Изучение стабильности экспрессии чужеродный генов у трансгеннык растений таБака (Nicotiana tabacum L. )

Короткий опис

СодержаниеОГЛАВЛЕНИЕСПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...5ВВЕДЕНИЕ...6ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...141.1 Получение трансгенных растений: общие сведения...141.2 Наследование чужеродных генов и вариабельность их экспрессии утрансгенных растений...201.3 Инактивация чужеродных генов в растительном геноме...241.4 Молекулярно-генетические механизмы инактивации чужеродной ДНК в ядерном геноме трансгенных растений...321.4.1 Структура и местоположение экзогенной ДНК в растительном геноме...321.4.2 Замолкание экспрессии трансгена и модификация ДНК...341.4.3 Мутации растительных генов, влияющих на процесс инактивации экспрессии чужеродной ДНК...401.5 Примеры инактивации экспрессии множественных копий собственных • растительных генов...501.6 Инактивация экспрессии множественных копий генов у грибов-аскомицетов...521.7 Использование феномена инактивации экспрессии множественных копий генов для целенаправленного выключения экспрессии растительных генов...541.8 Стратегия предотвращения инактивации целевых генов в трансформированных растениях...56ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ...62ф. 2.1 Получение трансгенных растений табака...622.2 Типы генетических конструкций...632.3 Гибридологический анализ трансгенных растений табака...6532.4 Определение активности неомицинфосфотрансферазы II in situ...672.5 Флуориметрическое определение активности р-глюкуронидазы в листьях трансгенных растений табака...682.6 Выделение геномной ДНК из листьев табака...692.7 Саузерн блот гибридизация геномной ДНК трансгенных растенийтабака...702.8 Выделение РНК из растительной ткани и точечный Нозерн блоттинг...702.9 Подтверждение наличия дупликаций в области инсерции Т-ДНК с помощью метода ПЦР...712.10 Проверка исходных трансформантов на присутствие в растительном геноме векторных последовательностей с помощью метода ПЦР...722.11 Элекгрофоретический анализ ДНК...73ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ...743.1 Стабильность экспрессии маркерного гена nptll у гибридов от скрещиваниятрансгенных растений табака с одной инсерцией Т-ДНК...743.2 Анализ стабильности наследования гена nptll у трансгенных растений табака сомножественными инсерциями Т-ДНК...813.3 Моделирование влияния дупликации в структуре Т-ДНК на стабильность экспрессии маркерных генов nptll и uidA в трансгенных растениях табака...873.3.1 Сравнительный анализ стабильности экспрессии гена nptll в первом и втором поколениях от самоопыления трансгенных растений табака (с одной копией гена uidA и с дупликациями данного гена в составе Т-области)...873.3.2 Анализ активности ферментов (5-глюкуронидазы и NPTII в двух группах трансгенных растений табака (с одной копией гена uidA и прямой дупликацией данного гена)...923.3.3 Анализ стабильности экспрессии гена nptll у гибридов Fi от различных типов скрещиваний...9843.3.4 Встраивание векторных последовательностей в растительный геномисходных трансгенных растений табака...ПО3.4 Мозаичный характер проявления экспрессии гена nptll в трансгенных растениях табака модельной линии Nu 21...113ЗАКЛЮЧЕНИЕ...144ВЫВОДЫ...148