Моделирование гетерохроматиновых районов у трансгенных мышей при переносе фрагмента сатДНК IV Bos taurus L. Попов, Алексей Вячеславович

Короткий опис

Попов,АлексейВячеславович.МоделированиегетерохроматиновыхрайоновутрансгенныхмышейприпереносефрагментасатДНКIVBostaurusL. : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.15. - Санкт-Петербург, 1999. - 151 с. : ил.больше
Цитаты из текста:

стр. 1
ВСЕР0ССИЙС1СИЙ И РАЗВЕДЕНИЯ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ ЖИВОТНЫХ На правах рукописи УДК 576.312.32ПОПОВ/АлексейВячеславовичМОДЕЛИРОВАНИЕГЕТЕРОХРОМАТИНОВЫХРАЙОНОВУТРАНСГЕННЫХМЫШЕЙПРИПЕРЕНОСЕФРАГМЕНТАсатДНКIVBOSTAURUSL. Специальность 03.00.15 - генетика

стр. 44
вблизигетерохроматиновыхрайонов, а также гетерохроматинизацию молчащих последовательностей чужеродной ДНК в генометрансгенныхмышейразличных линий. Например, экспрессии человеческого гена Hprt, анализ в интегрированногогетерохроматиновыйрайонY-хромосомымышей, показал наличие разных уровней активности

стр. 46
В1«аш-,Ьо,1986(1);В1811ор,8тй11,1989). 46 Еще одним направлением помоделированиюгетерохроматиновыхрайоновявляется создание искусственных центромер утрансгенныхживотных с помощьюпереносасателлитных ДНК. Наиболее распространенной моделью для этого является ДНК а-сателлита человека. Например,переносс последующей

Оглавление диссертациикандидат биологических наук Попов, Алексей Вячеславович
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
1. ВВЕДЕНИЕ.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Молекулярно-генетические и цитологические особенности гетерохроматиновых участков хромосом.
2.1.1. Цитологические особенности гетерохроматина.
2.1.2. Молекулярно-генетические особенности гетерохроматина.
2.1.3. Генетическая организация гетерохроматина.
2.2. Функциональная роль гетерохроматина.
2.2.1. Гетер охр ом ати н как организатор интерфазного яппя и пегулятоп поведения хпомооом Ч X" «/ ~ ' Г " ' ' " ~ -Г
2.2.2. Гетерохроматин как регулятор процессов спаривания хромосом в мейозе.
2.2.3. Защитная функция гетерохроматина.
2.2.4 Гетерохроматин - хранилище регуляторных белков в метайазных хромосомах.
2 2.5. Гетерохроматин и кроссинговер.
2.2.6. ЭОДектположения
2.2.7. Гетерохроматин и эволюция.
2.3. Изучение гетерохроматина при помощи методов переноса генов.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ,.
ЛТ» к si. 1 выделение фрсим^ша uxuidwî kj Va.i-VJU1J;1JLCI x,ijs i/vivl .~>j
3.2 Получение трансгенных животных
3.3 Скпининг тпансгенного потомства с помощью PCR.
3.4 Приготовление препаратов клеточных ядер и метафазных хромосом.
3.5.1 Приготовление препаратов хромосом и клеточных ядер доимплантационных эмбрионов.
3.5.2 Приготовление препаратов из мышиных зародышей десятого дня развития.
3.5. 3 Приготовление препаратов клеточных ядер и метафазных хромосом из костного мозга и крови взрослых животных.
3.6 Дифференциальное окрашивание препаратов метафазных хромосом зародышей мышей.
3.6.1 Обработка флуорохромом хромомицин A3.
3.6.2 С-окрашивание препаратов метафазных хромосом.
3.6.3 Выявление сестринских хроматидных обменов (СХО).
3.7 Проведение флуоресцентной in situ гибридизации на препаратах интерфазных ядерклеток крови трансгенных животных.
3.8 Анализ характера метилирования фрагмента сатДНК IV в геноме трансгенных животных.
3.9 Проведение реакции PCR in situ.
3.10 Определение копийности трансгена при помощи количественной PCR.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1. Разработка или адаптация различных молекулярно-генетически методов для работы с трансгенными животными.
4.1.1 Адаптация метода PCR in situ для скрининга трансгенных животных.
4.1.2. Разработка способа оценки копийности трансгенов при помощи ПЦР.
4. 2. Получение трансгенных животных, несущих искусственные гетерохроматиновые блоки.
4.2.1. Скрининг трансгенных животных.
4.2. 2. Скрининг трансгенных животных при помощи метода PCR in situ.
4.2.3. Локализация сайтов интеграции чужеродной ДНК у трансгенных животных.
4. 2 .4. Дифференциальное окрашивание хромосом трансгенных животных.
4.2.4.1. Выявление искусственных гетерохроматиновых районов.
4.2.4.1.1. Определение интерстициального
С-гетерохроматина.
4.2.4.1.2 Определение прицентромерного СМА3-диска.
4.2.4.2 Определение частоты СХО у трансгенных зародышей.
4.2.5. Оценка методом количественной ПНР копийности фрагмента сатДНК IV, интегрированного в геном трансгенного самца-основателя.
4.2.6. Анализ характера метилирования фрагмента сатДНК IV, интегрированного в геном трансгенного самца-основателя.