 как и первичныеклеткитребует для успешнойтрансформациионкогеномrasдействия других кооперирующихонкогенов, таких как с-туе, Е1А аденовируса, большой Т-антиген вируса SV40 или мутантный р53. Так как

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Иванов, Алексей Валентинович
страница
Содержание.2
Список принятых сокращений.
ВВЕДЕНИЕ.6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.В
1.1 БИОЛОГИЧЕСКИЕ АКТИВНОСТИ АНТИОНКОГЕНА Р53.
1.1.1. Структура белка р53.
1.1.2. Транскрипционные мишени белка р53.:.
1.1.2.1. Гены, активация которых способствует замедлению клеточного цикла.
1.1.2.2. Гены, участвующие в р53-зависимом апоптозе.
1.1.2.3. Гены, кодирующие ингибиторы ангиогенеза и другие секретируемые факторы.
1.1.3. Латентное и активированное состояние белка р53.
1.1.4. Активация р53 в ответ на стрессы.
1.2. ДОМИНАНТНЫЙ ОНКОГЕН RAS.
1.2.1 Структура и биохимические свойства Ras.
1.2.2 Эффекторы Ras.
1.2.3 Эффекторы: МАРК каскад и транскрипционные факторы.
1.2.4 Ras-индуцированная трансформация клеток линий иммортализованных фибробластов грызунов.
1.3. КООПЕРАЦИЯ ОНКОГЕНОВ И АКТИВАЦИЯ Р53 ПРИ ТРАНСФОРМАЦИИ.
1.4. СИСТЕМА ТЕТРАЦИКЛИН-РЕГУЛИРУЕМОЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ TET-OFF.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клеточные линии и их культивирование.
2.2. Лизис клеток и приготовление ядерных экстрактов.
2.3. Измерение концентрации белка по методу Бредфорд.
2.4. Пульсовое мечение белка [358]-метионином и иммунопреципитация.
2.5. Фракционирование белков в полиакриламидном геле.
2.6. Перенос белков из гелей на фильтры и иммунодетекция.
2.7. Получение компетентных клеток Е.соИ и трансформация.
2.8. Препаративное и аналитическое выделение плазмидной ДНК.
2.9. Обработка ДНК рестрикционными эндонуклеазами.
2.10. Фракционирование и извлечение ДНК из агарозных гелей.
2.11. Реакция лигирования.
2.12. Конструирование ретровирусных векторов.
2.13. ПЦР при конструировании ретровирусных векторов.
2.14. Трансфекция ретровирусных и плазмидных конструктов методом кальций-фосфатной преципитации.
2.15. Инфекция клеток рекомбинантными ретровирусами и селекция на антибиотике устойчивых культур.
2.16. Анализ распределения клеток по клеточному циклу.
2.17. Выделение РНК из эукариотических клеток, ОТ-ПЦР-анализ и секвенирование кДНК р53.
2.18. Анализ активности хлорамфеникол-ацетилтрансферазы (САТ-реакция).
2.19. Количественное определение флуоресценции зеленого белка (ЕОБР).
2.20. Хромосомный анализ.
2.21. Изучение способности клеток входить в 8-фазу клеточного цикла по включению ими 5-бромдезоксиуридина.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Анализ способности различных клеточных культур трансформироваться под действием онкогена ras в зависимости от состояния в них сигнального пути, ведущего к активации р53.
3.2. Исследование эффективности трансформации и экспрессии белка р53 в клетках REF52 при введении кооперирующих онкогенов туе и ras.
3.3. Анализ конформационного состояния и функциональной активности белка р53 в контрольных и трансформированных онкогенами туе + ras клетках REF52.
3.4. Генетический анализ изменений в гене р53 в трансформированных онкогенами mye + ras клетках REF52.
3.5. Создание и характеристика высокоэффективной ретровирусной системы для тетрациклин-регулируемой экспрессии трансгенов в клетках млекопитающих.
3.6. Получение различных линий клеток с тетрациклин-регулируемой экспрессией онкогена ras и изучение кинетики активации белка р53 под действием онкогена ras в клетках REF52.
3.7. Изучение влияния онкогена ras на частоту возникновения спонтанных генетических нарушений в клетках с различным состоянием р53-зависимого сигнального пути.
4. ВЫВОДЫ.
5. БЛАГОДАРНОСТИ.